Bax对HCC-9204细胞系的凋亡及化疗敏感性的影响

目的研究Bax对HCC-9204细胞系凋亡和对阿霉素敏感性的影响。方法采用脂质体转染法将Bax基因转入HCC-9204细胞中。免疫组织化学分析Bax在HCC-9204细胞中的表达,TUNEL及细胞周期分析细胞凋亡,MTT实验判断肿瘤细胞的活力。结果免疫组化结果显示转染Bax基因的HCC-9204/Bax细胞的Bax表达显著增加。TUNEL检测显示,HCC-9204/Bax细胞的凋亡指数在ZnSO4诱导后24、48h明显增加(3·6±5·3vs27·2±10·5,t=63·45,P<0·05;4·2±4·1vs32·3±8·6,t=93·27;P<0·05),流式细胞仪分析显示,诱导后48h出现显著的“亚二倍体峰”。MTT实验显示Bax基因的过表达能够降低阿霉素处理后的细胞活力,呈时间依赖性。结论Bax基因不仅可以诱导HCC-9204细胞的凋亡,而且能够增加HCC-9204细胞对阿霉素杀伤作用的敏感性。     

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

辣椒素对肝星状细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨辣椒素(capsaicin)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC) T6细胞系生长的影响及其机制.方法 用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测终浓度50、100、150、200 μmol/L的辣椒素对大鼠肝星状细胞T6细胞株生长的影响;采用流式细胞仪检测辣椒素对大鼠肝星状细胞T6细胞凋亡率的影响;Western blotting法检测Bcl-2、Bax、细胞色素酶c(Cyt c)蛋白的表达.结果 辣椒素能显著抑制大鼠肝星状细胞T6细胞株增殖,呈时间浓度依赖性(P<0.05).辣椒素作用24 h后T6细胞凋亡率与对照组相比明显升高(P<0.05),与对照组相比,辣椒素作用组Bcl-2蛋白表达量明显下降,bax蛋白的表达明显上升,Cyt c蛋白的表达明显上升,Bcl-2/Bax灰度值明显下降(P<0.05).结论 辣椒素抑制T6细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是与下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,促进Cyt c蛋白的释放有关.     

Bcl 2和Caspase 3调控他莫昔芬诱导的ER阴性乳腺癌细胞凋亡

目的研究Bcl-2和Caspase-3在他莫昔芬（TAM）诱导ER阴性乳腺癌细胞凋亡中的调控作用。方法在体外培养条件下，用浓度为10μmol／L的TAM作用于雌激素受体（ER）阴性的MDA-MB-231人乳腺癌细胞株12，24，36，48，60h；流式细胞仪检测细胞凋亡率及Bcl-2和Bax的蛋白表达，荧光分光光度仪检测Caspase-3活性，以及加入Caspase-3活性抑制剂Ac—DEVD—CHO后凋亡百分率的变化。结果TAM作用ER阴性乳腺癌细胞后，Bcl-2表达下调，Caspase-3活性增强，细胞凋亡率增加．且有时间依赖性，细胞凋亡在48h达高峰。Bcl-2表达水平与Caspase-3活性变化成负相关（r=-0．921，P〈0．05），但Bax蛋白在药物处理前后无明显变化。加入Ac—DEVD—CHO后，能阻断Caspase-3活化而抑制TAM诱导细胞凋亡。结论TAM通过下调Bcl-2表达而经线粒体途径诱导ER阴性乳腺癌细胞凋亡，Caspase-3的激活在此过程中发挥重要作用。     

三羟基异黄酮诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的：探讨三羟基异黄酮（Genistein）诱导体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及相关机制。方法：体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,不同浓度Genistein作用后,MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot法检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果：在Genistein作用下,增生性瘢痕成纤维细胞的生长受到抑制;细胞凋亡率增加,与对照组相比具有显著性差异（P〈0.05）;Bcl-2的表达下调、Bax、Caspase-3表达增加。结论：Genistein可通过诱导凋亡抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,其作用机制可能与影响Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡调控基因的表达有关。     

腹股沟区皮下埋藏睾丸对生精细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的:通过观察腹股沟区皮下埋藏睾丸生精细胞的凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达,探讨二者的关系。方法:以健康育龄期36只雄性新西兰大白兔为实验动物,随机分成实验组18只、对照组18只。实验组动物将双侧睾丸分别移位埋藏至双侧腹股沟区皮下,以制备睾丸埋藏修复阴囊皮肤缺损模型;对照组未作处理。动物模型建立后第8周末,每组随机取6只大白兔测量睾丸表面温度后进行睾丸活检。睾丸组织行原位末端标记(TUNEL)法检测生精细胞凋亡、免疫组化法结合图像分析仪检测睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:对照组的睾丸表面温度为(36.15±0.64)℃,实验组为(38.02±0.36)℃,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型建立后第8周末实验组睾丸生精小管中生精细胞的凋亡指数(AI)为(89.69士3.76)%,对照组为(7.73±4.95)%,两者比较有显著差异(P<0.05)。实验组Bax表达显著升高(P<0.05),Bcl-2表达显著降低(P<0.05),凋亡细胞主要为初级精母细胞和圆形精子细胞。结论:腹股沟区皮下埋藏睾丸局部温度升高诱导睾丸的生精细胞凋亡增加,生精细胞凋亡增加与Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达升高密切相关。Bcl-2/Bax的改变是高温引起生精细胞凋亡的机制之一。     

淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721的抑增殖和促凋亡作用及其机制。方法:以不同浓度(0,6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μg/mL)的淫羊藿苷作用于SMMC-7721细胞株不同时间(24,48,72 h)后,用MTT法检测药物对SMMC-7721细胞增殖状态;以不同浓度淫羊藿苷作用SMMC-7721细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,用Western blot检测细胞PCNA,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与对照组(0μg/mL)比较,各浓度的淫羊藿苷均明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性(均P<0.05);淫羊藿苷呈浓度依赖性诱导SMMC-7721细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡,下调SMMC-7721细胞PCNA蛋白和Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达(均P<0.05)。结论:淫羊藿苷可抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

下调PAR基因表达对前列腺癌PC3细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的:本研究以RNA干扰技术下调PAR(prostate androgen regulated)基因表达,探讨其对前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及其相关蛋白Bcl-2/Bax表达水平的影响。方法:PC3细胞转染靶向PAR基因的siRNA,MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:PC3细胞PAR基因表达水平下调,此时处于G2-M期的细胞增加,为(29.95±3.25)%;细胞凋亡率亦明显增加,为(20.61±2.73)%,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),同时Bcl-2蛋白表达下降,Bax表达水平升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论:PAR基因表达下调可诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,其机制为抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达,同时促进Bax表达。     

TRB3在糖尿病肾病中的表达及调控Notch信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的实验研究

目的:TRB3在糖尿病肾病中的表达及调控Notch信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的影响。方法:以正常肾组织为对照,Western blot检测TRB3在糖尿病肾病中的表达;将实验分为低糖组、高糖组、siRNA-NC+高糖组、TRB3-siRNA+高糖组,Western blot检测TRB3-siRNA沉默效果;各实验组细胞培养48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测E-cadherin、α-SMA表达;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达。结果:糖尿病肾病中TRB3的表达显著高于正常肾组织(P0.05);TRB3-siRNA组TRB3蛋白表达水平显著低于对照组(P0.05);高糖组细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达显著高于低糖组,细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著低于低糖组(P0.05),siRNA-NC+高糖组细胞存活率、细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达与高糖组比较差异无统计学意义(P0.05);TRB3-siRNA组细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达显著低于高糖组,细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著高于高糖组(P0.05)。结论:TRB3在糖尿病肾病中高表达,高糖能诱导人肾小管上皮细胞系HK-2细胞的增殖,抑制细胞凋亡及转分化,而沉默TRB3的表达能减弱这种效果,其机制与Notch信号通路的调控有关。     

沙利度胺对前列腺癌PC3细胞的体外作用及机制研究

目的 研究沙利度胺对激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞株PC-3体外生长的抑制作用及其可能的机制.方法 将不同浓度的沙利度胺作用于AIPC细胞株PC-3,采用CCK-8法检测沙利度胺对PC-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测凋亡率;通过RT-PCR法检测沙利度胺处理前后PC-3细胞中低氧诱导因子-1(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达水平;Western blot检测沙利度胺作用后HIF-1α、VEGF、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平.结果 不同浓度的沙利度胺作用于PC-3细胞后,细胞增殖水平明显下降(P＜0.05),且沙利度胺对PC-3细胞增殖的抑制作用呈浓度-时间依赖性.流式细胞仪检测结果表明不同浓度的沙利度胺诱导PC-3细胞发生凋亡,和对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).随着沙利度胺浓度的增加,PC-3细胞中HIF-1 α、VEGF mRNA的表达逐渐下调;HIF-1α、VEGF和Bcl-2蛋白的含量逐渐下降,而Bax蛋白的含量逐渐增加.结论 沙利度胺可能通过诱导AIPC细胞的凋亡和抑制肿瘤血管的生成而发挥双重抗肿瘤生长的作用.     

DHA对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制的研究

目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对人肝癌细胞株Bel-7402增殖和凋亡的影响及其机制。方法：用不同浓度的DHA（0,25,50,100,200 μmol/L）分别作用人肝癌Bel-7402细胞24,48,72 h后,用MTT法检测细胞的增殖情况、Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,并分别用流式细胞仪、real-time PCR和caspase-3活性检测试剂盒检测上述梯度浓度的DHA作用 Bel-7402细胞48 h后的凋亡情况、Bim基因表达和caspase-3活性。结果：不同浓度、不同时间DHA作用后,Bel-7402细胞增殖明显抑制,呈浓度和时间依赖性（均P<0.05）;细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达降低,呈明显浓度依赖性（均P<0.05）,但无明显时间依赖性（均P>0.05）。不同浓度DHA作用48 h后,Bel-7402细胞凋亡率、Bim基因表达和caspase-3的活性均明显增加,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。结论：DHA可抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

他莫昔芬与γ-干扰素联合抗人乳腺癌细胞株的作用及其机制研究

目的: 探讨他莫昔芬(TAM)与 γ-干扰素(γ-IFN)联合抗乳腺癌细胞株的作用及其机制。方法:在体外培养条件下，分别或联合应用γ-IFN,TAM或雌二醇（E2）作用于ER阳性的MCF-7人乳腺癌细胞株，用MTT比色法分析细胞生长抑制作用;用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期分布、凋亡率及用药前后Bcl-2,Bax,Fas,FasL及Caspase-8蛋白的变化;荧光分光光度仪检测Caspase-3活性。结果:TAM能抑制ER阳性乳腺癌细胞的生长，阻滞细胞周期于G0/G1期，并可诱导细胞凋亡;同时，TAM能拮抗外源性雌激素对MCF-7细胞的促生长作用。γ-IFN预处理细胞24h后，TAM抗乳腺癌细胞的作用增强。联用γ-IFN与TAM后，细胞Bcl-2蛋白表达下调，Caspase-8表达上调;但药物处理前后，细胞Bax，Fas，FasL蛋白表达水平及Caspase-3活性未见明显变化。结论:体外条件下，TAM通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡而发挥抗ER阳性乳腺癌细胞作用;γ-IFN能加强TAM的抗乳腺癌作用。两者作用机制可能系通过下调Bcl-2表达和上调Caspase-8的表达。     

洛伐他汀对系膜细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的 观察洛伐他汀对系膜细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因表达的影响。并探讨其作用的可能机制。方法 用不同浓度的洛伐他汀处理大鼠系膜细胞，用流式细胞仪观察细胞凋亡指数，吖啶橙荧光活体染色观察细胞凋亡率，电镜观察凋亡细胞形态，免疫印迹法及细胞免疫结合图文分析观察洛伐他汀对系膜细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响。结果 洛伐他汀对系膜细胞凋亡有明显诱导作用，呈一定剂量依赖性；并能明显抑制Bcl-2基因表达，促进Bax基因表达，致使两者比例明显下降。结论 洛伐他汀可剂量依赖性地诱导大鼠系膜细胞凋亡，其机制可能通过对凋亡抑制或促进基因的调控，改变Bcl-2/Bax比值而诱导MC的凋亡。     

钙离子浓度对人乳腺癌MCF-7细胞Caspase-3,Bax及Bcl-2表达的影响

目的 研究细胞内Ca^2 浓度[Ca^2 ]i的升高对人乳腺癌MCF—7细胞株中Caspase-3,Bax及Bcl—2表达的影响。方法 在体外培养下，经不同浓度thapsigargin(TG)处理的MCF—7细胞株用荧光指示剂Fura-2/AM于单波长荧光分光光度仪上测定细胞内钙离子浓度。用免疫组织化学方法检测Caspase-3，Bax及Bcl—2的表达。结果 随着细胞内钙离子浓度的提高，Bax表达逐渐增强，Bcl-2表达逐渐减弱，而Caspase-3始终呈阴性表达。结论 细胞内钙离子浓度的升高对MCF—7细胞株可诱发不通过Caspase-3途径的细胞凋亡。     

靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

肝细胞癌增殖细胞核抗原表达的图像定量分析

目的 探讨原发性肝细胞癌(简称肝癌)增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况及其意义.方法 采用免疫组化ABC法极测了PCNA蛋白在41例人肝癌组织和人肝癌细胞系HCC-9204的表达情况,并用图像分析仪定量分析了其表达水平与肝癌病理分级之间的关系.结果 癌旁非肿瘤性肝细胞不表达PCNA或只有微弱的表达,而各级肝癌组织的癌细胞均有不同程度的较强的PCNA表达,并且随着肝癌组织分化程度的下降PCNA表达的平均光密度和积分光密度均呈升高趋势,在不同病理分级的肝癌组织之间具有显著性差异(P<0.05).PCNA在培养的HCC-9204细胞中表达的阳性率为86.4%.结论 PCNA可作为肝癌发生和发展过程中的一个与其恶性程度密切相关的标志物,可能在肝癌细胞的增殖过程中具有重要的作用.     

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1表达对前列腺癌细胞顺铂耐药性的影响

探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)表达对前列腺癌细胞顺铂（DDP）耐药性的影响。方法 采用转染PARP-1 siRNA抑制前列腺癌细胞中PARP-1的表达，RT-PCR和Western blot检测细胞中PARP-1以及凋亡信号通路相关蛋白的表达差异，CCK-8检测耐药指数，计算DDP IC50。结果 PARP-1蛋白在耐药细胞PC-3/DDP中的表达量明显高于亲本细胞PC-3，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。下调PARP-1表达可增强前列腺癌细胞的DDP敏感性，逆转耐药细胞的耐药性。信号通路相关蛋白Bcl-2和pERK显著下调。结论 PARP-1在前列腺癌细胞表达水平与细胞对DDP耐药性密切相关，PARP-1表达抑制可以增强DDP对前列腺癌细胞的敏感性，其分子机制可能是通过激活凋亡通路抑制ERK磷酸化。     

替米沙坦通过Wnt/β-catenin信号通路影响非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的研究

目的 研究替米沙坦对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 体外培养非小细胞肺癌细胞株A549,采用CCK-8法检测不同浓度替米沙坦对A549细胞增殖活性的影响,以克隆形成实验检测不同浓度替米沙坦处理下A549的存活分数,以划痕实验检测不同浓度替米沙坦对A549细胞迁移能力的影响,Hoech...     

表达人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的增殖腺病毒对肝癌细胞的抑制作用

目的 观察表达人端粒酶逆转录酶小干扰RNA(hTERT-siRNA)的增殖腺病毒(ZD-hTERT)对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡影响.方法 ZD-hTERT、增殖腺病毒ZD-EGFP、表达hTERT-siRNA的增殖缺陷腺病毒Ad-hTERT、增殖缺陷腺病毒Ad-EGFP分别感染人肝癌Bel-7402细胞.Western blot法检测ElA表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测hTERT表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活;结晶紫染色法检测细胞毒作用;原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡.结果 感染ZD-hTERT、ZD-EGFP的Bel-7402细胞表达ElA;抑制hTERT表达作用依次为ZD-hTERT>Ad-hTERT>ZD-EGFP>Ad-EGFP;抑制Bel-7402细胞生长及细胞毒作用依次为ZD-hTERT>ZD-EGFP=Ad-hTERT>Ad-EGFP.感染ZD-hTERT、ZD-EGFP、Ad-hTERT、Ad-EGFP的Bel-7402细胞凋亡率(%)分别为(88.1±2.2)、(39.2±2.1)、(42.1±5.1)、(7.5±2.1),ZD-hTERT诱导凋亡作用最高(P<0.01).结论 表达hTERT-siRNA的增殖腺病毒能显著抑制人肝癌Bel-7402细胞hTERT基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.