混合斑的DNA鉴定

目的：探讨性犯罪中混合斑的PCR－STR分型鉴定技术，获得可靠的精子DNA分型，从而认定或排除作案嫌疑人，方法：用差异消化法分离混合斑提取精子DNA，多STR基因座同步PCR扩增，PAGE电泳分离，完成混合斑个人识别鉴定35例。结果：PCR－STR分型成功34例（97．143％），认定嫌疑人作案21例（60．00％），排除嫌疑人作案13例（37．143％），分型失败1例（2．857％），结论：差异消化法分离混合斑提取精子DNA进行PCR－STR分型结果满意，10个STR基因座分型相同，偶合概率小于10^-10，认定嫌疑人作案。     

Identifiler体系在亲子鉴定中的应用分析

目的 运用AmpFlSTR Identifiler PCR 扩增试剂盒用于亲子鉴定126例,探索此试剂盒在亲子鉴定案例中的应用价值.方法 采用荧光标记STR-PCR复合扩增、毛细管电泳基因分型技术,应用ABI 310遗传分析仪对126例亲子鉴定的个体进行15个STR位点的基因分型.结果 在126例亲子鉴定中,否定亲权的25个案例中均至少有3个位点不符;认定亲权的101例中,亲子关系指数(RCP)均＞99.98%,在认定的亲子关系中,有3例出现1个位点的基因突变.结论 应用Identifiler 体系的15个STR位点的基因鉴定,能成功地开展亲子鉴定,并显著提高了亲子关系指数.     

BALB/c小鼠遗传质量检测的新方法

目的比较随即扩增多态性方法（RAPD）、微卫星方法（STR）与生化标记方法对近交系小鼠遗传质量检测的差异,为近交系动物遗传质量控制提供一种分子生物学方法。方法提取近交系小鼠BALB/c基因组DNA,用6条RAPD引物和20对STR引物对其进行PCR扩增,用生化标记法检测13个位点。结果在6条RAPD引物中,引物2（p2）、引物3（p3）、引物5（p5）和引物6（p6）这四条引物扩增的条带出现差异,表现为不同的RAPD图谱;在20对STR引物中,引物2、4、10和11,这四对引物扩增的条带出现差异,表现为不同的STR图谱;13个生化标记位点中,过氧化氢酶-2（Ce-2）等6个生化位点发现杂合基因。结论RAPD和STR可用于验证生化标记方法的实验结果,并用于保证近交系动物的遗传质量。     

封闭群斑马鱼的STR遗传检测技术

目的建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制。方法以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR（short tandem repeat）引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同。设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物。结果有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物（AY204223）的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同。这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系。结论STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

血浆游离DNA的STR分型检测研究

目的：探讨利用血浆中游离DNA进行短串联重复序列（short tandem repeat,STR）分型检测,解决法医学个体识别和亲权鉴定问题的可行性。方法采集36例无关健康个体EDTA-Na2抗凝血样,分离血浆,采用经典酚-氯仿法分别处理血浆和血细胞,对提取的DNA进行15个STR基因座常规PCR扩增和荧光标记复合扩增,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳检测2种STR分型方法进行检测。结果常规PCR扩增银染检测和荧光标记复合扩增毛细管电泳检测两种STR分型方法的结果表明,同一个体的血浆游离DNA和血细胞DNA STR分型一致,且分型效果接近。结论血浆游离DNA可作为一种有效的生物学样本进行STR分型检测,应用于法医个体识别和亲权鉴定。     

直接扩增技术在接触性检材 DNA检验中的应用

目的：将DNA直接扩增技术引入案件现场不同的接触性检材的检验中,构建有效的接触性DNA的生物检材的检验方法。方法采用剪取、擦拭等方法对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶、吸管及残缺指纹等检材进行取样,采用DNA直接扩增技术获得短串联康复序列（short tandem repeat ,STR）分型。结果 DNA直接扩增技术在5种不同检材中检出的基因型均为单一个体来源,其对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶和吸管、残缺指纹检材的成功率分别为90％、100％、70％、90％和60％,平均成功率在70％以上。分别对5种检材多处取点样品进行平行扩增,手套、烟蒂检材3个点位成功率均在90％以上;饮料瓶、吸管3个点位的成功率达80％～90％;衣服3个点位的成功率在60％～70％;残缺指纹3个点位的成功率在50％～60％。结论 DNA直接扩增技术对接触性DNA检材检验具有较高的有效应,其结果可靠,重复性强。     

贵州毛南族人群CSF1PO,TPOX和TH01STR基因座基因频率调查

目的：调查贵州毛南族人群CSF1PO,TPOX和TH01STR基因座等位基因频率.方法：chelex-100提取法提取104名毛南族无关个体DNA,PCR复合扩增,变性PAGE分型,直接计数基因型,用modified-powerstats软件包计算各多态性指标,采用SPSS13.0统计软件包对贵州毛南族人群与广西两个毛南族群体相同基因座等位基因频率进行比较.结果：CSF1PO,TPOX和TH01STR基因座共检出等位基因数17个,等位基因频率范围在0.0288~0.4087之间;共检出基因型40种,各基因座基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P〉0.05）.3个基因座的杂合率（H）、非父排除率（PPE）、个体识别率（DP）、多态信息量（PIC）分别大于0.69,0.5,0.8,0.6,累积个体识别率（TDP）为0.99743.贵州毛南族人群和广西两个毛南族群体等位基因频率分布有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）.结论：CSF1PO,TPOX和TH01 3个STR基因座在贵州毛南族人群中有较高的遗传多态性,在群体遗传学和法医鉴定中有较高的应用价值.起源于古代同一族系的同一民族或不同民族,遗传结构有丰富的遗传多样性,其等位基因频率分布与地域呈平行关系.     

异基因外周血干细胞移植供受者嵌合体形成的动态检测

目的：建立荧光标记的多重扩增短串联重复序列（STR）结合毛细管电泳定量检测异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）供受者嵌合体的方法，并探讨嵌合体形成与免疫耐受及临床预后的关系。方法：采用PE9700扩增仪扩增15个STR位点：D8S1179、D21S11、D7S820、D3S1358、CSFIPO、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、VwA、TPOX、D18S51、D5s818、FGA位点和1个性别位点Amelogenin，应用3130XL型DNA测序仪对35例异基因外周血干细胞移植患者上述位点进行基因型分析，并比较供受者移植前后的基因型，确定嵌合体的形成类型，以作为异基因造血干细胞移植中的植活证据，同时用无关个体的DNA混合实验进行可行性和准确性研究。结果：（1）其中32例在15个STR位点中均至少有两个可以区分供受者的有信息位点（有3例无移植前受者标本），35例患者均在移植后1个月时STR位点及性别位点转为供者型，形成了完全供者嵌合体（CC），且HLA单倍体相合的15例患者也达到了100％的供者植入，并在随访过程中持久不变。（2）扩增产物中供受者DNA含量的百分比同扩增前混合样本的比例呈显著直线相关（P〈0．01），最小检出DNA百分比为5％。结论：（1）用基因分析仪对STR位点进行基因型检测具有快速、无污染和自动化高、可定量及灵敏度高等优点，用于检测allo—PBSCT植活状态是可靠的。（2）诱导免疫耐受的方法可以成功地诱导CC的形成。     

短串联重复序列检测法在江苏地区亲子鉴定的应用

目的:分析短串联重复序列(STR)基因座在江苏汉族人群亲子鉴定的应用.方法:取在本中心进行亲权鉴定的1 016个案例共2558份样本,提取DNA.用PCR特异性扩增出18个STR基因位点,聚丙烯酰胺凝胶电泳分型检测.以亲子关系指数(RCP)≥99.99%为认定亲权关系,以≥3个基因位点不符为排除亲权关系.结果:1016个案例中,认定亲权关系为758例,占75%,排除亲权关系为258例,占25%.19例表现出1个STR基因座突变现象.结论:STR基因检测位点多,多态性高、分布广泛、灵敏度高、易检测.联合使用多个STR位点进行检测可作为亲子鉴定的主要技术手段.     

孕妇血浆中胎儿游离核酸Y染色体STR复合扩增的应用

目的:探讨利用孕妇血浆中游离胎儿DNA通过复合扩增Y染色体上的STR进行胎儿性别鉴定及其应用在产前无创性亲子鉴定中的可能性.方法:收集23例12-28孕周的孕妇外周血以及血浆,同时收集胎儿羊水标本以及可疑父亲的外周血标本,提取DNA,利用ABI Identifiler以及ABI Yfiler扩增系统复合扩增常染色体以及Y染色体上的STR位点,扩增产物经ABI 3130基因测序仪分析,用GeneMapper ID 3.2软件分析.结果:23例孕妇中,有16例孕妇经羊水Identifiler系统验证为男性胎儿,该16例孕男胎的孕妇血浆DNA的Y染色体STR位点扩增成功率100％,扩增出位点数目5-12个不等;并将其分型结果与羊水标本相比较,结果均一致;同时将其与可疑父亲的Y染色体STR位点分型结果相比较,在9例经ABI identifiler验证为非父子关系的案例中有8例可以成功排除其父子关系.结论:利用位于Y染色体上的STR位点进行多位点复合扩增可以明显提高胎儿性别鉴定的准确率,同时将其应用于产前无创性亲子鉴定中,可用于亲缘关系的初步排除.     

云南白族15个常染色体STR 基因座的遗传多态性

［摘要］目的　采用PCR- STR及基因分型技术,探讨云南怒江白族群体中D3S1358、TPOX 等15个常染色体STR基因座的遗传多态性, 建立怒江白族群体的遗传学基础数据, 为法医学应用提供基础数据．方法　采集124 名云南怒江地区白族无关个体的静脉血, 经典有机法提取DNA, 应用PCR技术, 复合扩增D3S1358等15个常染色体基因座的短串连重复序列,扩增产物用遗传分析仪电泳荧光检测, 获得云南怒江白族15个STR基因座的等位基因频率,进行遗传多态性分析．结果　15个常染色体STR基因座在云南怒江白族群体中具有遗传多态性,基因型分布符合Hardy- Weinberg平衡定律（P > 0.05）. 其累积匹配概率（CPM ）为4.869 1×10-17, 累积非父排除率（ CPE）为99.99% ,累积个人识别能力（ CDP） 为99.99%．结论　云南怒江白族群体15个常染色体STR基因座有较高的非父排除率和个体识别能力, 可为法医学亲子鉴定和个体识别提供基础数据以及遗传学研究提供依据.     

实验模型下两种全基因组扩增技术对指纹DNA检验的效能

目的对简并寡核苷酸引物PCR（Begenerate oligonucleotide-primed PCR,DOP-PCR）和扩增前引物延伸PCR（Primer extension pre-amplification PCR,PEP-PCR）用于指纹检材DNA检验的价值进行研究。方法建立2种指纹检材DNA模型,分别用普通PCR、DOP技术和PEP技术三种方法对指纹DNA样本进行STR分型,对三种方法的效能进行比较评价。结果实验模型1条件下,三种方法均不能获得满意分型结果;模型2条件下,DOP和PEP两种方法可以增加STR分型的成功率和信息量。结论 DOP和PEP技术必须结合高效的DNA提取技术才能最大程度发挥其检验效能。     

融水苗族STR基因座D7S820、D13S317、D16S539的遗传多态性研究

目的：为了解广西融水苗族人群无关个体的3个短串联重复序列（short tandem repeat,STR）：D7S820、D13S317、D16S539遗传多态性分布情况.方法：用枸橼酸钠抗凝法采集融水苗族208份无亲缘关系的健康个体的血样（男102例,女106例）,酚-氯仿抽提法提取DNA,应用荧光标记复合扩增技术对血样DNA的3个STR基因座进行扩增,用ABI3100型遗传分析仪对扩增产物进行检测.结果：3个STR位点共检测出21种等位基因,62种基因型,频率分布分别在0.004 8～0.448 4和0.004 8～0.201 9之间,其中累积个人识别力0.998 6,累积非父排除率0.956 6,多态信息总量0.972 9;基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0.05）.结论：苗族群体的3个STR位点具有高度多态性和遗传稳定性,符合孟德尔遗传规律,可以应用于个体识别和亲权鉴定,可作为广西苗族的民族遗传学研究和法医学鉴定的基础数据.     

近交系剑尾鱼的STR遗传检测技术

目的 建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制.方法 以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR (short tandem repeat) 引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同.设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物.结果 有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物(AY204223)的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同.这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系.结论 STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测.     

运用STR基因分型技术对128例亲子鉴定结果分析

目的:探讨18个位点短串联重复序列(STR)复合扩增基因分型技术在亲子鉴定中的价值。方法:采用chelex-100 DNA抽提法、18位点STR复合扩增技术结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳基因分型技术,对128例亲子鉴定案件进行分析判断。结果:128例亲子鉴定案例中,结果认定96例(75%),排除32例(25%),18个位点STR基因组合的亲子关系相对机会RCP(relative chance of paternity)值可达到99.9999%。结论:18个位点STR基因组合分析体系具有较高的灵敏度和特异度,是亲子鉴定的理想方法。     

异基因造血干细胞移植后嵌合状态的追踪监测

目的:应用荧光标记短串联重复序列(STR)复合扩增技术,探讨多个STR基因座在异基因造血干细胞移植后嵌合体状态评估中的作用.方法:对31例移植后患者进行追踪检验,分别PCR复合扩增各病例组常染色体9个STR基因座和Amelogenin基因座,扩增产物经DNA自动分析仪分离后,GeneScan扫描,Genotyper分型.结果:7例患者血由第1次检验结果与供者STR分型一致变为混合型,4例死亡,3例复发;4例患者血由第1次检验结果与供者一致变为受者自身型,均死亡;1例患者血由混合型变为与供者STR分型一致,无复发;1例患者血两次检验均为混合型,已死亡;其余18例患者血均与供者血STR分型一致,其中16例目前预后较好,2例已死亡.结论:复合扩增STR基因座具有较高的个体识别力,检测灵敏、准确、快速,在对异基因造血干细胞移植患者的植入情况进行动态检测的研究中有用,对移植物植入或被排斥、疾病复发均有预警作用,同时必须结合临床症状,及时地进行STR检测,以便于早期实施临床干预治疗.     

利用常染色体STR多态性进行同胞鉴定5例

目前可应用于亲缘关系鉴定的检测技术手段有染色体短串联重复序列（STR）、单核苷酸多态性（SNP）分析及线粒体测序等。Y-STR呈父系连锁遗传,仅适用于男性间的鉴别;SNP检测技术方法复杂,费用昂贵;线粒体DNA存在高突变率和异质性[1],因此,实际应用受限。常染色体STR具有多态性高、分型简便、检出灵敏度高及特异性好等特点,且可进行多位点复合扩增,目前已成为国内外DNA亲子鉴定的主要检测手段。     

云南拉祜族群体15个STR基因座遗传多态性研究

目的采用PCR-STR及基因分型技术,探讨云南地区拉祜族群体D3S1358、TH01等15个常染色体基因座的遗传多态性,建立拉祜族群体的遗传学基础数据,为群体遗传学和法医学应用提供依据.方法采集101名云南临沧地区拉祜族无关个体的静脉血,经典有机溶剂法提取DNA,应用PCR技术,复合扩增D3S1358、TH01等15个常染色体基因座的短串连重复序列,扩增产物用遗传分析仪毛细管电泳荧光检测,调查云南地区拉祜族群体15个STR基因座等位基因频率,进行遗传多态性分析.结果15个STR基因座在云南拉祜族群体中具有遗传多态性,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P〉0.05）.其累积匹配概率（PM）为4.36×10^-16,累积非父排除率（CPE）为99.9994%,累积个人识别能力（TDP）为99.9999999999999%.结论云南拉祜族群体15个常染色体STR基因座有较高的非父排除率和个体识别能力,可为法医学亲子鉴定和个体识别及遗传学研究提供依据.     

D3S1358两种引物比较研究

目的：研究D3S1358基因座两种引物在同一模板不同降解时间扩增效果，对其在法医学上的应用进行可行性探讨。方法：从商品化STR试剂盒中筛选出D3S1358，提取32例无关男性血液样本进行降解、扩增、琼脂糖电泳等。结果：通过琼脂糖电泳结果分析，D3S1358降解后由miniSTR扩增效果明显优于常规STR扩增效果。结论：miniSTR在处理腐败降解检材的分型检出率较常规STR有一定的优势。     

混合斑的DNA鉴定

目的 探讨性犯罪中混合斑的PCR-STR分型鉴定技术,获得可靠的精子DNA分型,从而认定或排除作案嫌疑人。方法 用差异消化法分离混合斑提取精子DNA,多STR基因座同步PCR扩增,PAGE电泳分离,完成混合斑个人识别鉴定35例。结果 PCR-STR分型成功34例(97.143％),认定嫌疑人作案21例(60.00％),排除嫌疑人作案13例(37.143％),分型失败1例(2.857％)。结论 差异消化法分离混合斑提取精子DNA进行PCR-STR分型结果满意,10个STR基因座分型相同,偶合概率小于10~(-10),认定嫌疑人作案。