姜黄素抑制人肾癌786-O细胞增殖及对细胞周期影响的研究

目的研究姜黄素对人肾癌786-O细胞体外生长及细胞周期的影响，为肾癌治疗提供理论依据。方法应用MTT比色法和流式细胞仪检测人肾癌786-O细胞增殖抑制率及细胞周期各时相的变化和凋亡率。结果姜黄素对人肾癌786-O细胞有抑制作用，存在剂量依赖（F=6207．813，P〈0．01）与时间依赖（F=1210．386，P〈0．01）；流式细胞仪分析，G1期细胞增多，S期细胞减少，C2／M期细胞相对增多。结论姜黄素可以抑制人肾癌786-O细胞增殖，阻止G1期细胞向S期的进程，促进人肾癌786-O细胞凋亡。     

模拟二氧化碳气腹对人肾癌786-O细胞体外增殖的影响

目的:通过建立体外模拟CO2:气腹环境,研究CO2气腹对人肾癌786-O细胞增殖的影响.方法:建立体外模拟CO2气腹环境.以14mmHg气压对人肾癌786-O细胞作用不同时间(2、4 h),以培养于常规条件下肾癌细胞为对照,用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和Survivin蛋白表达水平.结果:与对照组比较,CO2气腹处理后的两组人肾癌786-0细胞增殖速度明显加快(P<0.05).且48 h后细胞增殖速度的加快与气腹作用时间呈直线相关(R2=1,P<0.01);细胞周期中处于增殖期的细胞比例显著增高(P<0.01);PCNA表达明显增强(P<0.01);细胞凋亡率亦显著减少(P<0.05),且凋亡率的减少与气腹作用时间呈直线相关(R2=1,P<0.01);Survivin表达显著增强(P<0.01)结论:体外模拟CO2气腹环境,可促进人肾癌786-O细胞增殖,且随着接触CO2时间的延长,肾癌786-O细胞增殖速度加快.     

姜黄素对Tca8113细胞周期各时相的影响

目的:探讨姜黄素对Tca8113(人舌癌细胞株)细胞株的诱导分化作用及对细胞周期各时相的影响.方法:应用MTT比色法和流式细胞仪检测姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率及细胞周期的改变,并通过电子显微镜观察其亚细胞结构的改变.结果:姜黄素对Tca8113细胞增殖有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.流式细胞仪分析,G1期细胞增高,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多.亚细胞结构:细胞空化,核仁不规则.结论:姜黄素能够抑制Tca8113细胞增殖,阻止G1期细胞向S期的进程.S期细胞减少,G2/M期细胞增多,促进Tca8113细胞凋亡.     

COX-2抑制剂NS398通过抑制前列腺素E2诱导肾癌细胞的凋亡

目的:揭示环氧合酶2(COX-2)在肾癌细胞中的表达情况,通过COX-2抑制剂NS398作用肾癌细胞探讨非甾体抗炎药(NSAID)对肾癌细胞增殖作用的影响及其可能的作用机制。方法:采用标准的细胞培养方法对人肾癌786-0细胞进行培养,将NS398分别以25,50,100,150及200μmol/L的剂量加入细胞中作用24及48h后,MTT法检测NS398对肾癌细胞增殖的影响;作用24h后,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,EIA法测定细胞中前列腺素E(2PGE2)含量的变化,Western blotting测定COX-2蛋白表达的情况。结果:NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大,呈浓度依赖关系(P<0.05);NS398作用肾癌786-0细胞24h后,在细胞周期G0/G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,随着浓度升高,凋亡峰亦越来越增高(P<0.05);NS398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降。结论:NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786-0细胞的增殖;NS398诱导肾癌786-0细胞的凋亡作用机制可能是通过抑制COX-2的表达,降低肾癌786-0细胞PGE2的合成,减少前列腺素对肿瘤细胞增殖的刺激作用来抑制增殖和促进凋亡的。     

shRNA 沉默YAP基因对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨慢病毒干扰载体沉默Yes-相关蛋白（Yes-associated protein,YAP）对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响。方法：用细胞免疫荧光法检测肾癌786-O细胞中YAP蛋白表达情况;构建针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体转染786-O细胞。RT-PCR和Western blot分别检测干扰786-O细胞前后 YAP mRNA及蛋白的表达情况;CCK-8（cell counting kit-8）法检测沉默YAP后细胞增殖的改变;流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测细胞凋亡和周期的变化。结果：786-O细胞中YAP蛋白表达于细胞浆和细胞核;shRNA-YAP慢病毒干扰载体转染4 d后,可明显下调786-O细胞YAP mRNA及蛋白表达水平（P=0.000）,并且明显抑制细胞增殖和促进细胞凋亡（P=0.000）;细胞周期紊乱,G1 期细胞明显增加,S期细胞明显降低（P=0.000）。结论：YAP-shRNA慢病毒干扰载体能有效抑制YAP基因在786-O细胞中表达,进而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

姜黄素对肾癌786-O细胞增殖及凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对肾癌786-O细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP蛋白)表达水平以及细胞凋亡的影响,研究姜黄素对肾癌细胞的生长抑制作用并探讨其分子机制,进一步揭示姜黄素对肾癌的治疗作用。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌786-O细胞24、48、72 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对人肾癌786-O细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;免疫细胞化学检测姜黄素对786-O细胞HIF-1α和XIAP表达的影响。结果姜黄素对人肾癌786-O细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞48 h后,HIF-1α和XIAP蛋白表达量下降。结论姜黄素通过下调HIF-1α和XIAP的表达抑制人肾癌786-O细胞的增殖,诱导人肾癌786-O细胞的凋亡。     

白藜芦醇对人肾细胞癌786-0细胞周期、凋亡及PDCD5mRNA表达的影响

目的:探讨白藜芦醇(RES)对人肾细胞癌786-0细胞周期、凋亡及PDCD5mRNA表达的影响。方法:取对数生长期的786-0细胞,用含25μmol/LRES的培养基(实验组)培养24、48及72h后,应用流式细胞术检测786-0细胞周期和凋亡情况,采用原位杂交技术检测细胞中PDCD5mRNA的表达情况,均以不含RES的培养基作为空白对照。结果:25μmol/LRES作用24h后,实验组786-0细胞G1期及G2期比例显著下降,S期比例明显升高。经25μmol/LRES处理24、48及72h后,实验组786-0细胞凋亡细胞数(F组间=869.853,P<0.001)和PDCD5mR-NA的表达均高于空白对照组(F时间=10.067,P<0.001;F组间=649.629,P<0.001),差异有统计学意义。结论:RES可上调人肾细胞癌786-0细胞PDCD5mRNA的表达,使786-0细胞阻滞在S期而诱导细胞凋亡。     

索拉菲尼对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究

目的:探讨分子靶向药物索拉菲尼(Sorafenib)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用.方法:采用MTT法检测Sorafenib对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率.结果:Sorafenib能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应;6μmol/L的Sorafenib理HepG2细胞72d,时,HepG2 细胞周期中的S期比例明显升高,G0-G1期、G2-M期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05,P<0.01).结论:Sorafenib对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制其增殖和促进其凋亡.     

苯乙酸钠诱导Jurkat细胞凋亡机制研究

目的:探讨苯乙酸钠(Sodium pheny-acetate,NaPA)诱导Jurkat(人粒细胞白血病细胞株)细胞凋亡机制及对细胞周期各时相的影响。方法:应用MTT比色法及流式细胞仪检测NaPA对Jurkat细胞的增值抑制率及细胞周期各时相的变化,并通过电子显微镜观察Jurkat细胞的亚细胞结构改变。结果:NaPA对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率为27%~58%,且呈剂量依赖性。流式细胞仪结果表明,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率增高,电子显微镜下可见线粒体肿胀,细胞核固缩。结论:NaPA能够抑制Jurkat细胞G1期向S期转化进程,诱导Jurkat细胞凋亡。     

姜黄素对人急性髓性白血病细胞的作用及机理的初步探讨

目的　探讨姜黄素对急性髓性白血病细胞 (HL- 6 0 )增殖和细胞周期的调控及细胞凋亡的影响。方法　采用 MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对 HL- 6 0的抑制作用 ;流式细胞仪分析细胞周期分布 ;透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果　姜黄素可抑制 HL- 6 0细胞的生长 ,其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系 ;中效浓度 (IC50 )为 2 4 .8μm ol/ L 时 ,流式细胞仪分析证实姜黄素能使 HL- 6 0细胞聚积在 S期、G2 / M期 ;电镜观察发现姜黄素可使 HL- 6 0细胞超微结构发生改变。结论　姜黄素可干扰 HL- 6 0细胞的周期分布 ,具有抗细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用     

半枝莲对人大肠癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的探讨半枝莲(SBD)在体外对人大肠癌HT-29细胞增殖抑制、诱导凋亡作用及可能的作用机制。方法应用MTT法(噻唑蓝比色试验)检测不同浓度的SBD对体外培养的人大肠癌HT-29细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术测定SBD对HT-29细胞凋亡及细胞周期分布的影响。结果HT-29细胞经SBD(浓度范围10~320 mg/L)作用后细胞生长明显受到抑制,呈现明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系,最高抑制率为93.869%(P<0.01);SBD在20mg/L、80mg/L、320mg/L 3种浓度下作用48h均可诱导HT-29细胞凋亡,流式细胞仪技术检测其凋亡率分别为7.6%、16.2%、和34.5%,有明显的剂量依赖效应关系;同时,SBD使细胞周期分布发生明显变化,表现为S期细胞比例上升,G0/G1期和G2/M期细胞比例下降。结论SBD能抑制HT-29细胞增殖,而且能诱导HT-29细胞凋亡,其作用机制可能与影响癌细胞细胞周期的分布有关。     

NS-398联合顺铂对Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察环氧化物酶-2选择性抑制剂NS-398联合顺铂对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用细胞增殖抑制实验(CCK-8法)检测不同-质量浓度的顺铂(1.25、2.50、5.00和10.00 ms/L)单用及联合小剂量(1.00和10.00 μmol/L)NS-398作用于人食管癌Eca-109细胞24 h后细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及早期凋亡情况.结果:顺铂、N-398单用及2者联合对Eca-109细胞均有抑制增殖作用(F顺铂=1391.300,FNS-398=642.898,F交互=15.254,P均<0.001),可阻止细胞周期的进程(G0/G1期:F顺铂=1308.300,FNS-398=133.138,F交互=26.692,P均<0.001;S期:F顺铂=1470.300,FNS-398=149.638,F交互=30.000,P均<0.001),诱导细胞凋亡(F顺铂=39.493,P<0.001,FNS-398=0.000,P=0.987;F交互=4.325,P=0.006).顺铂联合NS-398对Eca-109细胞的作用明显强于顺铂单用,且随着NS-398剂量的增高而增高(P<0.01).结论:NS-398能够增强顺铂对食管癌细胞的生长抑制和诱导凋亡效应.     

siRNA-FAM92A1-289对HeLa细胞增殖的影响

目的:研究RNA干扰(RNAi)沉默基因FAM92A1-289对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:化学合成法合成小干扰RNA(siRNA),阳离子脂质体转染FAM92A1-289 HeLa细胞;实时定量RT-PCR检测其mRNA表达,MTT法和流式细胞仪检测转染后HeLa细胞增殖、细胞周期和凋亡变化。结果:转染合成FAM92A1-289 siRNA后,HeLa细胞中FAM92A1-289 mRNA表达下降(P<0.01),细胞增殖均明显增强(P<0.01);细胞周期分布改变,S期细胞明显增多,而G2/M期细胞减少,凋亡率无变化。结论:FAM92A1-289基因调节细胞增殖活动。     

姜黄素对Hela细胞周期各时相的影响

目的：探讨姜黄素对Hela细胞(人宫颈癌细胞)增殖周期各时相的影响,为宫颈癌化疗寻求有 效药物。 方法：应用MTT比色法和流式细胞术测定不同浓度姜黄素（0、10、20和40 mg·L^-1） 对Hela细胞增殖的抑制率和细胞周期各时相的变化,并应用电子显微镜观察Hela细胞的亚细胞改变。 结果：0、10、20和40 mg·L^-1姜黄素对Hela细胞增殖的抑制率分别为3.0%、21.4%、32.8%和49.2%,且呈剂量依赖性;流式细胞术显示,G₁期细胞增多,S期细胞减少,G ₂／M期细胞相对增多;细胞结构显示,细胞空化、染色质凝集、凋亡小体增多。 结论：姜黄素能够抑制HeLa细胞增殖,阻止G₁期细胞向S期转化的进程,促进Hela细胞凋亡。     

姜黄素对鼻咽癌CNE—1细胞增殖和周期的影响

目的讨论姜黄素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测增值抑制率,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的姜黄素作用细胞48h时,抑制率随浓度的增加而增加,流式细胞仪分析证实姜黄素能使CNE-1细胞阻滞在G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰。结论 姜黄素对CNE-1细胞具有增殖抑制作用,并阻滞细胞于G2/M期和诱导细胞凋亡。     

抑癌基因TIP30对肾癌细胞系786-0的生长抑制作用

目的：筛选含有外源性TIP30的人肾透明细胞腺癌细胞系786-0,探讨TIP30基因对786-0的生长抑制作用,寻找肾癌基因治疗的潜在靶点。方法：采用RT-PCR技术扩增TIP30基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,转染786-0细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测稳定转染pcDNA3.1-TIP30载体、转染pcDNA3.1(+)空载体及未处理的786-0细胞中TIP30的表达,另通过MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。 结果：与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞中TIP30基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.05);未处理与转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞中TIP30的表达水平比较差异无显著性(P>0.05)。转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞生长抑制率明显高于未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞(P<0.01)。流式仪检测细胞周期,与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞G₀-G₁期细胞比例显著增加,S和G₂-M期细胞比例降低(P<0.01)。结论: 786-0细胞能够稳定表达外源基因TIP30;提高肾癌细胞中TIP30蛋白的表达,可抑制肿瘤细胞的生长;TIP30是肾癌基因治疗的潜在靶点。     

姜黄素与顺铂联合对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用

目的:研究姜黄素、顺铂和两者联合应用对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:采用MTT法观察姜黄素和顺铂对人肺癌A549细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测姜黄素、顺铂和两者联合应用对人肺癌A549凋亡和细胞周期的影响。结果:①姜黄素及顺铂能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,并呈浓度及时问依赖性;姜黄素10,15,20μmol/L分别与顺铂1,2 mg/L联合24,48,72 h的抑制率显著高于单用顺铂、姜黄素组(均为P<0.05),两者呈现出相加的抗瘤效果。②姜黄素和顺铂均可在一定程度上诱导细胞凋亡,并且凋亡率与浓度呈正相关。两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。③姜黄素将细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.01),顺铂将细胞周期阻滞在S期(P<0.01)。结论:姜黄素、顺铂均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联合应用具有相加或协同作用。     

慢病毒介导的重组p27kip1对肾癌恶性表型影响

目的 观察LV/p27kip1慢病毒颗粒感染对肾癌细胞株786-0恶性表型影响及裸鼠皮下移植肿瘤的影响,以明确p27kip1在肾癌中的生物学特性,期望为肾癌的预后评估及基因治疗策略提供实验依据.方法 利用四质粒系统包装并纯化LV/p27kip1慢病毒颗粒,对786-0细胞进行感染后分别进行Western Blot检测、细胞周期分析、细胞增殖测定、细胞杀伤率测定.选取BALB/C裸鼠,构建皮下移植瘤成功后注射LV/p27kip1慢病毒,结束治疗后进行组织病理学检查及TUNEL检测.结果 通过外源基因的导入,Western Blot显示p27kip1蛋白在感染后的786-0细胞中高表达,且跟随MOI值的增高而表达量相应增多;细胞周期分析表明外源性p27kip1蛋白在786-0细胞高表达可抑制细胞由G1期向S期过渡:细胞增殖曲线提示感染后第72小时起细胞出现显著的数量下降,且随着MOI值的增加提高对细胞增殖的抑制;细胞杀伤性检测表明MOI=2、MOI=4、MOI=8组的LV/p27kip1感染对细胞有显著杀伤作用,但影响效果无明确的规律;体内实验证实裸鼠皮下肿瘤在病毒的作用下出现了明显的坏死及凋亡.结论 增加外源性p27kip1表达可以阻滞肾癌细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖,诱发凋亡.     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的：探讨姜黄素(cureumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法：选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1．25—20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax的表达。结果：姜黄素对HO-8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO-8910细胞积聚在S和G2／M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas-L、Bcl-2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论：姜黄素对人卵巢癌细胞株H0．8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas-L、Bcl-2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

汉防己甲素对人绒毛膜癌BeWo细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨汉防己甲素对人绒毛膜癌BeWo细胞株凋亡和细胞周期的影响。方法:以不同浓度的汉防己甲素处理人绒毛膜癌BeWo细胞株24h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;Western blot检测p53和p21蛋白的表达。结果:汉防己甲素处理后,BeWo细胞株凋亡细胞的比例明显增高(P<0.01),细胞周期G0/G1期细胞增加(P<0.01),S期细胞减少(P<0.01),p53和p21蛋白表达水平均升高(P<0.01)。结论:汉防己甲素可以对绒毛膜癌BeWo细胞株发挥诱导凋亡及细胞周期阻滞的作用,有望成为绒毛膜癌化疗方案的辅助治疗药物。