再生障碍性贫血小鼠T-bet表达及骨髓巨噬细胞对其表达的影响

目的 探讨再生障碍性贫血(简称再障)小鼠外周血单个核细胞Th1细胞转录因子T-bet的表达及骨髓巨噬细胞对正常小鼠外周血单个核细胞T-bet的影响. 方法 ①免疫介导(γ射线照射和淋巴细胞输入)的方法 建立再障小鼠模型.②RT-PCR方法 检测再障小鼠外周血单个核细胞上T-bet mRNA的表达.③正常小鼠外周血单个核细胞分别经再障小鼠骨髓基质细胞培养上清和小鼠骨髓型正常巨噬细胞株Ana-1培养上清刺激后,用RT-PCR方法 检测T-bet mRNA的表达. 结果 ①再障小鼠外周血单个核细胞T-bet mRNA的表达(1.49±0.18)较正常对照组(1.03±0.06)增高(P<0.05);②正常小鼠外周血单个核细胞分别经再障小鼠骨髓基质细胞培养上清和Ana-1细胞株培养上清刺激后,T-bet mRNA的表达分别为1.29±0.03和1.54±0.03,均较正常对照组(1.03±0.06)增高(均P<0.05). 结论 结果 提示巨噬细胞可能通过增加T-bet的表达参与再生障碍性贫血的免疫发病机制.     

生血胶囊对免疫介导的再生障碍性贫血小鼠骨髓Cyclin D3表达的影响

目的 探讨生血胶囊对免疫介导的再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓增殖及细胞周期蛋白D3(CyclinD3)表达的影响。方法 建立免疫介导的再障模型。造模当日开始胃饲生血胶囊水提液,0．1mL/10g体重,2次／d,连续9d,以生血丸为对照。第10天处死动物,采用流式细胞仪检测小鼠骨髓有核细胞（BMNC）G0／G1期细胞百分率,免疫组织化学超敏S－AP法检测股骨中段骨髓Cyclin D3表达水平。结果 生血胶囊组与再障模型组比较,G0／G1期细胞百分率显著降低（P＜0．01）,而Cyclin D3表达水平明显升高（P＜0．01）,与生血丸组比较各项指标均无显著差异（P＞0．05）。结论 生血胶囊能提高免疫介导的再障小鼠骨髓Cyclin D3的表达水平,促进骨髓造血细胞的G0／G1期进入增殖期,其作用强度与生血丸相当。     

再生障碍性贫血患者DNA损伤修复活性检测

用盐酸氮芥和紫外线作为ＤＮＡ损伤修复诱导剂，对２４例再生障碍性贫血（再障）骨髓单个核细胞及３３例再障外周血单个核细胞的ＤＮＡ损伤修复活性进行了检测。发现再障患者的脱氧核糖核酸损伤修复活性明显低于正常（Ｐ＜０．０５），其低下与患者贫血程度、骨髓增生状况无关，临床治疗也不易纠正。提示患者ＤＮＡ修复活性低下可能在再障的发生中起重要作用。     

环胞菌素A治疗再生障碍性贫血对骨髓细胞凋亡的影响

目的探讨环胞菌素A(CsA)治疗对再生障碍性贫血(再障)患者骨髓单个核细胞Fas(CD95)抗原表达及调亡的影响作用.方法应用流式细胞仪测定24例再障患者CsA治疗前后骨髓单个核细胞(MNC)Fas表达率及凋亡率,其中急性再障7例,慢性再障17例;同时以20例正常人作对照.结果应用CsA治疗再障3个月时的总有效率58.3%.再障患者Fas表达率及凋亡率均高于正常对照(P＜0.05);急性再障Fas表达率及凋亡率高于慢性再障,但差异无显著性(P＜0.05).用CsA治疗后,再障患者骨髓单个核细胞凋亡率明显低于治疗前(P＜0.05).结论CsA治疗可降低再障患者骨髓MNC的凋亡率,骨髓MNC的Fas表达率和凋亡率增高与再障发病有关.     

CD31、CD44的正常表达与再生障碍性贫血

目的：通过观察再生障碍贫血（再障）患者外周血及骨髓中CD31（PECAM-1，血小板-内皮细胞粘附分子）、CD44水平，评价粘附分子对再障发病的影响及其临床意义。方法：用免疫荧光法检测骨髓及外周血单单个核细胞（MNc)CD31、CD44抗原表达水平。结果：再障组骨髓及外周血单个核细胞（MNC）CD31、CD44抗原水平明显低于正常对照组。相关分析发现，骨髓与外周血单个核细胞的CD31、CD44水平与外击血白细胞数、血红蛋白、血小板、骨髓中粒系比例、红系比例、巨核细胞均呈正相关。结论：粘附分子表达异常可能在再障发病中起一定作用。     

AXL基因在骨髓增生异常综合征外周血单个核细胞中的表达

目的 探讨AXL基因在正常人、骨髓增生异常综合征(MDS)及其他血液病患者外周血单个核细胞中的表达情况。方法 采用RT—PCR法。结果 ①AXL基因在10例正常人外周血单个核细胞中不表达，正常骨髓单个核细胞中有表达。②50例MDS患者的外周血单个核细胞中有41例(82％)A)比基因阳性。FAB亚型与AXL表达关系：35例难治性贫血(RA)者中27例阳性，3例环形铁粒幼细胞性难治性贫血(RAS)阳性；9例难治性贫血伴过多母细胞(RAEB)者中8例阳性，3例难治性贫血伴过多母细胞伴有转化(RAEB-T)患者均阳性。6例实验时临床不能确诊为MDS者AXL基因阳性，经随访骨髓转为MDS；3例骨髓疑为MDS或诊为MDS者AXL基因阴性，经随访确诊为其他疾病。②12例再生障碍性贫血(AA)、1例缺铁性贫血(IA)、1例溶血性贫血、2例夜间阵发性血红蛋白尿(PNH)、3例特发性血小板减少性紫瘸(ITP)患者的A)比均阴性。结论 AXL基因在MDS外周血中有较高表达。     

再生障碍性贫血小鼠Foxp3的表达及意义

目的 探讨再生障碍性贫血(简称再障)小鼠外周血单个核细胞调节T细胞转录因子Foxp3的表达及其意义.方法 ①采用免疫介导(γ射线照射和淋巴细胞输入)的方法 建立再障小鼠模型.②RT-PCR方法 检测再障小鼠外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达.③免疫组织化学方法 检测再障小鼠脾脏组织Foxp3蛋白水平的表达.结果 ①再障小鼠外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达较正常小鼠降低(18.90±2.45 vs 57.27±5.71,P＜0.05).②Foxp3蛋白表达水平在再障小鼠脾脏中较正常小鼠低(19.2±10.0 vs 51.4±38.8,P＜0.05).结论 Foxp3在再障小鼠外周血中及脾脏组织中表达明显减少,提示Foxp3的表达降低可能参与再生障碍性贫血的免疫发病机制.     

再生障碍性贫血患者血液及骨髓中淋巴细胞亚群测定

我们采用 OKT 系列抗人淋巴细胞单克隆抗体,通过间接免疫荧光法,观察了30例再生障碍性贫血(以下简称再障)患者外周血及骨髓单个核细胞中淋巴细胞亚群的分布特点。在30例患者中25例外周血 OKT_4细胞减少,OKT_8细胞增加,OKT_4/OKT_6减低,其中21例 OKT_4/OKT_8倒置。25例患者骨髓单个核细胞中 OKT_4/OKT_8低于正常对照组。结果表明,部分再障病人存在免疫异常,而且再障的发病机制是复杂的。测定再障患者骨髓中 OKT_4/OKT_8不如外周血意义大。     

鹿龙再生汤对再障小鼠外周血单个核细胞及脾teff细胞T-bet和GATA-3基因表达的影响

目的 探讨鹿龙再生汤对再生障碍性贫血(简称再障)模型小鼠外周血单个核细胞以及脾CD4+CD25-细胞(teff细胞)中T-bet、GATA-3基因表达的影响.方法 通过IFN-γ腹腔注射加白消安灌胃的方法建造40只再障小鼠模型,分别予同体积的生理盐水、一般浓度、5倍浓度和10倍浓度的鹿龙再生汤进行灌胃治疗,分别归为再障组、再障小剂量组、再障中剂量组和再障大剂量组(n=10);另取40只正常小鼠按上述方法进行分组处理,分别归为正常组、正常小剂量组、正常中剂量组和正常大剂量组(n=10).通过骨髓活检病理学检查观察用药后各组小鼠的骨髓造血变化,免疫磁珠分选各组小鼠脾teff细胞,利用RT-PCR技术检测各组小鼠外周血单个核细胞以及脾teff细胞T-bet、GATA-3基因mRNA的表达情况.结果 (1)与再障组相比,再障中剂量组和再障大剂量组小鼠的骨髓造血有所恢复,尤其是再障大剂量组.(2)再障大剂量组小鼠的外周血单个核细胞以及脾teff细胞T-bet基因mRNA的表达、T-bet/GATA-3的比值较再障组均明显下降(P＜0.05),而GATA-3基因mRNA的表达明显上调(P＜0.05).结论 大剂量鹿龙再生汤可改善再障小鼠骨髓造血功能,可能是通过调节再障小鼠外周血单个核细胞及脾teff细胞的T-bet、GATA-3基因的表达来实现.     

再障经验方对急性再生障碍性贫血影响的体外研究

目的:探讨再障经验方治疗急性再生障碍性贫血的机制。方法:采用酶联免疫法检测急性再生障碍性贫血患者及正常对照者骨髓上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α),γ干扰素(IFN-γ)、可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)的含量,并观察再障经验方在体外对骨髓单个核细胞经植物血球凝集素诱生的造血负调控因子的调变作用。结果:急性再生障碍性贫血患者骨髓上清液中TNF-α、IFN-γ、sIL-2R的含量明显高于正常对照者,有显著性差异(P<0.05);体外试验显示,在多数急性再生障碍性贫血患者中再障经验方可明显抑制IFN-γ、sIL-2R的分泌(P<0.05或P<0.01),而对TNF-α无明显影响(P>0.05)。结论:再障经验方可能通过下调IFN-γ、sIL-2R的含量而促进造血功能恢复,起到治疗急性再生障碍性贫血的作用。     

急性白血病患者骨髓细胞CHFR基因表达及其临床意义

目的:探讨成人急性白血病(AL)患者骨髓细胞中有丝分裂早期稽查点CHFR基因的。方法　采用流式细胞术检测HL 60细胞的细胞周期,逆转录聚合酶链反应对65例初治(45例)及复发(20例)的AL患者进行CHFR基因mRNA水平的检测,对其中32例AL患者,用免疫印迹法检测CHFR蛋白表达水平。8名正常人作为对照。结果　(1)CHFR蛋白表达水平与S期细胞所占比例相关。(2) 60 .0% ( 27 /45 )的AL患者CHFR基因mRNA表达水平和40. 6% ( 13 /32)的AL患者CHFR的蛋白表达水平明显低于正常对照相。( 3 )复发组急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者的CHFR蛋白中位表达水平(0 .71)明显高于初治组(0 38),差异有统计学意义(t=2. 54,P=0. 017)。(4)CHFR的蛋白或mRNA高表达患者完全缓解率(分别为30. 2%, 42 .4% )明显低于CHFR蛋白或mRNA低表达患者(分别为88. 6%, 85. 4% ),差异有统计学意义(均P<0. 05 )。结论　在AL患者骨髓单个核细胞中CHFR基因高表达是一个耐药标志,是影响患者对化疗敏感性的因素,其低表达可能是AL患者对化疗敏感的指标之一。     

再生障碍性贫血患者造血祖细胞及免疫机制的研究

目的探讨再生障碍性贫血(再障)的发病机制。方法采用甲基纤维素及胶原半固体培养法对56例再障骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K进行培养;采用APAAP法及双抗体夹心酶联免疫吸附法(EL ISA)对再障患者外周血T细胞亚群、血清sIL-2R进行检测。结果再障患者CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K集落数均低于对照组,且严重型再障集落数减少程度与慢性再障相近;再障患者CD 3亚群细胞无变化,CD 4亚群细胞减低,CD 8亚群细胞增高,CD 4/CD 8降低,重型再障患者血清sIL-2R中水平高于正常对照组与慢性再障。结论骨髓造血祖细胞数量减少是再障发病的重要因素,其减少程度与再障的病情有关;细胞免疫功能异常及造血负调控因子可能在再障发病中起一定的作用。     

细胞周期蛋白A在成人急性白血病中的表达及意义

目的　探讨细胞周期蛋白A(cyclinA)在成人急性白血病 (AL)患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法　采用RT PCR法对 10 0例初治及复发的AL患者进行cyclinAmRNA水平的检测 ,对其阳性表达的PCR扩增产物进行DNA测序分析。对其中 75例AL患者 ,用流式细胞术检测cyclinA蛋白表达水平 ,10例正常人作为对照。 结果　 (1)AL患者cyclinA蛋白表达在细胞周期中的分布无异常 ,cyclinA蛋白及mRNA的阳性率 (分别为 6 6 7% ,5 9 0 % )和中位表达水平 (分别为18 5 % ,0 5 39± 0 4 90 )明显高于正常人 ,同一实验条件下未发现在正常人中有cyclinA蛋白及mRNA阳性表达 (P <0 0 1) ;经测序分析发现cyclinA阳性扩增片段序列与基因库中的目标序列完全一致 ;(2 )cyclinA蛋白及mRNA水平与S期、G2 /M期细胞所占的比例呈正相关 (P <0 0 1)。 (3)复发组急性淋巴细胞性白血病 (ALL)患者的cyclinA蛋白表达水平 (15 4 % )明显低于初治组(2 9 5 % ) ,差异有统计学意义 (t=14 4 18,P =0 0 2 2 )。 (4 )cyclinA蛋白或mRNA高表达患者的完全缓解率 (分别为 87 9%、85 7% )明显高于低表达患者 (分别为 38 2 %、5 3 3% ) (P <0 0 5 )。结论　cyclinA在AL患者中是一种增殖标志 ,是影响AL患者完全缓解率的因素 ,其高表达可能是AL患者     

Pin1在急性白血病中的表达及与Cyclin D1的相关性研究

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1在急性白血病发生发展中的作用及其与Cyclin D1的相关研究。方法用S-P免疫细胞化学染色方法检测62例初治急性白血病（AL）,10例完全缓解期急性白血病（AL-CR）及15例正常对照组（骨髓像正常的非恶性血液病患者）骨髓单个核细胞中Pin1、CyclinD1的表达。结果初治AL组的Pin1表达阳性率为59.7%,AL-CR组的表达阳性率为0,正常对照组的表达阳率为0,初治组与AL-CR组、正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,Pin1与CyclinD1的表达呈正相关关系（r=-0.339,P〈0.05）,Pin1蛋白的高表达与患者的年龄、性别、外周血白细胞计数及髓外浸润无明显相关性（P〉0.05）。结论结论Pin1的表达与Cyclin D1的表达密切相关,Pin1和CyclinD1的异常表达可能参与了急性白血病的发生发展。     

AA病人血浆和骨髓瘦素及其受体表达与意义

目的探讨瘦素及其受体在再生障碍性贫血（AA）病人血浆和骨髓中的表达及其意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测38例AA病人（其中重型者8例、非重型者30例）及22例健康体检者血浆中瘦素及可溶性瘦素受体（sLR）的水平;应用PV-6000二步法检测32例AA病人（其中重型者14例、非重型者18例）及17例对照组骨髓组织中瘦素及其受体的表达。结果 AA病人血浆瘦素水平为（14.16±4.50）μg/L,显著高于对照组的（10.87±3.21）μg/L（t=3.008,P〈0.01）;AA病人血浆sLR水平为（16.85±4.89）μg/L,显著低于对照组的（20.67±6.18）μg（t=2.641,P〈0.05）。AA病人骨髓组织中瘦素表达水平为0.192±0.030,显著高于对照组的0.168±0.024（t=2.808,P〈0.01）;AA病人骨髓组织中瘦素受体表达水平为0.198±0.041,显著低于对照组的0.235±0.054（t=2.704,P〈0.05）。重型AA病人血浆及骨髓中瘦素水平高于非重型者,瘦素受体水平低于非重型者,但差异无显著性（P〉0.05）。结论 AA病人血浆及骨髓中瘦素水平升高,而受体水平下降;瘦素在AA的发生发展中有失利用现象存在。     

PTEN?VEGF?FLT1基因在髓系白血病中的表达及其相关性研究

目的:探讨肿瘤抑制基因PTEN及血管内皮生长因子(VEGF)及其受体FLT1(VEGFR1)在白血病中的表达及其相关性。方法:应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测50例初治急性髓系白血病(AML),10例缓解期AML,10例慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)、10例CML急变期(CML-BC)患者和10例正常人骨髓单个核细胞(MMNCs)中PTEN、VEGF、FLT1 mRNA的表达。结果:初治AML患者PTEN mRNA表达水平明显低于缓解组AML和正常对照组,CML-BC患者PTEN mRNA表达水平低于CML-CP患者,在AML初治白血病中PTEN mRNA与VEGF和FLT1 mRNA表达负相关,PTEN低表达、VEGF和FLT1高表达与AML缓解率及髓外浸润相关。结论:髓系白血病患者中低表达PTEN基因,高表达VEGF及FLT1基因,并与白血病预后不良及髓外浸润密切相关,三者相互作用共同参与了白血病的发病。     

儿童急性淋巴细胞白血病MOST-1基因表达研究

目的 研究MOST-1基因在儿童急性淋巴细胞白血病骨髓单个核细胞中的表达,了解其与免疫分型和治疗反应的关系。方法 采用半定量RT-PCR方法测定了17例新发儿童急性淋巴细胞白血病(其中ALL-L3 3例)患者骨髓单个核细胞MOST-1基因的表达水平;PCR产物经DNA序列测定证实。结果 MOST-1基因仅表达于儿童急性淋巴细胞白血病L3型,而L1和L2均无表达;3例ALL-L2患者治疗前外周血幼稚细胞比例分别为72％、67％和12％,骨髓白血病细胞比例分别为98％、94％和67％,前两例L2患者MOST-1 mRNA的表达水平分别为另一例L3患者的3倍和2倍。2例L3患者经正规诱导完全缓解后无MOST-1基因表达。结论 MOST-1基因表达于儿童急性淋巴细胞白血病L3型,其表达水平与患者治疗前外周血幼稚细胞比例可能有关。     

小鼠骨髓细胞肾上腺素β2受体的表达及其意义

目的：探讨骨髓细胞肾上腺素β₂受体(β₂-AR)的表达及其意义,为神经因素调节骨髓造血理论提供依据。方法：用Ficoll淋巴细胞分离液从正常小鼠骨髓分离的单个核细胞直接涂片、粒-单集落造血祖细胞培养后涂片、骨髓基质细胞培养爬片,同时行骨髓石蜡切片及全骨髓细胞涂片,用免疫组织化学SP法检测上述标本中骨髓细胞β₂-AR的表达。另取小鼠采用淋巴细胞注射法制备免疫介导的再生障碍性贫血（简称再障）模型,β₂-AR拮抗剂组静脉注射ICI 118551,对照组静脉注射生理盐水,至第8天采用Western blotting 检测3组小鼠骨髓单个核细胞β₂-AR的表达。结果：正常小鼠骨髓细胞β₂-AR免疫组织化学反应可见胞质及胞膜呈深浅不等的棕黄色,其中单个核细胞48%强阳性,造血祖细胞55%中等阳性、45%弱阳性,骨髓基质细胞68%强阳性,其他辅助细胞呈不同程度的阳性反应。再障模型组、β₂-AR 拮抗剂组及对照组小鼠骨髓单个核细胞β₂-AR相对表达量分别为1.03±0.31、1.72±0.29及1.41±0.35。与对照组比较,再障模型组β₂-AR表达量明显降低（P<0.05）,β₂-AR拮抗剂组β₂-AR表达明显增加（P<0.05）。结论：正常小鼠骨髓细胞有β₂-AR表达,其表达量与骨髓造血状态有关,提示β₂-AR可能通过神经-内分泌-免疫网络途径参与造血调节。     

多药耐药相关蛋白基因在急性白血病中的表达

（1）目的 探讨多药耐药相关蛋白基因（MRP）在急性白血病中表达的意义。（2）方法 应用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）。检测了48例不同病期的急性白血病病人骨髓及10例正常人外周血单个核细胞MRP信使RNA（mRNA)的表达。（3）结果 正常人外周血单个核细胞存在MRP的低水平表达;复发的急性白血病病人MRPmRNA表达明显增高,其对预后及复发的预测作用有待进一步研究。