NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎中细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas、Fas-L和FLIP的表达

目的 观察NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎时甲状腺内细胞凋亡和凋亡相关蛋白Fas、Fas-L和FLIP的表达情况,研究细胞凋亡在自身免疫性甲状腺炎中的作用.方法 7～8周龄的NOD.H-2h4小鼠,饲以0.05%NaI溶液作为实验组,对照组小鼠则饲以自来水.在给碘后8,16,32周处死小鼠,HE染色观察甲状腺的炎症程度,TUNEL方法观察甲状腺内细胞凋亡情况,免疫组化方法观察凋亡相关蛋白Fas、Fas配体(Fas-L)和FLICE抑制蛋白(FLIP)的表达情况.结果 实验组小鼠出现自身免疫性甲状腺炎,对照组无甲状腺炎产生.甲状腺炎时,TUNEL染色阳性细胞主要集中在浸润淋巴细胞中,甲状腺滤泡上皮细胞罕见凋亡;Fas、Fas-L和FLIP主要表达在甲状腺内的浸润淋巴细胞上;部分甲状腺滤泡上皮细胞表达Fas,而Fas-L和FLIP在甲状腺滤泡上皮细胞未见明显表达.结论 NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎时甲状腺细胞无明显凋亡,提示细胞凋亡机制未参与甲状腺炎的发病.甲状腺内浸润淋巴细胞虽然表达Fas但并未出现明显凋亡,这可能与其同时表达抗凋亡蛋白FLIP有关.     

肝细胞癌细胞凋亡、增殖及其相关调控因子表达的研究

目的：探讨肝细胞癌细胞凋亡、增殖及其相关调控因子表达特征与HCC分化状态的关系。方法：分别以末端脱氧核苷酸转移酶（TdT)介导的d-UTP缺口末端标记技术（TUNEL）和SP免疫组化方法检测35例人HCC与其癌旁组织中凋亡细胞和增殖细胞核抗原（PCNA）及p53,Fas的表达特征，并结合临床资料进行分析。结果：凋亡细胞在HCC组织中呈散在分布，其凋亡细胞指数显著低于癌旁组织，而PCNA指数明显于癌旁组织，在HCCⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级中，凋亡细胞指数分别为0．53，0．42，0．20，0．21。PCNA指数分别为0．06，0．41，0．63，0．80，均存在显著差异；HCC组的p53表达随Edmondson分级呈递增现象。而Fas均呈低水平表达，结论：HCC的分化程度与细胞凋亡指数呈正相关，而与PCNA指数呈负相关，HCC细胞凋亡为p53依赖型，p53基因高突变，Fas表达的下调的肝癌组织其恶性程度较高，提示预后不佳。     

乳头状甲状腺癌中Fas和FasL与PCNA关系的免疫组化双标法

目的:探讨细胞凋亡相关蛋白Fas和FasL与增殖指标PCNA在乳头状甲状腺癌中的分布及关联。方法:以非毒性甲状腺肿(NTG)为对照,采用TUNEL及免疫组织化学双标记法检测9例乳头状甲状腺癌(PTC)患者甲状腺标本中细胞凋亡水平,PCNA、Fas和FasL的表达及分布。结果:PTC凋亡水平显著低下,与NTG组比较无差别(P>0.05),PTC中PCNA、Fas、FasL免疫染色阳性率分别为88.89%、87.5%、87.5%。PTC中PCNA阳性细胞增加,免疫染色强度增强并显著高于NTG组(P<0.01)。其标本阳性率PTC组>NTG组,但无显著性差异(P>0.05)。PTC中Fas、FasL免疫染色亦较NTG增强。部分癌细胞中PCNA与Fas或FasL共表达。结论:PTC凋亡极少见,增殖活动增加;Fas、FasL表达相对上调,共表达现象提示PTC中可能存在凋亡抑制现象。     

大骨节病与骨关节病患者软骨细胞凋亡及其机制的比较研究

目的比较分析大骨节病与骨关节病关节软骨中细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达分布特点，探讨两病发病机制的异同。方法收集大骨节病和骨关节病的关节软骨各15例．并以15例正常人作对照。采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记（TUNEL）技术和免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶（B-SA）法染色，观察大骨节病、骨关节病和正常对照关节软骨的凋亡细胞和Bcl-2、Bax、Fas及iNOS蛋白阳性表达率及其分布特点。结果（1）大骨节病及骨关节病关节软骨凋亡阳性细胞数较正常关节软骨增多（F=20．90～53．16，df=42，P〈0．01），且关节软骨剥蚀区的凋亡阳性细胞数较未剥蚀关节软骨区增多（t=4，154-6.004，df=28，P〈0.01），但大骨节病与骨关节病之间软骨细胞凋亡阳性数无显著性差异（t=1.329～1.362，df=28，P〉0.05）。（2）大骨节病与骨关节病关节软骨Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性细胞数较正常关节软骨增多（F=25.46-215.31，df=42，P〈0．01），且关节软骨剥蚀区Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性细胞数较未剥蚀区增多忙2．278～7.77，df=28，P〈0．05），但大骨节病患者与骨关节病Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达阳性细胞数无显著性差异（t=0.284-1．590，df=28，P〉0．05）。结论大骨节病与骨关节病均有相似的细胞凋亡，而且凋亡机制相同，即Bcl-2、Bax、Fas及iNos途径。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的：探讨姜黄素(cureumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法：选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1．25—20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax的表达。结果：姜黄素对HO-8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO-8910细胞积聚在S和G2／M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas-L、Bcl-2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论：姜黄素对人卵巢癌细胞株H0．8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas-L、Bcl-2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

APP17肽对卵巢去势大鼠海马神经元凋亡相关因子表达的影响

为研究卵巢去势大鼠海马神经元内凋亡相关因子Fas、Fas-L、NFκB、c-fos、c-Jun的表达及APP17肽对这些因子表达的影响,将健康雌性Wistar大鼠行双侧卵巢切除手术造模,并用APP17肽治疗,分别用免疫组化方法观察Fas、Fas-L、NFκB、c-fos 、c-Jun的表达, 用TUNEL方法检测神经元的凋亡.结果发现卵巢去势大鼠海马神经元Fas、Fas-L、c-fos、c-Jun的表达增高,而NFκB的表达则减少;使用APP17 肽治疗后,上述蛋白质的表达恢复到正常水平,TUNEL检测未发现凋亡神经元. 提示卵巢去势大鼠发生了海马神经元的凋亡相关蛋白的改变,可能是神经元处于凋亡前状态;APP17肽可改善卵巢去势大鼠海马神经元内凋亡相关蛋白的表达,维持神经元的正常功能.     

大鼠胚肾组织促帕金森病移植神经元存活的实验研究

目的：探讨大鼠胚肾组织对帕金森病移植神经元的促存活作用。方法：用神经毒剂6-OHDA单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区(VTA)和黑质致密部(SNC)建立动物模型：实验分3组：A组将胚鼠腹侧中脑组织(VM)预置于胚肾组织培养液中：B组将VM组织预置于胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)营养液中；C组将VM组织预置于DMEM营养液中。6h后移植，于移植后1、4、7d将动物处死，采用原位末端标记法(TUNEL)结合流式细胞术及免疫组织化学方法对3组移植神经元；凋亡和存活情况进行定量分析。结果：根据TUNEL、酪氨酸羟化酶(TH)染色和流式细胞仪检测结果，A、B移植组较C移植组移植神经元凋亡率降低，凋亡细胞数减少，纹状体移植针道和针道周围都可见大量TH阳性细胞，而且TH阳性神经元数量明显增多，另外，A移植组和B移植组TH阳性神经元和凋亡细胞数比较也存在统计学差异。结论：胚肾组织分泌物对帕金森病移植神经元具有促存活作用；胚肾组织培养液较单一生长因子作用好。     

Fas/Fas-L介导热应激诱导的胸腺细胞凋亡

目的 探讨体外热应激诱导小鼠胸腺细胞凋亡与Fas、Fas-L表达的关系。方法 用流式细胞术检测体外热应激后再培养的胸腺细胞不同时间的凋亡率及Fas、Fas-L表达阳性率。结果 体外热应激诱导胸腺细胞的凋亡率和Fas及Fas-L表达阳性率均呈时间依赖性增高,体外热应激诱导胸腺细胞Fas/Fas-L的表达与凋亡明显相关。结论 Fas与Fas-L是介导体外热应激损伤胸腺细胞凋亡的重要分子。     

Fas／Fas—L介导热应激诱导的胸腺细胞凋亡

目的 探讨体外热应激诱导小鼠胸腺细胞凋亡与Fas、Fas-L表达的关系。方法 用流式细胞术检测体外热应激后再培养的胸腺细胞不同时间的凋亡率及Fas、Fas-L表达阳性率。结果 体外热应激诱导胸腺细胞的凋亡率和Fas及Fas-L表达阳性率均呈时间依赖性增高,体外热应激诱导胸腺细胞Fas/Fas-L的表达与凋亡明显相关。结论 Fas与Fas-L是介导体外热应激损伤胸腺细胞凋亡的重要分子。     

细胞凋亡、PCNA、p53和Fas与肝细胞癌临床病理特征关系的研究

目的探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中细胞凋亡、增殖及其相关调控因子p53和Fas表达特征与HCC临床病理的关系.方法分别以末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的d-UTP缺口末端标记技术(TUNEL)和S-P免疫组化方法检测35例人HCC与其癌旁组织中凋亡细胞和增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)及p53、Fas的表达特征,并结合临床病理资料进行统计学分析.结果细胞凋亡指数(AI)、PCNA指数(LI)、p53和Fas表达与HCC的性别、年龄及肿瘤大小无显著性差异;AI、p53和Fas表达与HCC的组织学类型间也无显著差异(P＞0.05);LI与HCC组织学类型有关:实体型较梁状型和腺样型明显增高(P＜0.01);随Edmondson分级、TNM分期增加,AI逐渐减少,而LI及p53表达强度则逐级增高,Fas表达无显著变化(P＞0.05).结论 HCC的恶性程度与细胞凋亡指数呈负相关,而与PCNA指数呈正相关.HCC细胞凋亡为p53依赖型,p53基因高突变、Fas表达的下调的肝癌组织其分化程度较低,提示预后不佳.     

不同胚龄人神经前体细胞分离培养及分化特性的比较

目的 研究不同胚龄人神经前体细胞(neural progenitor cell,NPC)培养及增殖分化特性.方法 取人胚原代细胞分为小胚龄全脑组、较大胚龄全脑组及较大胚龄纹状体组,悬浮培养.鉴定细胞球巢蛋白抗原的表达,分化及自我更新能力.观察各组培养细胞的生长、增殖状况.运用免疫荧光细胞化学法比较各组神经球分化后,神经元及星形胶质细胞的比例.结果 各组培养出的悬浮细胞球巢蛋白抗原阳性,可分化为MAP2或GFAP阳性细胞,BrdU掺入实验阳性.培养1周时,较大胚龄纹状体组的神经球数目最多,形态最规则,其次分别为小胚龄全脑组、较大胚龄全脑组.采用有限稀释法可从较大胚龄纹状体组挑选单细胞克隆球.各组NPC诱导分化后,MAP2或GFAP阳性细胞率组间比较差异无显著性.结论 不同胚龄人脑组织均可培养出NPC.取全脑时,随着胚龄的增加,NPC培养难度增大,但针对不同胚龄可采用不同的原代取材方法.不同胚龄NPC的星形胶质细胞及神经元分化比例一致.     

海马区Bcl-2蛋白在新生大鼠脑缺血后的表达

目的：通过研究新生大鼠脑缺血时Bcl-2蛋白在海马区的表达特点,探讨Bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤的作用。方法：48只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达情况。结果：TUNEL染色的阳性细胞数与Bcl-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异,海马区Bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6 h达到高峰。结论：Bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。     

Bcl-2基因转染骨髓干细胞治疗激素性股骨头坏死的疗效研究

研究Bcl-2 基因转染的骨髓间充质干细胞（BMSCs）结合髓芯减压法对兔早期激素性股骨头坏死的疗效。方法使用共计40只家兔复制早期激素性股骨头坏死模型,其中成功的模型家兔共28 只。随机分为4 组：空白对照组6 只,不作任何处理;髓芯减压组6 只,单纯减压;BMSCs 治疗组8 只,在减压同时植入BMSCs;Bcl-2 治疗组8 只,在减压同时植入Bcl-2 基因转染的BMSCs。植入后分别在第8、12 周各取股骨头标本行病理学检查及骨细胞凋亡检测,观察骨细胞生长及凋亡情况。结果成功复制兔早期激素性股骨头坏死动物模型;培养出BMSCs后进行传代;Bcl -2 基因转染成功;治疗12 周后,Bcl-2 治疗组动物的一般情况改善,组织切片和细胞凋亡检测结果显示,Bcl-2 治疗组的空骨陷窝和骨细胞凋亡数量与其他3 组比较,差异有统计学意义（p <0.05）。结论使用髓芯减压将Bcl-2 基因修饰的BMSCs 移植到兔早期激素性股骨头坏死动物模型体内,具有较好的成骨治疗作用。     

铜绿假单胞菌制剂抑制鼻咽癌细胞体外增殖

目的观察铜绿假单胞菌(PA-MSHA)注射液对人鼻咽癌细胞株5-8F及6-10B的生长抑制作用,初步探讨其作用机制。方法 MTT法检测鼻咽癌细胞体外增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Westem blotting检测细胞周期及凋亡相关蛋白。结果MTT结果表明,与未加药组相比,加药组5-8F及6-10B细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。细胞周期检测发现药物处理后的肿瘤细胞发生G1/S期阻滞(P<0.05)。Westerm blotting检测发现药物处理后的两组细胞周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6及凋亡促进蛋白Bax表达上调,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调。结论 PA-MSHA能够抑制鼻咽癌5-8F及6-10B细胞株增殖,其机制可能是通过影响细胞周期调节并促进细胞凋亡。     

IL-12siRNA对脑胶质瘤细胞增殖与分化的影响

目的 观察IL-12 siRNA对脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响.方法将含有IL-12 siRNA的表达质粒稳定转染人脑胶质瘤细胞,应用MTT法及AO/EB染色观察脑胶质瘤细胞的增殖与凋亡情况.结果转染后,MTT法显示IL-12 siRNA组中的细胞生长受抑明显,AO/EB染色显示IL-12siRNA组的凋亡率较阴性对照组及空载体组高.结论 IL-12siRNA靶向干扰了IL-12蛋白的表达,并对脑胶质瘤细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用.     

常山酮对人急性单核细胞白血病细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的：研究常山酮对人急性单核细胞白血病（THP-1）细胞增殖、凋亡及Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响.方法：取对数生长期的THP-1细胞,分别加入不同浓度的常山酮,CCK-8法检测THP-1增殖率;流式细胞术检测THP-1凋亡情况;实时定量PCR检测Bax及Bcl-2 mRNA的表达情况.结果：常山酮能抑制THP-1细胞增殖、诱导其凋亡,呈剂量依赖关系.常山酮作用后,THP-1细胞内Bax mRNA表达显著升高,而Bcl-2 mRNA表达显著下降.结论：常山酮能抑制THP-1细胞增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax mRNA表达、下调Bcl-2 mRNA表达相关.     

外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:研究IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞增殖活性及相关基因表达的影响. 方法:用流式细胞仪观察C6/IL-18细胞周期、增殖指数的变化;用RT-PCR,蛋白印迹、免疫细胞化学方法分析C6/IL-18细胞cyclin D1,cyclin B1,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达. 结果:与亲代C6细胞相比,C6/IL-18细胞表现为G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,细胞增殖指数(PI)降低. C6/IL-18细胞的cyclin D1和cyclin B1,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低. 结论: 外源性IL-18基因可降低C6细胞的增殖活性,其机制可能与Bcl-2,cyclin B1和cyclin D1表达下调有关.     

Effect of Acupuncture on Proliferation and Differentiation of Neural Stem Cells in Brain Tissues of Rats with Traumatic Brain Injury

Objective:To observe the effect of acupuncture on proliferation and differentiation of neural stem cells in brain tissues of rats with traumatic brain injuny.Methods:Thirty SD rats were randomly and equally allocated to the sham-operated,the model and the acupuncture groups.The traumatic brain injury model was established by the free drop method.For the rats in the acupuncture group,acupuncture was applied once a day for 7 days.Brain histotomy was carried out when treatments were completed.Immunohistochemical techniques were adopted to detect the cells that express nestin,neurofilament proteins(NF)-200 and glial fibrillary acidic proteins(GFAP),the markers of neural stem cells,neurons,astrocytes respectively.Results:Compared to the sham-operated group,the number of nestin-positive cells and NF-200-positive cells in brain tissues was decreased significantly in the model group(P<0.01),whereas the number of GFAP-positive cells was significantly increased (P<0.01).Compared to the model group,the positive cells of nestin,NF-200,GFAP in brain tissues in the acupuncture group were increased obviously(P<0.01).Conclusions:Acupuncture can significantly increase the number of nestin-positive cells,NF-200-positive cells and GFAP-positive cells,indicating the significant increase of neural stem cells,neurons and astrocytes in number.Acupuncture can improve neuranagenesis by promoting the proliferation and differentiation of neural stem cells in brain tissues.This might be one of the mechanisms for acupuncture to treat traumatic brain injury and to promote the repair of nervous function.     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:SD大鼠84只,随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=24)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=24)和MSCs组(n=24).模型组、PBS组和MSCs组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,假手术组除不插尼龙线外,其余步骤相同.PBS组和MSCs组分别于建模成功后24 h分别经颈动脉注入等体积的PBS液和已制备好的同种异体MSCs悬液.每组于脑缺血2 h再灌注2 d、4 d、6 d、8 d时行神经功能缺损评分及脑灌注固定取材,采用免疫组化染色及TUNEL检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达及凋亡细胞数.结果:假手术组在各时间点神经功能评分为0分,无神经功能缺损,未见细胞凋亡,未见Bcl-2和Bax表达.与模型组和PBS组比较,脑缺血2 h再灌注4 d开始,MSCs组神经细胞凋亡数、Bax蛋白表达和神经功能缺损评分较低,Bcl-2蛋白表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:骨髓间充质干细胞移植能改善脑损伤大鼠的功能;上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,可能是其主要机制之一.     

As2O3诱导NB4、HL-60细胞凋亡的机制研究

目的探讨三氧化二砷(As₂O₃)在体外抑制急性早幼粒白血病(acute promyelocyticleukemia, APL)细胞NB4、HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡的分子机制。方法 通过WST-8法检测上述两个细胞株的增殖抑制曲线;用AnnexinV/PI流式细胞术检测细胞的凋亡;用Real time PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、p53、C-myc、Survivin在As₂O₃处理前后的表达变化,同时用Westernblot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、P53在As₂O₃处理前后的表达变化。结果 As₂O₃能够显著抑制两种细胞增殖, Westernblot检测及Realtime PCR结果显示,As₂O₃处理引起了两种细胞中Bax、Caspase-3、Caspase-8 、Caspase-9基因表达水平增加,且蛋白表达水平上都出现了活性形式的Caspases。NB4细胞中Survivin、C-myc、Bcl-2的基因表达水平都显著降低,突变型p53蛋白在细胞内的量同样显著下降;HL-60细胞的C-myc表达水平显著降低,但Survivin、Bcl-2表达水平无明显变化。结论 As₂O₃能在药物临床浓度范围内有效抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60、NB4的细胞增殖, 但方式不同;1.5μmol/L浓度的As₂O₃对NB4细胞生长的抑制体现在诱导细胞分化并诱导细胞凋亡,对HL-60细胞生长的抑制只体现在诱导细胞分化。HL-60细胞中高表达的Survivin、Bcl-2抑制了细胞的凋亡。NB4、HL-60细胞株中P53基因的细胞遗传学变异的不同可能是As₂O₃对这两种细胞增殖抑制机制差异的主要原因之一。