抑制 SIRT1表达促进三羟基异黄酮诱导HeLa 细胞凋亡的实验观察

目的：利用HeLa宫颈癌细胞株探讨去乙酰化酶SIRT1是否参与三羟基异黄酮的抗癌作用。方法以培养的HeLa细胞为研究对象,实验分对照组（ A组）、三羟基异黄酮组（ B组）、SIRT1抑制剂Splitomicin处理组（ C组）及Splitomicin＋三羟基异黄酮组（ D组）。采用MTT法测定不同浓度三羟基异黄酮对HeLa细胞生长的抑制情况;Hoechst 333258荧光染色检测各组细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期分布情况;实时定量PCR及Western blot检测各组细胞内SIRT1表达水平变化。结果 B、D组细胞抑制率、细胞凋亡率、细胞周期分布比较均有统计学差异, A、B组细胞内SIRT1 mRNA及蛋白表达率比较均有统计学差异（P＜0．05或＜0．01）。结论抑制SIRT1可提高三羟基异黄酮对HeLa细胞的杀伤作用, SIRT1可能是三羟基异黄酮抗肿瘤作用的靶点。     

大鼠神经干细胞体外生长特性

目的 :观察大鼠神经干细胞的体外生长特性。方法 :利用无血清培养基悬浮培养 ,观察神经干细胞的体外生长过程。并比较不同接种密度 ,不同传代时间对神经干细胞生长的影响。用免疫细胞化学技术检测神经干细胞巢蛋白 (nestin)的表达 ;用吖啶橙 (AO) /溴化乙啶 (EB)检测细胞活性 ;用DAPI荧光染料标记细胞。结果 :神经干细胞聚合成细胞团生长 ,细胞团成分复杂。细胞接种密度以 5× 1 0 5个细胞 /ml组生长较好 ;原代细胞生长 3～ 4d后传代为宜。传代后 4d时可获得大量nestin阳性细胞。DAPI标记率为 1 0 0 %。结论 :细胞团成分复杂。神经干细胞要高密度接种 ,及时传代。DAPI可作为有效的体外标记物     

逆转录病毒介导IL-18基因在大鼠胶质瘤细胞C6中的表达

目的 :建立表达IL 18基因的大鼠胶质瘤细胞C6 /IL 18,并探讨外源性IL 18基因对C6细胞生长的影响。方法 :应用逆转录病毒载体 ,将IL 18基因导入C6细胞。经G4 18筛选后 ,获得表达IL 18分子的细胞克隆C6 /IL 18。用RT PCR法检测目的基因mRNA的表达 ;用流式细胞和免疫细胞化学染色法检测目的蛋白的表达。用ELISA法检测C6 /IL 18细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN γ的能力 ,以确定IL 18的生物学活性。用MTT比色法检测细胞体外增殖的状况 ,用流式细胞技术检测细胞的增殖活性 ,并建立大鼠胶质瘤模型 ,观察C6 /IL 18细胞体内致瘤性的改变。结果 :外源IL 18基因于mRNA水平和蛋白水平可获得稳定表达 ,并可诱生大鼠脾细胞分泌IFN γ。同时 ,该细胞系的体外增殖率及体内致瘤性 ,均较亲代C6胶质瘤细胞明显下降。结论 :外源性IL 18基因能部分地抑制C6细胞的体外增殖率和体内致瘤性。建立了可进一步用于相关肿瘤基因免疫和基因治疗研究的大鼠胶质瘤细胞系C6 /IL 18。     

基于ROS/PI3K/Akt信号通路探讨异牛肝菌素对人胃癌BGC-823细胞凋亡影响及机制

目的 基于ROS/PI3K/Akt信号通路探讨异牛肝菌素（iso-suillin）对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响及其机制。 方法 体外培养人胃癌BGC-823细胞,分别采用7 μmol/L、14 μmol/L、28 μmol/L不同浓度iso-suillin干预48 h,将7 μmol/L浓度iso-suillin干预的定义为低剂量组,14 μmol/L浓度iso-suillin干预的定义为中剂量组,28 μmol/L浓度iso-suillin干预的定义为高剂量组,同时设置对照组（以等量生理盐水干预48 h）。采用Hoechst 33342荧光染色法观察iso-suillin处理后人胃癌BGC-823细胞形态学变化,蛋白免疫印迹法检测iso-suillin处理后人胃癌BGC-823细胞凋亡相关蛋白表达水平,活性氧荧光探针染色法(2,7-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA）检测iso-suillin处理后人胃癌BGC-823细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,蛋白免疫印迹法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平。 结果 Hoechst 33342荧光染色显示随着iso-suillin浓度增加,呈亮蓝色的细胞越来越多,染色质凝聚,出现凋亡小体。与对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组凋亡率均升高（P＜0.05）;低剂量组、中剂量组、高剂量组Caspase-3、Caspase -8、Caspase -9、Bax相对表达量均增加, Bcl-2相对表达量降低（P＜0.05）。与对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组人胃癌BGC-823细胞ROS水平均升高（P＜0.05）。随着iso-suillin浓度的增加,PI3K/Akt信号通路中PI3K、Akt、mTOR蛋白相对表达量均呈降低趋势（P＜0.05）。 结论 异牛肝菌素可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡,其机制可能与上调ROS,下调PI3K/Akt信号通路中PI3K、Akt、mTOR蛋白有关。     

异牛肝菌素对人胃癌BGC-823细胞增殖及周期影响

目的 探讨异牛肝菌素(iso-suillin)对人胃癌BGC-823细胞增殖及细胞周期的影响。方法 体外培养人胃癌BGC-823细胞至对数生长期,分别使用12.5、25.0、50.0μg/ml的异牛肝菌素干预72h,同时设置对照组。CCK-8法测定人细胞增殖抑制率,流式细胞术碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期分布情况,Western blot法检测p21、p53、cyclinD1、CDK4蛋白表达,Hoechst 33342荧光染色观察细胞凋亡情况。结果 随时间延长,12.5μg/ml剂量组、25.0μg/ml剂量组和50.0μg/ml剂量组A值均减小,细胞增殖抑制率均升高(P均＜0.05);与对照组比较,12.5μg/ml剂量组、25.0μg/ml剂量组和50.0μg/ml剂量组不同时刻的A值减小,细胞增殖抑制率升高,且呈现出剂量依赖效应(P＜0.05)。与对照组比较,12.5μg/ml剂量组、25.0μg/ml剂量组和50.0μg/ml剂量组细胞G₀/G₁期细胞比例增加,S期细胞比例减少,并且呈现出剂量依赖效应(P＜0.05)。与对照组比较,12.5μg/ml剂量组、25.0μg/ml剂量组和50.0μg/ml剂量组p21、p53蛋白相对表达量升高,cyclinD1、CDK4蛋白相对表达量降低,且呈现出剂量依赖效应(P＜0.05)。与对照组比较,12.5μg/ml剂量组、25.0μg/ml剂量组、50.0μg/ml剂量组细胞凋亡率升高,且呈剂量依赖性(P＜0.05)。结论 异牛肝菌素可抑制人胃癌BGC-823细胞增殖,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,同时促进其凋亡,其作用机制可能与上调p21、p53蛋白表达,下调cyclinD1、CDK4蛋白表达有关。     

人自体表皮细胞培养及移植研究

目的为提供烧伤、创伤大面积皮肤缺损修复时所需的表皮细胞.方法用少量的自体表皮细胞体外培养后移植于创面.结果移植后表皮细胞成活增殖,皮肤表皮获得重建.结论为皮源严重不足的烧伤、创伤患者的皮肤修复提供了一种方法.     

Wistar乳鼠表皮细胞培养及移植实验研究

目的 提供烧伤或创伤皮肤缺损修复所需的表皮细胞.方法 采用少量的自体或异体表皮细胞,体外培养后移植于创面.结果 移植后表皮细胞成活增殖,皮肤获得重建.结论 本方法为烧伤或创伤患者在皮源不足的情况下,及时快速通过体外培养上皮细胞,移植后表皮获得重建,是解决烧伤或创伤皮肤缺损修复的重要方法.     

SIRT蛋白功能研究进展

Sirtuins蛋白是一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide,NAD＋）依赖的组蛋白去乙酰化酶。酵母Sirtuins与染色体末端的失活及rDNA转录沉默有关,可以延缓抑制衰老,延长寿命。Sirtuins是一个高度保守的基因家族,它不仅存在于酵母、果蝇、秀丽线虫等细胞内,还广泛存在于哺乳动物各种细胞内。至今为止,人类细胞内已经发现了7种不同类型的Sirtuins（SIRT）蛋白,分别命名为SIRT1～7。     

顺铂增强替尼泊甙杀伤小细胞肺癌细胞系的作用

目的通过顺铂(CDDP)与替尼泊甙(VM-26)联合作用,探讨顺铂增强替尼泊甙对小细胞肺癌细胞株杀伤作用的机制。方法用MTT法,测定H446小细胞肺癌细胞24 h抑制率;AO/EB双荧光染色观察细胞活率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂条带;半定量RT-PCR及蛋白印迹检测DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)及特化蛋白1(SP1)的表达。结果CDDP与VM-26联合应用有明显的协同效应;二药合用与单独用药相比,细胞活率明显降低,DNA损伤程度增加。H446细胞经CDDP单独作用可以促进SP1、TopoⅡα和TopoⅡβmRNA及蛋白的表达;经VM-26单独作用后,TopoⅡα和TopoⅡβmRNA及蛋白表达降低,而SP1表达无明显改变;二药合用后可见TopoⅡαmRNA及蛋白的表达比单独应用CDDP下调,SP1 mRNA及蛋白的表达比单用VM-26升高,但与单用CDDP相比没有明显变化。结论CDDP通过上调SP1促进H446细胞中TopoⅡ表达,为TopoⅡ抑制剂类药物VM-26提供更多的作用靶点,能够明显提高对小细胞肺癌的抑制作用。     

外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞周期及相关基因表达的影响

目的:本研究拟从分子水平探讨IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞周期及其相关基因表达的影响。方法:用流式细胞仪检测C6/IL-18细胞周期、细胞增殖指数的变化;以MTT法检测细胞的增殖活性及细胞抑制率,用RT-PCR、Western blot分析C6/IL-18细胞PCNAc、yclin D1c、yclin B1、p21 mRNA及蛋白的表达。结果:与C6/LXSN细胞及亲代C6细胞相比,C6/IL-18细胞周期有所改变,表现为G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,细胞增殖指数(PI)与细胞增殖活性降低。C6/IL-18细胞的PCNAc、yclin D1c、yclin B1 mRNA及蛋白表达降低,p21 mRNA及蛋白表达增高。结论:外源性IL-18基因表达可降低C6细胞的增殖活性,下调PCNA,cyclin D1,cyclin B1表达,上调p21基因表达,其作用机制有待进一步研究。