消炎痛抗肿瘤作用及体外增敏作用的研究

采用ＭＴＴ法、ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞仪分析技术、原位ＤＮＡ末端脱氧核苷酸转移酶法（ＴｄＴ），观察消炎痛对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。结果：消炎痛可显著抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡，呈剂量－时间依赖性效应；并可协同５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）的抗肿瘤细胞增殖作用。提示消炎痛通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

消炎痛抑制人结肠癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

探讨消炎痛对人结肠癌细胞株的抗肿瘤效应，以阐明其抗肿瘤机理。方法：分别用消炎痛（终浓度１００～８００μｍ）或消炎痛＋５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）处理体外培养的人结肠癌细胞株ＲＫＯ，采用ＤＮＡ凝胶电泳，ＭＴＴ法，流式细胞仪分析技术，检测消炎痛对细胞增殖和凋亡的影响。结果：消炎痛可显著抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡，并呈剂量———时间依赖性；消炎痛可协同５－Ｆｕ抗肿瘤细胞增殖效应。结论：消炎痛抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡是其抗结肠癌作用机制的重要方面之一。     

VP-16诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡的研究

为研究ＶＰ－１６对雄激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ－３凋亡的诱导作用,应用ＨＥ染色观察细胞的形态学改变,以ＤＮＡ凝胶电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞凋亡和细胞周期分布,同时应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究ＶＰ－１６对ＰＣ－３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明,（１）凋亡的ＰＣ－３细胞呈明显的形态学改变;（２）ＤＮＡ断裂呈梯形变化;（３）ＰＣ－３细胞凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和时间延长逐渐增高;（４）ＶＰ－１６能够明显抑制ＰＣ－３细胞ＤＮＡ的合成。提示ＶＰ－１６可诱导前列腺肿瘤细胞凋亡。     

化疗药物不同配伍诱导人胰腺癌细胞株细胞凋亡

目的通过对临床常用化疗药物５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）、丝裂霉毒（ＭＭＣ）、卡铂（ＣＢＰ）、阿霉素（ＡＤＭ）和表阿霉素（Ｅ－ＡＤＭ）相互配伍诱导人胰腺癌细胞株细胞凋亡的观察,探讨化疗药物抑制胰腺癌细胞生长的作用机制,为临床制定合理的化疗方案提供理论依据。方法不同配伍的化疗药物作用于胰腺癌细胞后,以倒置显微镜和荧光显微镜观察其形态变化;以流式细胞仪检测细胞ＤＮＡ含量的变化,计算出凋亡细胞的比例;提取细胞ＤＮＡ,进行凝胶电泳确定细胞凋亡的发生。结果联合化疗可以诱导胰腺癌细胞凋亡,与引起细胞坏死相比,诱导肿瘤细胞凋亡的化疗药物剂量小、作用时间短;随作用时间的延长和药物剂量的增加,凋亡细胞的比例也增加;不同配伍的化疗药物诱导不同胰腺癌细胞株细胞发生凋亡的情况是不完全相同的。结论诱导肿瘤细胞凋亡是化疗药物抑制胰腺癌细胞生长的主要机制,能否诱导胰腺癌细胞发生凋亡可作为判断不同配伍的化疗药物抑制胰腺癌细胞生长能力的重要指标之一。     

苯乙酸对胶质瘤细胞C_6DNA合成的抑制作用

目的：观察诱导分化剂苯乙酸对胶质瘤细胞Ｃ６的诱导分化作用,并在分子水平上探讨其作用机理。方法：细胞计数和〔３Ｈ〕－ＴｄＲ掺入法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期。结果：苯乙酸对细胞增殖存在剂量（２５ｍｍｏｌ／Ｌ,５０ｍｍｏｌ／Ｌ）依赖性抑制;免疫细胞化学检测ＣＰＭ值降低,肿瘤细胞ＤＮＡ合成减少;细胞周期分析Ｇ０／Ｇ１期所占比例下降,Ｓ期相对升高。结论：苯乙酸可阻抑细胞增殖周期,使细胞周期增殖循环中止于Ｓ期中ＤＮＡ合成准备期Ｓ０期,ＤＮＡ合成减少,抑制细胞增殖。其作用机理为抑制细胞周期中Ｇ１期的ＲＮＡ和蛋白质合成     

尼可地尔在抑制内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨丝裂素活化的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）,在ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔抑制内皮素（ＥＴ－１）诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法：将１０~（－７）～１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ的尼可地尔导于培养血管平滑肌细胞,ＥＴ－１诱导培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法测定磷酸化 ＭＡＰＫ蛋白表达。［~３ Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞 ＤＮＡ合成。结果：ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔抑制ＥＴ－１诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞［~３Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入并同时剂量依赖性下调 ＭＡＰＫ蛋白表达。结论： ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔可通过下调ＭＡＰＫ的表达从而抑制ＥＴ－１诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

VP16诱导Raji肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的 从细胞凋亡角度探讨ＶＰ１６抗肿瘤作用的机理。方法 用光学显微镜及电子显微镜观察了ＶＰ１６诱导Ｒａｊｉ细胞凋亡的形态学变化;用琼脂糖凝胶电泳观察了ＤＮＡ的梯形改变。结果 ＶＰ１６可明显诱导Ｒａｊｉ细胞调亡,５ｕｇ．ｍｌ＾－１ＶＰ１６作用４８ｈ时,凋亡指数为５８．３３％±３．０６％。与对照组相比有显性差异（Ｐ〈０．０１）。凋亡指数与药物浓度的对数呈正相关（ｒ＝０．９４０７,Ｐ〈０．０１）。结论 诱导凋亡是ＶＰ１６抗肿瘤作用的机理之一。     

siRNA抑制甲胎蛋白表达对甲胎蛋白阳性胃癌细胞FU97增殖抑制及凋亡作用

目的观察siRNA抑制甲胎蛋白（AFP）表达对FU97细胞增殖及凋亡的影响。方法用抑制效率较高的siRNA-A1与siRNA-A3转染细胞,采用MTT法检测实验组载体对FU97细胞增殖抑制作用,DNA琼脂凝胶电泳法观察细胞凋亡后DNA切割片段。结果 siRNA-A1与siRNA-3质粒能显著性抑制细胞增殖,其抑制率随着作用时间延长而提高,抑制率最高可达到59.19%（P〈0.05）,siRNA抑制AFP基因表达后可诱导FU97细胞凋亡。结论 siRNA表达载体可有效抑制FU97细胞AFP基因表达,抑制胃癌细胞的增殖并诱导凋亡。     

脂质体介导c—myc反义核酸对HL—60细胞作用的研究

原癌基因ｃ－ｍｙｃ参与调控细胞的增殖、分化和凋亡过程,在白血病细胞株ＨＬ－６０ 中有很高的表达。ｃ－ｍｙｃ通过扩增活化或基因重排而异常激活,在白血病的发生和发展中可能起着重要的作用。　目的　通过脂质体介导ｃ－ｍｙｃ反义核酸转染ＨＬ－６０ 细胞,观察其抑制细胞生长增殖、促进分化、诱导凋亡,降低ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 和蛋白表达水平,探讨反义核酸的抗肿瘤作用机制。　方法　ＨＬ－６０ 细胞在３７℃、５％ＣＯ２ 条件下,培养于１０％ 小牛血清１６４０ 培养液中,细胞接种密度为４×１０７／Ｌ,反义核酸终浓度为１μｍ ｏｌ／Ｌ,反义核酸与脂质体比例为１ μｍ ｏｌ（６．５ μｇ）∶１０ μｇ,无血清转染６ ｈ。实验同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体无义组等对照组。连续培养４ 天。通过锥虫蓝拒染实验测定细胞的生长能力;ＮＢＴ还原实验和瑞特－姬姆萨染色测定细胞的分化能力;免疫细胞化学染色检测ｃ－ｍｙｃ蛋白表达;ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 水平;吖啶橙／溴化乙锭染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;ＤＮＡ抽提及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成。　结果　脂质体转染ｃ－ｍｙｃ反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０     

鹤莲克癌临对肝癌H22细胞周期及其细胞凋亡的影响

应用流式细胞术（ＦＣＭ）分析了中药复方制剂鹤莲克癌临对小鼠移植性肝癌Ｈ２２细胞周期影响及其细胞凋亡作用的影响。结果表明,鹤莲克癌蝇药组）ＤＮＡ合成期（Ｓ细胞明显减少,百分率下降,而ＤＮＡ合成前期（Ｇ１）细胞显著增强,在ＤＮＡ直方图上Ｇ１峰前出现明显的细胞凋亡峰,其细胞凋亡率为２８％,而模型组和５－Ｆｕ组的细胞凋亡率分别为２０．５％和１７．８％,提示鹤莲克癌临抗癌细胞学机制是阻滞癌细胞增殖周期并诱导     

吲哚美辛对人结肠癌细胞BfL-1、WISP-1及PCNA表达的影响

目的本研究对我们前期利用功能蛋白质组学技术发现的吲哚美辛（Indomethacin，IN）抗结肠癌的非COX-2途径相关蛋白Bfl-1、WISP-1和PCNA的表达差异进行验证，并探讨IN抑制肿瘤的相关机制。方法应用荧光定量PCR技术检测IN处理组和未处理组HCT116细胞Bfl-1、WISP-1和PCNAmRNA的表达。结果吲哚美辛下调Bfl-1,WISP-1和PCNAmRNA的表达。结论吲哚美辛通过Bfl-1、WISP-1和PCNA等非COX-2依赖途径诱导HCT116细胞的凋亡并抑制其增殖     

JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖及凋亡的影响

目的 研究JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖及凋亡的影响。方法 不同浓度JS-K 处理 HCT116 细胞48 h 后,采用MTS 法检测JS-K 对HCT116 细胞增殖活性的影响;PI 单染流式细胞术检测 JS-K 对HCT116 细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测JS-K 对HCT116 细胞凋亡的 影响;Texas Red-X 鬼笔环肽荧光染色观察细胞骨架形态;实时荧光定量聚合酶链反应检测Bcl-2 家族基 因mRNA 表达。结果 JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性（P <0.05）。 JS-K 诱导HCT116 细胞被阻滞在G2/M 期（P <0.05）。JS-K 可致HCT116 细胞发生晚期凋亡（P <0.05）。 JS-K 可改变HCT116 细胞骨架形态、微丝结构与分布。随着JS-K 浓度增加,促凋亡基因Bax、Bik、Bim、 Puma mRNA 相对表达量上调,抗凋亡基因Mcl-1 mRNA 相对表达量下调（P <0.05）。结论 JS-K 对人结肠 癌HCT116 细胞增殖有明显抑制作用,通过调节Bcl-2 家族基因表达,阻滞细胞G2/M 期,促进细胞发生晚 期凋亡。     

拟康氏木霉胞外多糖联合奥沙利铂可体外协同抑制结直肠癌细胞的增殖

目的 探讨拟康氏木霉胞外多糖（EPS）联合奥沙利铂（Oxa）用药对结肠癌细胞HCT116的协同抑制作用。方法 实验分为Control组（0 μg/mL）、Oxa组（8 μg/mL Oxa）、EPS组（100 μg/mL EPS）、EPS+Oxa组（8 μg/mL Oxa+100 μg/mL EPS）。CCK-8检测细胞活力，CompuSyn软件拟合Fa-CI曲线评价联用效果。流式检测凋亡和周期、划痕实验和transwell实验检测细胞迁移能力，Oxa和EPS相关基因与结直肠癌相关基因取交集进行PPI分析以及GO和KEGG富集分析。结果 Oxa单用或与EPS联用处理HCT116细胞，均可使HCT116细胞活力受到抑制，并呈现剂量与时间依耐性，两者联用有明显的协同作用（CI<1）。两药联用组的细胞总凋亡率与Oxa组以及对照组比较均显著升高（P<0.05）；联合用药组处于S期的比例高于其他各组。EPS和Oxa均具有抑制HCT116细胞迁移的作用，两者联用后抑制作用更为明显。KEGG分析显示主要涉及耐药、凋亡、血管新生等通路。结论 EPS联合奥沙利铂可协同抑制HCT116细胞增殖，促进该细胞凋亡和细胞S周期阻滞、抑制细胞迁移，铂耐药、PI3K-Akt、MAPK等信号通路发挥了关键作用。     

化合物T44的抗肿瘤活性研究

目的评估化合物1-[4’-（（3R,5R）-金刚烷基）苯基）]正丁胺盐酸盐（T44）的体外抗肿瘤活性,并初步探索可能的分子机制,为这种化合物的综合应用提供实验依据。方法四甲基偶氮唑蓝比色法检测T44对细胞的体外生长抑制作用;细胞形态观察法研究T44对细胞形态的影响;流式细胞仪法检测T44作用下肿瘤细胞周期和凋亡率的变化;蛋白印迹法检测T44对不同周期蛋白表达的影响;细胞划痕实验检测T44对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果T44对检测的11株肿瘤细胞的增殖均有抑制效果,对正常细胞人胚肺成纤维细胞也具有一定的增殖抑制作用,半数抑制浓度值为（16．58±3．49）μmol／L,高于受测的大部分肿瘤细胞;T44能导致肿瘤细胞凋亡和周期阻滞;T44能影响周期蛋白的表达并能降低HCT116细胞的迁移能力。结论T44主要通过促进细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。     

昆明山海棠总生物碱对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究昆明山海棠总生物碱(total alkaloids of tripterygium hypoglaucum hutch,THHta)对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测THHta对HCT116细胞增殖的抑制作用;用倒置及荧光显微镜观察THHta作用后HCT116细胞形态的变化;流式细胞术检测THHta对HCT116细胞周期及凋亡的影响,Western bolt检测凋亡相关caspase-3及PARP蛋白表达.结果 THHLa能显著抑制HCT116细胞增殖,抑制率与剂量和时间呈依赖关系.THHta作用HCT116细胞48、72 h的IC_(50)值小于20 μg/ml.THHta(10μg/ml)能诱导HCT116细胞G_0/G_1期比例增加及细胞凋亡,caspase-3活化及PARP蛋白剪切显著增强.结论 THHta能显著抑制HCT116细胞增殖,并可诱导HCT116细胞G_0/G_1期阻滞及细胞凋亡.     

姜黄素通过下调microRNA-211表达促进结肠癌细胞的凋亡及其机制

目的  检测姜黄素对结肠癌细胞中微小RNA 211（microRNA 211,miR-211）表达的影响并探讨miR-211调控结肠癌细胞增殖和凋亡的可能机制。方法  使用MTT法和流式细胞术检测不同浓度姜黄素在不同时间点对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响;使用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测不同浓度姜黄素对结肠癌细胞中miR-211表达的影响;使用生物信息学预测miR-211下游靶基因TP53INP1并使用荧光素酶报告基因法验证其结合;用miR-211模拟物（miR-211 mimics）检测其对姜黄素处理的结肠癌细胞增殖的影响,同时使用Western blot法检测其对TP53INP1蛋白表达的影响;用TP53INP1小干扰RNA检测其对姜黄素处理的结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。结果  相较于未处理组,姜黄素在10～50 μmol/L浓度可抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡（P <0.05）。姜黄素可抑制肿瘤细胞中miR-211的表达,并具有时间和剂量依赖性（P <0.05）;此外,miR-211下游靶基因TP53INP1蛋白表达量上调（P <0.05）。用miR-211转染结肠癌细胞可逆转姜黄素对其增殖的抑制作用,并且TP53INP1表达下调（P <0.05）;用TP53INP1小干扰RNA可逆转姜黄素对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响（P <0.05）。结论  姜黄素可通过下调miR-211抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡,并且TP53INP1是miR-211下游调控蛋白之一。

     

复方马钱子的抗肿瘤作用探讨

目的探讨复方马钱子的抗肿瘤作用。方法采用小鼠H22肝癌皮下移植肿瘤模型,通过检测原位肿瘤、免疫器官指数及Na+、K+、Cl-、葡萄糖含量,评价复方马钱子的毒性及抗肿瘤作用。采用MTT法检测复方马钱子对淋巴细胞和HCT-116癌细胞增殖的影响。结果复方马钱子在实验剂量下,与模型对照组比较,治疗组的肿瘤生长减慢,荷瘤小鼠免疫器官指数降低,血清中K+、Cl-、葡萄糖含量显著增加,Na+浓度不受影响。体外实验表明,复方马钱子对HCT-116癌细胞有一定的抑制作用,但对淋巴细胞增殖无影响。结论复方马钱子有一定的抗肿瘤作用,可调节体内电解质、葡萄糖含量使趋于正常。     

预知子提取物增敏奥沙利铂诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 探讨预知子提取物增敏奥沙利铂(OXA)诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的作用及机制,为减少OXA毒副作用发生的临床应用提供研究基础.方法 将预知子乙酸乙酯萃取成分进行中压柱层析分离,并进行抗肿瘤药效筛选,获取活性部位B14,并进一步分离和鉴定该活性部位成分;运用MTT法检测B14、OXA及二者联用对HCT116的增...     

皂角刺总黄酮诱导HCT116细胞凋亡的透射电镜观察

目的：研究皂角刺总黄酮对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法：应用CCK-8试剂盒检测对细胞增殖的抑制作用,透射电镜观察对细胞凋亡的超微结构变化。结果：皂角刺总黄酮能够显著抑制HCT116细胞的增殖,且呈现出一定的剂量依赖性。皂角刺总黄酮作用48小时后,HCT116细胞透射电镜可见核固缩、碎裂和凋亡小体等凋亡形态学改变。结论：皂角刺总黄酮可抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,诱导其凋亡。     

小檗碱通过激活自噬诱导caspase依赖性凋亡发挥抗结直肠癌作用

  目的  探究小檗碱通过自噬依赖性凋亡发挥抗结直肠功效的潜在作用机制。  方法  使用HCT116细胞和移植瘤模型小鼠进行小檗碱抗肿瘤药效和可能作用机制的研究。体外研究中, 通过利用CCK8实验评价小檗碱对结直肠癌细胞活力的影响, 使用细胞克隆实验评价小檗碱对结直肠癌细胞增殖的影响, 同时借助流式细胞术和TUNEL染色法对小檗碱诱导结直肠癌细胞凋亡作用进行研究。透射电镜和mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染细胞用于检测细胞内自噬流变化。通过对小鼠组织进行HE染色、免疫组化染色和TUNEL染色, 评价小檗碱体内抗结直肠癌作用。  结果  体外研究结果表明, 小檗碱能够抑制结直肠癌细胞活力, 诱导细胞凋亡, 同时提高细胞内LC3B水平。使用自噬抑制剂3-MA、CQ和BafA1进行干预, 自噬抑制剂能够促进HCT116细胞生长, 抵消小檗碱诱导的结直肠癌细胞凋亡作用。雷帕霉素增强小檗碱上调HCT116细胞中LC3B水平的作用, 同时Z-VAD-FMK或ATG siRNA能够废除小檗碱诱导结直肠癌细胞凋亡的作用。在体研究结果表明, 小檗碱能够降低肿瘤体积和重量, 引起肿瘤组织发生凋亡。进一步的体内作用机制研究结果表明, 小檗碱显著抑制p-mTOR表达, 同时显著上调ATG5、ATG7、cleaved-caspase3和cleaved-caspase8表达。  结论  小檗碱能够通过诱导结直肠癌细胞发生自噬, 促进其发生caspase依赖性凋亡, 进而抑制结直肠癌细胞增殖。