微囊化鼠肝细胞腹腔移植的实验研究

目的：建立急性肝功能衰竭大鼠腹腔内微囊化肝细胞移植的动物模型，观察微囊及肝细胞形态和超微结构改变，并探讨移植物转归。方法：实验组60只Wister大鼠（受体）建立急性肝功能衰竭模型，分离纯化SD（供体）大鼠肝细胞，进行微囊化包裹，以每只鼠2．5×10^7个微囊化肝细胞进行腹腔移植，在移植后1周、2周分别处死30只受体大鼠．回收微囊．进行细胞形态及超微结构的观察。对照组15只Wister鼠只接受同等量空微囊．对比观察两组生存率、肝功能。结果：实验组大鼠存活率和肝功能指标改善情况明显好于对照组，移植后1周，微囊膜较完整。微囊间可见小血管增生，其内细胞活性好（81％±3％），腹腔中未见到炎症和免疫反应的迹象．且电镜观察细胞内结构正常、胞浆内细胞器丰富、核内容物存在。移植2周后微囊膜开始纤维化，部分肝细胞有变性。结论：微囊化肝细胞移植，可以治疗急性肝功能衰竭。微囊及肝细胞随着移植时间出现退行性改变。微囊的纤维化可能是导致移植后肝细胞存活下降的主要原因。     

微囊化肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的研究

[目的 ]探讨微胶囊包裹肝细胞 (microencapsulatedhepatocyte)腹腔移植治疗急性肝功能衰竭的机制与可行性 ,评价生物膜功能。 [方法 ]D -氨基半乳糖 (D - gal)诱发急性肝功能衰竭大鼠模型 ,分成 4组 :Ⅰ组生理盐水组 ;Ⅱ组空微胶囊对照组 ;Ⅲ组促肝细胞生长素 (hepatocytegrowthfac tor ,HGF)组 ;Ⅳ组微囊化肝细胞组 ,观察 2周存活率、肝功生化指标的变化 ,2周后收集腹腔内微胶囊 ,观察其形态与功能。 [结果 ]Ⅳ组存活率较Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ组有明显改善 (分别为 6 6 .7%、2 0 .0 %、1 3.3%、2 0 .0 % ,P <0 .0 5 ) ,其他组间存活率无显著性差异 ;Ⅳ组自移植后 2 4h起白蛋白 (ALB)、总胆红素 (TBIL)、凝血酶原时间 (PT)较其他组有明显改善 (P <0 .0 5 )。 2周后收集的空微胶囊形态完整 ,微囊内肝细胞部分保持存活。 [结论 ]微囊化肝细胞移植可以明显改善肝功能衰竭大鼠的存活率 ,显著改善肝脏生化功能。生物微胶囊可以有效阻断免疫排斥作用 ,保护移植肝细胞 ,有利于其发挥生物功能。     

解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠Caspase-8、BID的影响

目的解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠Caspase-8、Bid的影响。方法将急性肝衰动物模型随机分成模型组、裸肝细胞移植组、微囊化肝细胞移植组、解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植组。造模后24 h、48 h、72 h、120 h和168 h测定ALT、AST,免疫组化法检测Caspase-8、Bid表达。结果解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植组ALT、AST下降,48 h、72 h与裸肝组、微囊组比较差异有统计学意义(P<0.05);解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植组Caspase-8、Bid表达下降,48～168 h较裸肝组、微囊组有统计学意义(P<0.05)。结论解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植显著改善肝衰大鼠肝功能及预后。     

微囊化猪肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝功能支持的实验研究

目的:探讨微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的效果。方法:采用原位胶原酶循环肝灌注法分离中国实验用小型猪肝细胞,海藻酸钠-氯化钡法微囊化。应用D-氨基半乳糖(D-gal)1.2g/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠急性肝衰竭模型。急性肝衰竭大鼠随机分为3组。注药24h后分别将PRMI1640培养液2ml腹腔注射为对照组(1组)、2ml游离猪肝细胞(2×107个/ml)腹腔内移植组(2组)、2ml微囊化猪肝细胞(2×107个/ml)腹腔内移植组(3组)。观察移植后大鼠14天存活率、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)的改变。结果:肝细胞移植后大鼠14天存活率:1组为20.0%(5/25),2组为66.7%(16/24),3组为76.0%(19/25),3组间差异有显著性(P<0.05)。移植后第1天1组ALT、TB和移植前相比差异无显著性,2、3组ALT、TB下降。第4天3组ALT、TB均继续下降,2、3组低于1组(P<0.05),2、3两组间差异无显著性(P>0.05)。移植后第7天,ALT进一步下降,3组间差异有显著性(P<0.05);TB3组显著低于2组和1组(P<0.05),2组低于1组但差异无显著性(P>0.05)。移植后第14天,肝功能均明显恢复,ALT、TB2、3组均低于1组(P<0.05),2、3两组间差异无显著性(P>0.05)。结论:微囊化猪肝细胞腹腔内移植可以提高药物诱导急性肝衰竭大鼠的存活率,改善ALF大鼠的肝功能。     

肝细胞微囊化移植对大鼠肝豆状核变性模型铜代谢的影响

目的观察微囊化肝细胞腹腔移植对大鼠肝豆状核变性（HLD）模型血清铜及肝铜代谢的影响。方法采用铜负荷饮食法制作大鼠HLD模型。气流法制备含肝细胞微囊,并采用腹腔移植的方法进行裸细胞或微囊化细胞移植,分别设空白对照组（Ⅰ组）、氯化钠溶液组（Ⅱ组）、裸肝细胞腹腔移植组（Ⅲ组）和微囊化肝细胞移植组（Ⅳ组）,测定5个时间点大鼠HLD模型ALT、AST、白蛋白水平,血清铜、肝铜含量。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组大鼠各时间点ALT、AST、血清铜、肝铜值均较Ⅰ组大鼠明显升高（均P〈0.01）,合成白蛋白水平明显下降（均P〈0.01）。7-14天后IV组大鼠ALT、AST、血清铜、肝铜水平较Ⅲ组明显下降（均P〈0.01）,最低值分别达（85.1±7.0）U/L（、87.9±13.7）U/L、（2.44±0.18）μg/mL（、26.73±3.22）μg/g,而白蛋白则于14天后高于Ⅲ组,最高达（38.36±1.52）g/L。结论肝细胞微囊化腹腔移植可明显减轻大鼠HLD的肝铜沉积,加速血清铜的代谢,可成为一种细胞移植治疗HLD的新方法 。     

肝细胞脾内移植治疗大鼠肝衰竭

目的:优化急性肝衰竭模型的构建方法及探讨经脾内同种异体肝细胞移植治疗大鼠急性药物性肝衰竭的疗效,并观察脾内移植肝细胞的生物学活性。方法:采用D-氨基半乳糖(D-gal)建立大鼠急性药物性肝衰竭模型。腹腔注射不同剂量的(1.0,1.2,1.4,1.6g/kg)D-gal后,以肝功能指标、病理形态学、死亡率等综合评估肝脏细胞损伤的状态,确定模型构建的最佳方案。造模后24h,随机分为2组进行治疗,Ⅰ组:经脾内移植肝细胞悬液1ml(4.4×107个);Ⅱ组:经脾内移植不含肝细胞的培养液1ml。观察大鼠1周的存活率、肝脏功能和病理变化及移植肝细胞的生物学活性。结果:①不同剂量的D-gal可导致不同程度的肝损伤,而以1.2g/kgD-gal造模组的大鼠死亡率适中,肝功能损害及其肝脏病理组织学改变均符合临界急性肝衰竭的程度,较好地模拟了急性肝衰竭的病理生理改变且稳定性较好。②移植后3d,Ⅰ组与Ⅱ组大鼠存活率相比具有显著性差异(P<0.01);肝功能指标:丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBiL)均有明显改善(P<0.01);肝组织病理切片显示:Ⅰ组的肝组织损伤程度明显比Ⅱ组轻。经HE和PAS染色证实,移植的肝细胞在受体脾内结构和功能保持较好。结论:①D-gal1.2g/kg腹腔注射可较好构建SD大鼠急性肝衰竭模型。②经脾内肝细胞移植能明显提高药物性肝衰竭大鼠的存活率、改善肝功能及肝组织病理变化。     

微囊化异种肝细胞移植对药物性肝衰的治疗作用及免疫隔离机制的初步研究

目的 :探讨微囊化异种肝细胞脾内移植对药物性肝衰大鼠的治疗作用 ;测定受体存活率、肝功能的变化及CD4 ,CD8的变化。方法 :海藻酸钠体外包裹经胶原酶技术制备的异种 (豚鼠 )肝细胞为供体 ,SD大鼠为受体 ,D -氨基半乳糖 (19.5ml/kg)腹腔内一次性注射 ,制作肝衰模型。 4 8h后将微囊化的游离豚鼠肝细胞 (1.5× 10 7)移植于大鼠脾脏内。以豚鼠裸肝细胞 (1.5× 10 7)移植及生理盐水1.2ml脾脏注射为对照。移植后 14d观察存活率、肝功能及肝脏病理情况 ,免疫组化ABC法测定CD4 ,CD8的变化。结果 :微囊化肝细胞移植组存活率 80 % ,明显高于生理盐水组 (2 5 % )和裸肝细胞移植组(70 % )。 (P <0 .0 1　V　P <0 .0 5 )。微囊肝细胞移植组 14d总胆红素 (7.99± 0 .5 8mg/L)和ALT(5 5±6 .7u) ,明显低于生理盐水组 (9.6 3± 0 .83mg/LV 91± 8.0u)和裸肝细胞组 (8.9± 0 .6 6mg/LV 74± 7.1u)(P <0 .0 5VP <0 .0 1)。移植后 12h ,72h ,14d分别测定受体脾脏CD4 ,CD8淋巴细胞 ,微囊化肝细胞组72h ,14d呈阳性。裸肝细胞组均呈阳性。结论 :大鼠药物性肝衰微囊化肝细胞脾内移植后维持存活率14d ,细胞免疫参与排斥反应 ,肝细胞微囊化处理可延迟细胞免疫的发生时间。     

肝再生增强因子联合肝细胞脾内移植治疗急性肝衰的实验研究

目的:探讨应用rALR与新生大鼠肝细胞脾内移植联合治疗大鼠急性肝衰竭的疗效.方法:采用D-gal诱导大鼠急性肝衰竭模型,36h后随机分为6组:(Ⅰ组:造模对照组;Ⅱ组:脾脏注射生理盐水1ml,腹腔注射生理盐水1ml/d;Ⅲ组:脾脏注射rALR 1ml(50μg/(kg·d)),腹腔注射rALR 1ml(50μg/(kg·d));Ⅳ:脾脏移植2×107新生大鼠肝细胞,腹腔注射生理盐水1ml/d;Ⅴ组:脾脏移植2×107新生大鼠肝细胞,腹腔注射rALR 1ml;Ⅵ组:脾脏移植2×107新生大鼠肝细胞,腹腔注射CsA1ml(10mg/(kg·d)).比较各组生存率.术后第1、5天、14天获取肝组织,观察病理变化.术后第1、2、5、12天采血,检测肝功能指标.结果:Ⅱ组存活时间与Ⅰ组比较无差异.Ⅲ组最长存活时间为118h,肝脏病理及肝功能改变情况基本同Ⅰ组和Ⅱ组.Ⅳ组有部分长期存活,2周生存率为33.3%.Ⅴ组两周存活率显著高于Ⅳ组(75%对33.3%,P＜0.02),Ⅵ组和Ⅳ组2周存活率比较无显著性差异(P＞0.05).肝功能及病理情况在Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组有明显改善,尤以Ⅴ组最为显著.)结论:应用rALR联合新生大鼠肝细胞移植能有效治疗大鼠急性肝衰竭,改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,促进肝功能恢复及改善肝脏病理状况.     

自体肝细胞脾内移植治疗急性肝衰竭的实验研究

目的 探索临床应用自体肝细胞脾内移植治疗急性肝衰竭的新路。方法 用Wistar大白鼠制备急性外科型肝衰竭漠型,采用肝中叶门静脉分枝插管,用Ⅰ型胶原酶灌注制备游离肝细胞,行自体肝细胞脾内移植。结果 病理组织学观察移植组10wk后大鼠脾内有弥散状、团状或单排列状肝细胞存在;同位素^99mTc-HIDA测定证实其肝功能接近正常;对照组术后24h死亡30％,48h累计死亡55％．移植组分别为20％和30％。结论 实验提示脾内移值肝细胞可以存活且有一定代谢功能．能显提高急性肝衰竭大鼠的存活率。     

人骨髓间充质干细胞移植对肝衰竭大鼠的治疗作用

目的:探讨体外诱导肝向分化成功后的人骨髓间充质干细胞经门静脉移植对肝衰竭大鼠肝功能及组织的影响。方法:人骨髓间充质干细胞传至第6代后,体外利用肝细胞生长因子(HGF)和上皮细胞生长因子(EGF)诱导其肝向分化。使用四氯化碳建立急性肝衰竭大鼠模型,随机分5组:HGF诱导分化细胞移植组、EGF诱导分化细胞移植组、HGF+EGF联合诱导移植组、无诱导细胞移植组和无细胞移植组,经门静脉移植人骨髓间充质干细胞,分别于移植后12 h、72 h、7 d、1月和2月时间点观察检测肝功能指标及肝脏病理的变化情况。结果:HGF诱导分化细胞移植组、EGF诱导细胞移植组、HGF+EGF联合诱导移植组、无诱导细胞移植组大鼠的生存情况、谷丙转氨酶、胆红素、白蛋白水平各指标较无细胞移植组均明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);但HGF诱导细胞移植组、EGF诱导细胞移植组和HGF+EGF联合诱导移植组各指标较无诱导细胞移植组,差异无统计学意义(P>0.05)。病理分析提示细胞移植组的大鼠肝显微结构较无细胞移植组改善明显。结论:肝向分化的人骨髓间充质干细胞移植入肝衰竭大鼠体内能够显著改善肝功能。     

PLA-O-CMC纳米粒子培养的猪肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝再生作用的初步研究

目的:探讨胶原凝胶包埋聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米粒子粘附培养猪肝细胞移植对急性肝衰竭(ALF)大鼠肝的再生作用。方法:D-氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠ALF模型;48h后分别将5mlⅠ型胶原凝胶包埋的PLA-O-CMC纳米粒子粘附培养24h猪的肝细胞、5mlⅠ型胶原凝胶固定培养24h的猪肝细胞、5ml培养24h的猪肝细胞悬液(均含5.0×107个)移植到各组ALF大鼠腹腔内,并以5mlRPMI1640腹腔内注射作为阴性对照。观察大鼠14天存活率和受体肝脏的病理变化。结果:移植后14天ALF大鼠的存活率:单纯肝细胞移植组(Ⅰ组)为56.25%,胶原肝细胞移植组(Ⅱ组)为62.5%,纳米胶原肝细胞移植组(Ⅲ组)为75%,阴性对照组(Ⅳ组)为18.75%,各移植组14天存活率高于对照组(P<0.05),各移植组间无统计学意义(P>0.05)。ALF大鼠肝脏再生于ALF后5～7天最为显著;各组肝脏病理变化以Ⅲ组恢复最好,双核细胞最多,肝再生最快。结论:应用PLA-O-CMC纳米粒子和Ⅰ型胶原联合培养猪肝细胞移植于ALF大鼠腹腔内能促进肝脏的再生。     

内皮祖细胞灌注供心延长心脏移植物存活时间的实验研究

 目的 研究供体内皮祖细胞（endotherial progenitor cell， EPC）灌注供心对同种异体心脏移植物生存时间的影响。方法 获取Sprague Dawley （SD）大鼠的骨髓细胞，通过密度梯度离心法分离培养单个核细胞，取贴壁细胞选择性诱导培养2周以上，获取内皮祖细胞（EPC）。以Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色法鉴定EPC。20只体重200～250g的雄性SD大鼠为供体，20只体重200～250g的雌性Wistar大鼠为受体，分为4组，每组5对。组I：术后不使用环胞霉素；组II：术后7d每天使用环胞霉素5mg/kg；组III：术中供心经冠脉灌注内皮祖细胞1×106个，术后不使用环胞霉素；组IV：术中供心经冠脉灌注内皮祖细胞，术后7d每天使用环胞霉素5mg/kg。观察各组供心存活时间。结果 贴壁细胞经诱导培养后3d开始伸展，5d形成集落，7~10d增殖加速并出现条索状结构，2周大部分细胞呈多角形。Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双染，免疫荧光染色阳性率大于70％。组I、II、III、IV各组供心平均存活时间分别为6.2±0.8、11.6±1.1、9.4±1.1和18.8±1.6d。组II、III、IV移植物的平均存活时间较组I显著延长（P<0.05）。结论 内皮祖细胞灌注合并环胞霉素运用可以延长大鼠心脏移植物的存活时间。     

胎肝前体细胞脾移植对大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

目的 :探讨经脾内同种异体移植培养的原代胎肝前体细胞与成体肝细胞悬液对大鼠药物性肝衰竭的疗效 ,并观察脾内移植肝细胞的生物学特性。方法 :采用 D-氨基半乳糖 ( D- gal)建立大鼠急性肝衰竭模型 ,2 4 h后随机分为三组进行治疗。 A组 :经脾内移植体外培养 7d的肝细胞 2× 1 0 7;B组 :经脾内移植肝细胞悬液 2× 1 0 7;C组 :经脾内注射生理盐水1 ml。观察受体大鼠的存活率、肝脏功能和病理变化及移植肝细胞的生物学特性。结果 :A组、B组大鼠存活率 ( 77%、5 9% )与 C组大鼠存活率 ( 2 2 % )相比具有显著性差异 ,肝功能各项指标均有明显改善 ,A、B组与 C组大鼠的肝功能改变方面有统计学差异。经 HE和 PAS染色证实 ,移植的肝细胞在受体脾内结构和功能保持较好。结论 :经脾内移植的培养的原代胎肝前体细胞和肝细胞悬液均能提高大鼠药物性肝衰竭的存活率、改善肝功能及肝脏组织病理变化 ,但培养原代胎肝前体细胞优于成体肝细胞悬液。     

Metabolic effects of berberine on liver phosphatidate phosphohydrolase in rats fed on high lipogenic diet: an additional mechanism for the hypolipidemic effects of berberine

ObjectiveTo evaluate the effects of berberine (BBR) on the liver phosphatidate phosphohydrolase (PAP) and plasma lipids in rats fed on high lipogenic and normal diet.MethodsForty rats were randomly divided into 5 groups. Group I (control) received standard diet. Group II received standard diet plus 90 mg/kg BBR and Groups IV received lipogenic diet (containing sunflower oil, cholesterol and ethanol) without treatment. Groups III and V received lipogenic diet plus 90 mg/kg BBR and 30 mg/kg gemfibrozil, respectively. On Day 60 of the experiment, blood samples were collected and PAP, total cholesterol, triglyceride, low density lipoprotein cholesterol, high density lipoprotein cholesterol, very low density lipoprotein, malondialdehyde, plasma antioxidant, and liver histopathology assessments were conducted.ResultsPAP, plasma triglyceride, total cholesterol, very low density lipoprotein, and malondialdehyde levels decreased significantly (P<0.05) in Group III compared to Group IV (24.94%, 36.11%, 21.18%, 36.86% and 19.59%, respectively). The liver triglyceride and cholesterol in Groups III and V had a remarkable decrease (P<0.001) compared with Group IV (24.94% and 49.13%, respectively). There was a significant reduction (P<0.05) in atherogenic index in Groups III compared with Group IV.ConclusionsThese results clearly suggested that BBR could be effective in reducing liver PAP, lipid abnormality, liver triglyceride and lateral side effects of hyperlipidemia.     

THE EFFECT OF BASIC FIBROBLAST GROWTH FACTOR SLOW-RELEASE MICROCAPSULES ON ANGIOGENESIS IN INFARCTED RABBIT MYOCARDIUM

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮ　　Ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ (ｂＦＧＦ)ｉｓａｎｉｎｔｅｎｓｅｌｙｍｉｔｏｇｅｎｉｃａｓｗｅｌｌａｓａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎ 1 7 2ｋＤｐｅｐ ｔｉｄｅ ,ｗｈｉｃｈｉｓｗｉｄｅｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｉｎｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌｓ ,ｃａｒｄｉａｃｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｏｔｈｅｒｏｒｇａｎｓ .ＩｎｖｉｖｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｂＦＧＦｌｅａｄｓｔｏｍｙｏｃａｒｄｉｕｍａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｔｈａｔｈａｓｂｅｅｎｄｅｍｏｎ…     

肝内不同途径移植微囊对门静脉血流动力学影响的实验研究

目的:运用彩色多普勒超声研究肝内不同途径移植微囊对门静脉血流动力学的影响.方法:健康雄性成年狗30只,分为经门静脉移植组(PV组)和经肝动脉移植组(HA组),每组各15只.每组根据移植的微囊剂量(8 000个/kg,16 000个/kg,32 000个/kg)再各分为3小组(PV1,PV2,PV3及HA1,HA2,HA3),每小组各5只.移植手术前及术后24 h、1周、2周、4周分别采用彩色多普勒超声技术测量实验狗的门静脉主干内径、血流速度并抽取静脉血检测谷丙转氨酶(ALT)水平.结果:PV1和PV2组微囊移植后24 h门静脉主干内径无显著改变,而血流速度显著增快(P＜0.05);PV3组微囊移植后24 h门静脉主干内径显著增大(P＜0.05),血流速度显著减慢(P＜0.05).不同微囊剂量肝动脉移植组内、组间门静脉血流动力学变化无统计学意义(P＞0.05).移植术后24 h,PV和HA组ALT水平均明显升高(P＜0.05);且相同移植剂量时,PV组较HA组升高明显(P＜0.05).结论:肝动脉移植途径较门静脉移植途径安全性高、移植物数量耐受量大.     

VEGF对大鼠50%减体积肝脏移植术后肝再生的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的影响。方法建立大鼠50%减体积肝移植模型,分3组,VEGF治疗组、anti-VEGF组、对照组。分别于术后注射鼠重组VEGF、anti-VEGF、生理盐水(NaCl)。在术后不同时相点测定肝细胞核增殖蛋白抗原(PCNA)表达指数,测定血清HGFI、L-6的含量,测定术后肝脏生化指标。结果VEGF组术后肝细胞PCNA表达指数较对照组升高,anti-VEGF组较对照组降低,差异有统计学意义。anti-VEGF组天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)较VEGF组及对照组升高,差异有统计学意义。VEGF组术后血清HGFI、L-6浓度较对照组增高,anti-VEGF组较对照组明显减弱。结论VEGF治疗增强大鼠减体积肝移植术后肝脏再生活性,改善术后肝功能。这可能与VEGF促进肝脏HGFI、L-6分泌有关。     

蛋白激酶C对离体兔心脏的保护作用

目的探讨蛋白激酶C对离体兔心的保护及机制。方法应用蛋白激酶C的激活剂和阻断剂,通过Langendroff离体兔心灌注模型,测定心功能指标、心肌CK-MB、LDH、MDA、SOD含量,计算心肌含水量及检测凋亡细胞,了解蛋白激酶C对心功能的影响。结果缺血预适应组和蛋白激酶C激活组的心肌CK-MB(233·6U/g±24·6U/g,285·9U/g±21·4U/g),LDH(83·9U/g±6·5U/g,91·2U/g±5·4U/g和SOD(201·0U/g±17·4U/g,91·9U/g±22·1U/g)含量均高于对照组(132·5U/g±24·8U/g,74·1U/g±7·4U/g,180·3U/g±16·8U/g)和激活阻断组(135·1U/g±28·8U/g;75·1U/g±8·8U/g,184·5U/g±16·9U/g)(P<0·05),而MDA含量、心肌含水量明显低于对照组和激活阻断组(均P<0·05)。结论蛋白激酶C对离体兔心具有肯定的保护作用。     

Effect of intramuscular injection of hepatocyte growth factor plasmid DNA with electroporation on bleomycin-induced lung fibrosis in rats

Background So far, there is no efficient treatment for pulmonary fibrosis. The objective of this study was to determine whether intramuscular injection of the hepatocyte growth factor (HGF) plasmid DNA by in vivo electroporation could prevent bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats, and to investigate the possible mechanisms. Methods Twenty male Wistar rats were randomly divided into four groups: control group (group C),model group (group M), early intervention group (groupⅠ) and late intervention group (groupⅡ). Groups M, Ⅰ and Ⅱ were intratracheally infused with bleomycin, then injected the plasmid pcDNA3.1-hHGF to group Ⅰon day 7, 14 and 21. GroupⅡ received the same treatment like Group Ⅰ on day 14 and 21. All the rats were killed on day 28 after bleomycin injection. We detected Homo HGF expression in the rats with ELISA method and estimated the pathological fibrosis score of lung tissue using hematoxylin eosin (HE) and Massion staining. The mRNA expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1), cycloxygenase-2 (COX-2), and rat HGF in rat pulmonary parenchyma were evaluated by RT-PCR. Immunohistochemistry and Western blotting were performed to determine the protein expression of transforming TGF-β1 and COX-2 in lung parenchyma. Results The plasmid pcDNA3.1-hHGF could express hHGF in NIH3T3 cells and the hHGF protein is secreted into the culture medium. The expression of hHGF protein could be monitored in quadriceps muscle, plasma and lung in Groups Ⅰ and Ⅱ. Pulmonary fibrosis levels of Groups Ⅰ and Ⅱ were obviously lower than that of group M (P&lt;0.05). Expression of TGF-β1 protein and mRNA in lung tissue was markedly decreased in Groups Ⅰ and Ⅱ compared with Group M (P&lt;0.05). The level of expression of HGF and COX-2 mRNA was higher in Groups Ⅰ and Ⅱ than in Group M (P&lt;0.05). Conclusions Injection of the plasmid pcDNA3.1-hHGF into skeletal muscle with electroporation has a potential role in the treatment of bleomycin-induced lung fibrosis. Exogenous HGF may inhibit the expression of TGF-β1 and regulate the crosstalk between AECs and mesenchymal fibroblasts.     

INTRATHYMIC INOCULATION OF LIVER SPECIFIC ANTIGEN ALLEVIATES LIVER TRANSPLANT REJECTION

Objective To study the effects of liver specific antigen (LSA) on liver allotransplantation rejection. Methods Orthotopic liver transplantation was performed in this study. Group Ⅰ: syngeneic control (Wistar-to-Wistar); Group Ⅱ: acute rejection (SD-to-Wistar). Group Ⅲ: thymic inoculation of SD rat LSA day 7 before transplantation. The observation of general condition and survival time, rejection grades and the NF-κB activity of splenocytes were used to analyze severity of acute rejection and immune state of animals in different groups. Results The general condition of group Ⅰ was fair post transplantation with no sign of rejection. All recipients of group Ⅱ died within days 9 to 13 post transplantation with median survival time of 10.7 ±1.37 days. As for group Ⅲ, 5 out of 6 recipients survived for a long period with remarkably better general condition than that of group Ⅱ. Its rejection grades were significantly lower than group Ⅱ (P＜ 0.05).NF-κB activity was only detected in group Ⅰ between days 5 and 7 after transplantation, whereas high activity of NF-κB was detected at all points in group Ⅱ and low NF-κB activity was detected in group Ⅲ which was significantly lower than that of group Ⅱ (P ＜ 0.05). Conclusions LSA is an important transplantation antigen directly involved in the immunorejection of liver transplantation. Intrathymic inoculation of LSA can alleviate the rejection of liver allotransplantation,grafts survive for a period of time thereby, allowing a novel way to liver transplantation immunotolerance.