维生素C对豚鼠DNA氧化及烷化损伤影响的研究

目的:观察维生素C(VC)对DNA氧化损伤及烷化损伤的影响。方法:按体重每日给幼年豚鼠不同剂量(0、7.5、125和250mg/kgbw)的VC灌胃以构建动物模型。20d后采血获取淋巴细胞,用单细胞凝胶电泳法检测淋巴细胞DNA自发损伤和H2O2诱导的氧化损伤;留实验期D20的24h尿,通过毛细管电泳法检测豚鼠尿中O6-甲基鸟嘌呤(O6-MeG)含量。结果:各组豚鼠淋巴细胞DNA自发损伤无明显差异(P>0.05)。10μmol/LH2O2氧化作用下,四组DNA损伤分别为127.3、72.6、121.0和133.0AU;0、125和250mg/kgbw组DNA氧化损伤均较7.5mg/kgbw组加重(P<0.05)。而H2O2浓度增加为25及50μmol/L时,各组DNA氧化损伤均明显加重,但差别不明显。0mg/kgbw组DNA烷化损伤代谢产物O6-MeG的排出量显著高于7.5mg/kgbw组(P<0.05),而与125和250mg/kgbw组无显著差异(P>0.05)。结论:对幼年豚鼠按体重每天补充7.5mg/kgbwVC可有效地降低低浓度H2O2诱导的DNA氧化损伤和减少DNA烷化损伤产物O6-MeG的生成,而较高剂量补充VC(125、250mg/kgbw)则没有明显的保护作用。     

过氧化氢致H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤作用

目的 研究不同浓度过氧化氢(H2O2)对H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤及诱导细胞凋亡的作用.方法 H9c2心肌细胞处理组分别暴露于50,100,200,400μmol/L H2O2中1,3,6,12,24 h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;采用丫啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术观察细胞凋亡;利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)观察细胞DNA损伤.结果 H2O2可以引起H9c2心肌细胞损伤,随时间呈剂量效应关系(P<0.05),其中24 h,400μmol/L剂量组细胞存活率最低达40.6%.H2O2可诱导H9c2心肌细胞出现凋亡并观察到明显的凋亡形态学的改变,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时,100 μmol/L剂量组细胞凋亡最明显,凋亡率达22.2%.H2O2可引起H9c2心肌细胞DNA损伤,且损伤随剂量增加而增大(P<0.01),以400 μmol/L剂量组最为明显,细胞DNA损伤率可达64.0%.结论 H2O2造成H9c2心肌细胞氧化损伤和DNA损伤,随着其暴露剂量和时间的不同表现为凋亡和坏死.     

维生素C、E对血管内皮细胞氧化损伤保护作用

目的 观察维生素C(VC)、维生素E(VE)对体外培养H2O2氧化损伤血管内皮细胞(VEC)超微结构的影响.方法 采用体外细胞培养方法,将血管内皮细胞分为正常对照组,H2O2氧化损伤对照组、VC+H2O2组(VC100μmol/L),VE+H2O2组(VE100μmol/L).分别将VC、VE加入到培养液中,预孵24h,再加入除菌后的H2O2进行损伤,终止培养后收集细胞,进行电镜观察.结果 透射电镜观察VEC,可见H2O2损伤对照组细胞超微结构明显异常,细胞表面呈光滑状,丢失特征性的细胞突起及微绒毛;胞质内线粒体损伤严重,形态模糊;粗面内质网明显扩张呈大囊泡状;溶酶体增多;少数细胞严重水肿,核形不规则,核内染色质部分溶解.VC+H2O2和VE+H2O2组血管内皮细胞超微结构仅有轻度损伤,多数细胞与正常对照组细胞相似;大部分细胞表面微绒毛和胞质突起均趋于正常,胞质内细胞器均在正常范围内;细胞核未见异常,核膜完好,核内染色质分布正常;仅有少数细胞粗面内质网有轻度扩张,线粒体结构模糊不清.结论 VC、VE可一定程度保护氧化损伤的血管内皮细胞的超微结构.     

原花青素对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨原花青素对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法：体外培养内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组（Control组）、氧化损伤组（H2O2组）、氧化损伤加入VitC对照组（VC＋H2O2组）、氧化损伤加入原花青素5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度组（procyanidin-L＋H2O2组、procyanidin-M＋H2O2组、procyanidin-H＋H2O2组）。将750μmol/LH2O2作用于加入VitC及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,以细胞毒四唑盐（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）作为检测指标。结果：原花青素呈剂量依赖性降低H2O2对内皮细胞的生长抑制率,降低MDA、LDH量,增加培养液中NO2-/NO3-含量,各指标比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：原花青素可保护和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、促进NO释放有关。     

大剂量维生素C对DNA氧化烷化损伤影响

目的 观察大剂量摄入维生素C（VC）对DNA氧化损伤及烷化损伤的影响。方法以补充大剂量VC饲料给幼年Wistar大鼠，剂量分别为0，2000，5000，10000mg／kg饲料，不添加VC作为对照组，干预时间为60d。干预结束后，采用单细胞凝胶电泳法检测和评价淋巴细胞DNA自发损伤和H202诱导的氧化损伤；留取尿液用毛细管电泳法检测大鼠尿中O^6-甲基鸟嘌呤（O^6-methylguanine,06～MeG）含量。结果各组大鼠的DNA自发损伤差异无统计学意义（P〉0．05）。10μmol／L的H2O2诱发DNA损伤时，随剂量增加，DNA损伤逐渐加重，对照组为59．060AU，2000mg／kg饲料剂量组为69．900AU，5000mg／kg饲料剂量组为75．768AU。比对照组升高28％（P〈0．05），10000mg／kg饲料剂量组为79，655AU，比对照组升高49％（P〈0．01）。各组O^6-MeG的含量差异有统计学意义（P=0．01）。10000mg／kg饲料剂量组含量最高为2．434mg／g肌酐，比对照组升高36％（P〈0．05）。结论高剂量VC对DNA自发损伤没有影响。而对10bμmol／L H2O2的诱导损伤，补充5000mg／kg饲料和10000mg／kg饲料的VC可加重DNA损伤。给大鼠补充10000mg／kg饲料的VC可导致DNA烷化损伤产物O^6-MeG生成增多。     

低剂量过氧化氢诱导机体适应性反应差异表达基因的研究

目的寻找低剂量过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,分别用低剂量、高剂量和低剂量预刺激后用高剂量攻击细胞,观察细胞生长的变化,得到低剂量H2O2诱导MRC-5的适应性反应模型。然后用荧光差异显示聚合酶链反应(FluoroDD-PCR)寻找不同方式刺激的差异表达基因。结果根据H2O2诱导MRC-5毒性的剂量反应关系,选择0.088、0.88、8.8、88μmol/L为低剂量,1100μmol/L为高剂量,用低剂量处理细胞24h,然后用高剂量刺激1h,可以观察到在0.88μmol/L预刺激细胞24h后,对继而1100μmol/L的刺激有明显的抵抗效应。对不同方式处理的细胞RNA进行FluoroDD-PCR,找到60个差异条带。对其中的15个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中7个已知基因,8个新基因。结论H2O2可以诱导MRC-5的适应性反应过程,用FluoroDD-PCR方法找到差异表达的基因。     

过氧化氢处理K562细胞中JWA基因的表达及其与DNA损伤和凋亡的关系

目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制。方法用0．01、0．1、1mmol／L的H2O2处理K562细胞10、30、60、180min建立氧化损伤模型;用0．1mmol／L H2O2处理不同时间(6～48h)和不同浓度(0．5～1000μmol／L)的H2O2处理48h分别诱导K562细胞凋亡,然后用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA损伤和凋亡,用免疫印迹方法检测热休克蛋白(hsp70和hsp27)、p53以及JWA的蛋白表达水平。结果在DNA损伤模型中,H2O2活跃地调节JWA的表达,JWA对氧化应激的应答比热休克蛋白更快速,JWA和hsp70的表达规律相似;在低剂量H2O2(0．01mmol／L)处理时,JWA和热休克蛋白的表达均显著增高;在细胞凋亡模型中,JWA、hsp70、hsp27和p53的表达均显著增高,其中,JWA、hsp70和p53三者的表达规律相似。结论JWA是一个有效的环境应答基因并活跃地参与细胞应答氧化应激所致的DNA损伤和细胞凋亡的信号通路,其介导的信号通路可能与hsp70和p53有关。     

β-胡萝卜素在吸烟诱导人胚肺二倍体细胞DNA损伤中的作用

[目的 ]探讨 β 胡萝卜素在吸烟诱导DNA损伤中的作用机制。[方法 ]人胚肺二倍体细胞SL 7单细胞电泳分析 (彗星试验 ) β 胡萝卜素和吸烟水溶性物质 (CSS)单独及联合作用 ,结合抗氧化剂VitE干预试验。[结果 ] 0 5～ 10μmol/Lβ 胡萝卜素单独作用不产生DNA断裂。 1∶10和 1∶2 0稀释CSS诱导彗星形成率分别达到 84%和 68% ,0 5和 1 0μmol/Lβ 胡萝卜素保护CSS对DNA损伤作用具有显著意义 ,但当 β 胡萝卜素浓度高 10倍时 ,则失去保护作用。 5 0 μmol/LVitE能有效抑制氧化损伤。 [结论 ]CSS可以诱导人胚肺二倍体细胞DNA损伤 ;β 胡萝卜素具有保护CSS诱导细胞DNA损伤作用 ,但当剂量升高至 5 0～ 10 0 μmol/L时 ,则失去保护作用 ,这可能与高浓度 β 胡萝卜素原氧化作用有关     

甲基汞对小鼠淋巴细胞程序外DNA合成的影响

目的　了解甲基汞对小鼠淋巴细胞DNA损伤修复的影响。方法　采用离体程序外DNA合成 (UDS)的方法。结果　在一定剂量范围内 ,甲基汞可使小鼠外周血淋巴细胞和胸腺细胞程序外DNA合成能力增强 ,1 0mmol/L组血淋巴细胞和 5 0mmol/L组胸腺细胞UDS明显高于对照组 (P <0 0 5) ,而低剂量组和高剂量组的UDS均低于对照组。结论　甲基汞对小鼠外周血淋巴细胞和胸腺细胞DNA有损伤作用 ,其程度与甲基汞剂量有关 ,甲基汞具有遗传毒性和免疫毒性。     

枸杞多糖对小鼠睾丸细胞DNA损伤的保护作用

目的 :研究枸杞多糖 (LBP)对过氧化氢 (H2 O2 )引起的睾丸细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法 :睾丸细胞先用不同浓度LBP作用 1h ,再加入 10 0 μmol LH2 O2 共同培养 2 5min ,然后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定DNA链断裂情况 ,分析LBP的抗氧化损伤作用。结果 :H2 O2 作用一定时间后 ,可引起DNA链断裂。 50、10 0、2 0 0、40 0 μg mL的LBP预处理可使H2 O2 染毒细胞的拖尾百分率和尾长显著降低。结论 :LBP本身没有致氧化损伤作用 ,它能够清除自由基 ,对氧化应激所致的睾丸细胞DNA损伤具有抑制作用     

维生素C和谷胱甘肽对离体肺泡巨噬细胞超微弱发光的影响

目的　研究外源维生素 C(VC)和谷胱甘肽 (GSH)对家兔离体肺泡巨噬细胞(AM)超微弱 (自主 )发光的影响。方法　将 AM悬浮在含有 VC或 GSH的 DMEM培养介质中 ,放入一特制恒温箱的培养盒内 ,连续通入不同浓度的氧气 ,用发光仪检测培养 AM的超微弱发光。结果　浓度超过 0 .3mmol/L的 VC能明显增强有氧培养细胞超微弱发光和加速细胞死亡 ,对无氧培养细胞的影响不明显。低浓度 (0 .0 3mmol/L) VC与 GSH相同 ,能降低由高浓度 (99.1 % )氧暴露引起的细胞发光增强。结论　细胞在含氧气体中的自发氧化是产生超微弱发光的重要原因 ;高浓度 VC能促进离体细胞氧化损伤 ,GSH则有抗氧化作用。     

补充脱氧嘌呤和嘧啶核苷对淋巴细胞DNA损伤修复的影响

目的　脱氧核苷是构成 DNA分子的重要组分 ,通过补充脱氧嘌呤和嘧啶核苷探讨对 DNA损伤修复的影响。方法　采用“彗星”电泳技术分析 DNA断裂损伤 ,用 1 0 0 μmol/LH2 O2 诱导人体外周血淋巴细胞 DNA损伤后分为两组 :一组为对照组 ,另一组为脱氧核苷补充组( 2 0 μl,1 0 -4 mol/L)。结果　对照组淋巴细胞从初始到培养 2 h后 DNA损伤程度逐渐下降 ,由1 67.75下降为 68.1 ( AU) ;而补充脱氧胸苷组 DNA损伤修复能力与对照组相比无明显增高 ,同时补充 DNA合成所必须的四种脱氧核苷经过 3h的培养后也没有出现明显促进 DNA损伤修复的作用。结论　体外补充脱氧核苷对 DNA修复未显示有意义的作用 ,与 DNA损伤修复过程利用脱氧核苷的途径可能不同于 DNA的复制合成有关     

茶多酚对阻塞性黄疸肝脏过氧化损伤的保护作用

目的　利用茶多酚的抗氧化性能对阻塞性黄疸大白兔进行治疗 ,以观察其对肝脏的保护作用方法　实验动物 2 7只 ,分三组 :模型组、茶多酚治疗组和正常对照组。实验期 2周。阻塞性黄疸 (阻黄 )系采用胆总管结扎形成。茶多酚经胃管给予 ,1 0 0 mg/(kg·d)。结果　胆总管结扎后机体内存在严重的氧化应激 ,表现为丙二醛 (MDA)明显增加 ,与实验前相比 P<0 .0 1。超氧化歧化酶 (SOD)活性和抗氧化维生素 (VE和 VC)均减少。肝脏存在着过氧化损伤 ,表现为肝功能的损伤和肝脏病理学的变化。茶多酚治疗组 MDA与实验前相比无显著性增加 (P>0 .0 5)。血清中SOD与 VE和 VC无显著变化 ,肝功能损伤和肝脏病理变化较小。结论　茶多酚可能对阻黄肝脏有保护作用     

肉碱对不全饥饿大鼠脂肪利用的影响

目的　探讨肉碱对不全饥饿大鼠脂肪利用的影响。方法　用限食的方法造成不全饥饿大鼠模型 ,在给予高脂饲料基础上观察对照组与给予肉碱的实验组血浆肉碱浓度、附睾脂肪垫重量、粪便中脂肪含量、尿酮体、糖原等指标的变化。结果　补充肉碱后 ,实验组动物血浆总肉碱浓度显著高于对照组 ( P<0 .0 0 1 ) ;附睾脂肪组织重量及粪便中脂肪含量均显著低于对照组 ( P<0 .0 5) ,而肝糖原和肌糖原含量显著高于对照组 ( P<0 .0 5) ;实验前期和中期实验组尿酮体排出减少 ,与对照组相比 P<0 .0 5。结论　补充肉碱对不全饥饿大鼠脂肪利用有一定的促进作用     

扇贝裙边提取物对小鼠移植宫颈癌的抑制作用研究

目的　观察扇贝裙边提取物对荷瘤鼠免疫和抗氧化功能的影响。方法　选用小鼠移植宫颈癌模型 ,以一定量的扇贝裙边提取物连续 1 7d灌胃荷瘤小鼠。末次给药后的次日 ,进行免疫和抗氧化功能指标测定。结果　扇贝裙边提取物能使肿瘤抑制率达 37%以上 ;而且宿主因荷瘤而下降的免疫指标包括脾脏 NK细胞杀伤活性 ,丝裂原诱发的淋巴细胞转化强度 ,总 T细胞数和脾脏重量明显回升 ;因荷瘤而下降的抗氧化物酶谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)和超氧化物歧化酶 (SOD)活性显著增高 ,脂质过氧化物 (LPO)含量显著下降。结论　扇贝裙边提取物可能通过增强宿主免疫功能和提高机体抗氧化能力而抑制肿瘤的生长。     

大豆异黄酮对大鼠血脂和过氧化状态的影响

目的　观察大豆异黄酮 ( SI)对大鼠血脂水平及体内过氧化状态的影响。方法　 48只 Wistar大鼠随机分成四组 ,分别接受正常饲料、高脂饲料、高脂饲料添加 SI糖甙 30 0 mg/kg和高脂饲料添加 SI甙元 30 0 mg/kg处理。实验期 7周。结果　SI显著抑制高脂饲料所致的血浆甘油三酯水平升高 ,但对血浆总胆固醇 ,低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇变化几乎无影响。SI对进食高脂饲料引起的体内过氧化物水平升高具有显著拮抗作用 ,表现在降低肝脏及心肌中的自由基水平 ,升高肝脏超氧化物歧化酶和肝脏及心肌中谷胱甘肽过氧化物酶活性 ,减少血清及肝脏、心肌和主动脉中的脂质过氧化物含量。SI糖甙与其甙元的作用特征一致 ,仅在作用程度上略有差异。结论　 SI对高血甘油三酯有降低作用 ,并能改善高脂所致体内过氧化状态异常 ,减轻对机体的过氧化损伤。在大鼠饲料中 SI甙元的效果略优于 SI糖甙     

硒在前列环素生物合成中作用机制的研究

目的　评价硒在前列环素生物合成中的作用机制。方法　用低硒饲料、补硒饲料和常规饲料饲养雄性大鼠 1 4周后 ,测定血液和某些组织中硒、前列环素 ( PGI2 )、血栓素 ( TXA2 )和脂质过氧化物 ( LPO)的含量 ,谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH- Px)活性及前列腺素内过氧化物合成酶( PGHS)的过氧化物酶活性 ,并采用 RNA折叠程序对 3个前列环素合成酶 ( PGIS)基因 3 非翻译区 ( UTR)的二级结构进行计算机预测 ,与已知的 39个真核生物硒蛋白基因的硒代半胱氨酸插入序列 ( SECIS)进行比较。结果　低硒大鼠血浆 PGI2 浓度、血和组织中硒含量及 GSH- Px活性显著下降 ,LPO水平升高 ,但三组之间血浆 TXA2 水平和组织中 PGHS-过氧化物酶活性均无显著差异 ,在 PGIS基因中未见到硒蛋白所特有的 SECIS。结论　PGIS可能不是硒酶 ,硒可能是通过 GSH-Px或其他硒蛋白抑制过氧化物的产生而影响 PGI2 的合成     

视黄酸对人脐血淋巴细胞生长因子基因的调节

目的　探讨维生素 A促进免疫细胞功能的机制。方法　采用逆转录——聚合酶链反应 ,检测分析视黄酸 (RA)对体外培养的脐血淋巴细胞 (CBL)胰岛素样生长因子 1 (IGF- )及两类受体 (IGF- R,- R)基因表达水平的调节。结果　在加入生理浓度 RA培养 6～ 2 4 h CBLIGF- ,IGF- R和 IGF- R基因表达显著上调。结论　在 RA对免疫细胞的作用中 IGFs的调节可能是一条重要途径。     

维生素E和β胡萝卜素对巨噬细胞氧化修饰低密度脂蛋白的影响

目的 :　研究维生素 E(VE)、β胡萝卜素 (βC)对巨噬细胞 (MΦ )介导的低密度脂蛋白 (LDL)氧化修饰能力的影响。方法 :　于培养成熟的 MΦ中分别加入不同剂量的 VE(40、1 0 0、2 0 0 μmol/L)和 βC(0 .5、1 .0、2 .0 μmol/L) 37℃孵育 2 4 h,通过测定培养物上清液中硫代巴比妥酸反应物 (TBARS)、荧光物质 (Lipofusin)、LDL电泳迁移率 (Rf)及共轭二烯 (Dienes)的形成 ,反映LDL的氧化修饰程度。结果 :　体外补充 VE可以显著降低培养物上清液中 TBARS、荧光物质以及共轭二烯的形成 ,明显抑制 LDL的电泳迁移率 ,随剂量增大作用加强 ;βC低剂量组 (0 .5μmol/L)可显著降低培养物上清液中 TBARS、荧光物质以及共轭二烯的形成 ,明显抑制 LDL的电泳迁移率 ,其余各组无明显影响。结论 :　 VE、βC均可抑制 MΦ介导 LDL氧化修饰的能力 ,并具一定的量效关系 ,提示在 MΦ氧化修饰 LDL的可调节因子中 ,抗氧化营养素是一种有效措施     

Protective effect of ascorbic acid on the breakdown of proteins exposed to hydrogen peroxide in chicken skeletal muscle.

Ascorbic acid is believed to protect cells from oxidative damage by reacting with oxygen-derived free radicals. We investigated whether ascorbic acid would affect the rate of breakdown of skeletal muscle proteins in extracts exposed to hydrogen peroxide. Ascorbic acid (20 mmol/L) alone had little or no effect on the rate of ATP-independent or ATP-dependent breakdown of proteins in chicken skeletal muscle. Pretreatment of chicken skeletal muscle extracts with 10 mmol/L H2O2 resulted in a complete loss of ATP-dependent proteolysis and a significant increase (14- to 15-fold) in the rate of ATP-independent protein breakdown. Ascorbic acid (20 mmol/L) did not prevent H2O2 (10 mmol/L) from inactivating the ATP-dependent proteolytic pathway in skeletal muscle. However, ascorbic acid (20 mmol/L) prevented the H2O2-induced increase in the ATP-independent proteolysis of endogenous muscle proteins. Ascorbic acid also slowed the rate of hydrolysis of exogenously added [3H]superoxide dismutase exposed to H2O2 and inhibited the enhanced degradation of [3H]lysozyme and H2O2-treated [3H]superoxide dismutase by the proteolytic systems exposed to H2O2. Thus ascorbic acid seems to inhibit the H2O2-induced increase in ATP-independent proteolysis 1) by preventing damage to proteins by H2O2 resulting in a decreased supply of substrates for the ATP-independent degradative system and 2) by preventing activation of the proteolytic enzymes that participate in the energy-independent degradation of H2O2-treated proteins.