维生素C、E对体外氧化血管内皮细胞保护作用的研究

目的观察维生素C(VC)、维生素E(VE)及其联合作用对体外氧化损伤血管内皮细胞抗氧化作用的影响。方法采用体外细胞培养方法,将血管内皮细胞分为正常对照组,H2O2氧化损伤对照组,损伤加VC低、中、高浓度组(VC-L、M、H组),损伤加VE低、中、高浓度组(VE-L、M、H组),损伤加VC、VE联合低、中、高浓度组(VC-L+VE-L、VC-M+VE-M、VC-H+VE-H组)。分别将不同剂量的VC、VE加入到培养液中,预孵24h,再加入除菌后的H2O2进行损伤,终止培养后收集细胞,测定各组细胞抗氧化指标。结果与H2O2氧化损伤对照组比较,VC、VE、VC+VE各组均能增强其SOD、GSH-PX及CAT活性,降低LDH释放率,差别有统计学意义。与正常对照组相比较,(VC+VE)-M、H组差别无统计学意义。此外,(VC+VE)-L组与VC、VE-L差别无统计学意义,但(VC+VE)-M、H组SOD均高于VC、VE-M、H组,(VC+VE)-H组LDH释放率低于VC、VE-H组,差别有统计学意义。结论VC、VE能够提高氧化损伤血管内皮细胞的抗氧化能力,且二者联合作用优于单独作用。     

维生素E对体外氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

为探讨维生素E(VE)对体外氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)所致血管内皮细胞 (VEC)氧化损伤的保护作用。利用体外培养人脐静脉血管内皮细胞 ,建立了氧化损伤模型。将细胞分为 5组 :对照组、ox LDL组、VE L +ox LDL组 ,VE M +ox LDL组和VE H +ox LDL组。各剂量组首先在含有不同浓度的VE培养液中孵育 ,2 4小时后加入ox LDL进行氧化损伤 ,继续培养 2 4小时后收集细胞 ,进行有关指标测定。结果显示 ,ox LDL组MDA含量高于对照组和各VE组 (P <0 0 5) ;ox LDL组SOD活性低于对照组和各VE组 (P <0 0 5) ;ox LDL组、VE L +ox LDL组GSH Px活性低于其它各组 (P <0 0 5)。提示维生素E对ox LDL诱导的血管内皮细胞损伤有一定的保护作用     

马兜铃酸致血管内皮细胞毒性及羟苯磺酸钙的拮抗作用

目的证实马兜铃酸（AA）能使血管内皮细胞（VEC）胞内钙离子（[Ca^2＋]i）超载,致VEC损伤,而羟苯磺酸钙有拮抗作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞系（HUVEC）,用马兜铃酸钠（AA—Na）和羟苯磺酸钙处理,设对照组、AA组、干预组三组。倒置显微镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构改变,ELISA法测定细胞培养上清液中血栓调节蛋白（TM）,FLuo-3钙离子探针检测HUVEC（[Ca^2＋]i）浓度变化。结果与对照组相比,AA组TM值和平均（[Ca^2＋]i）浓度明显升高（P〈0．05）。与AA组相比,干预组羟苯磺酸钙浓度为25、50μM时,TM值和平均（[Ca^2＋]i）浓度明显降低（P〈0．05）;与对照组相比,AA组细胞内质网池状扩张。线粒体嵴缺损。而干预组细胞内质网、线粒体形态均有改善。结论AA—Na能使VEC钙超载,致内皮细胞破坏,TM增加,内质网和线粒体破坏;羟苯磺酸钙可以通过保护内质网、线粒体,减少VEC钙超载,保护VEC。     

大剂量维生素E、C联用对细胞功能的影响

目的研究大剂量维生素E(VE)、维生素C(VC)联用对大鼠外周血淋巴细胞的增殖、抗DNA氧化损伤以及红细胞膜流动性的影响。方法将Wistar大鼠随机分为6组,即对照组、VC组〔每天1 000 mg/(kg.bw)〕、2个VE组〔每天33,500 mg/(kg.bw)〕及2个VE、VC联合补充组,实验期为8周。分别采用DPH荧光标记、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、单细胞凝胶电脉法(SCGE)分析红细胞膜流动性、淋巴细胞转化率及DNA氧化损伤。结果33mg/(kg.bw)VE可降低血浆丙二醛(MDA)水平,提高红细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力(P<0.05);该组红细胞膜P、η值低于其它组,即膜流动性显著改善;淋巴细胞转化率较对照提高了146.54%;DNA氧化损伤为150.42 AU,显著低于其它组(P均<0.05)。联合补充(VE1+VC)组的细胞转化、抗DNA损伤等细胞功能指标均较单独补充(VE1)组下降(P<0.05)。结论较大剂量VE能提高淋巴细胞增殖活性及抗DNA氧化损伤能力、改善红细胞膜流动性,但大剂量VC可能对其影响产生拮抗作用;过大剂量VE、VC补充时均未观察到有利作用,甚至显示细胞活性下降。     

大豆异黄酮对氧化损伤血管内皮细凋亡作用

目的 探讨大豆异黄酮(SI)对氧化损伤血管内皮细胞凋亡作用.方法 体外培养血管内皮细胞,采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)进行氧化损伤,将细胞分为6组,即空白对照组、氧化损伤对照组(ox-LDL)、氧化损伤加入维生素E对照组(VE ox-LDL)、氧化损伤加入SI低、中、高剂量组(SI-L ox-LDL、SI-M ox-LDL、SI-H ox-LDL).将ox-LDL作用于预先加入VE或不同剂量SI孵育24 h的内皮细胞,继续培养24 h.测定细胞四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)吸光度(A)值、乳酸脱氢酶(LDH)释放情况、细胞凋亡指数(AD及形态学观察.结果 空白对照组、VE ox-LDL及(SI-L、M、H) ox-LDL组细胞MTT(A)明显高于ox-LDL组(P<0.01);空白对照组、VE ox-LDL及(SI-L、M、H) ox-LDL组细胞LDH释放百分比及AI均明显低于ox-LDL组(P<0.01).结论 SI对体外氧化损伤血管内皮细胞凋亡具有明显的抑制作用.     

不同剂量维生素C对DNA氧化损伤影响的研究

目的 :　探讨补充不同剂量维生素 C(VC)对细胞 DNA损伤和诱导氧化损伤的影响。方法 :　在细胞培养液中分别加入 0 .1、0 .2 5及 0 .5mmol/L VC,观察 Hela (human trans-formed epithelial)细胞生长情况 ,给予低剂量 H2 O2 (0、5、1 0、2 5μmol/L)诱导 DNA氧化损伤 ,采用“彗星”电泳技术分析 DNA损伤。结果 :　VC为 0 .1、0 .2 5及 0 .5mmol/L三个剂量组的 Hela细胞经过 41 h培养后自发性 DNA损伤与对照组相比没有明显增加。当给予低剂量 5、1 0、2 5μmol/LH2 O2 诱导 DNA氧化损伤时 ,则在 0 .1 mmol/L和 0 .2 5mmol/L两组的 Hela细胞 DNA损伤率明显低于对照组 (无 VC培养 ) ;相反在浓度为 0 .5mmol/L VC培养的 Hela细胞 H2 O2 诱导的 DNA损伤率明显高于对照组。结论 :　在 0 .1和 0 .2 5mmol/L VC剂量下 ,能明显降低 Hela细胞氧化损伤 ,而过高剂量 VC对 H2 O2 诱导的 DNA损伤具有明显的增强作用。因此 ,VC的营养作用、抗氧化作用及毒性作用与其剂量有着密切的关系 ,适量摄入 VC有利于健康     

葡萄籽原花青素对H_20_2诱导的脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的用葡萄籽原花青素(GSP)研究对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制。方法建立氧化损伤的细胞模型,体外培养HUVEC分为正常对照组、氧化损伤组以及高、中、低剂量(100,50,10μg/ml)GSP组;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测GSP对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的保护作用;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测单核细胞趋化蛋白(MCP-1)mRNA的水平;流式细胞术Annexin V/PI检测细胞凋亡以及定量检测各实验组细胞间粘附分子(ICAM-1)、血管细胞粘附分子(VCAM-1)的表达。结果内皮细胞氧化损伤后吸光度(OD)低于正常对照组;GSP预处理后OD值增加,高剂量GSP组的OD值与正常组相比无显著性差异;损伤组MCP-1 mRNA表达水平与内参照灰度值之比高于正常组;药物预处理氧化损伤后明显减弱。损伤组中细胞凋亡率显著增高、表达ICAM-1、VCAM-1的阳性细胞数均多于正常组;预处理后,凋亡细胞数以及两种粘附分子阳性细胞数明显减少,且呈剂量依赖性效应。结论葡萄籽原花青素可通过抑制内皮细胞粘附分子与细胞因子的表达而抑制炎症性损伤及其凋亡,达到保护内皮细胞的目的。     

1,2-二氯乙烷对大鼠体外血脑屏障细胞损伤的形态学观察

[目的]进一步探讨1，2-二氯乙烷对血脑屏障细胞的损伤作用。[方法]在体外建立了血脑屏障细胞模型，并从形态学上观察1，2-二氯乙烷对血脑屏障细胞的损伤作用。体外培养脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞，将生长良好的脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞分为4组，即对照组、5、10、20μl／ml组，用1，2-二氯乙烷对脑微血管内皮细胞和神经胶质细胞染毒，染毒0、10、30、60min后于光镜和电镜下密切观察细胞的形态学变化。[结果]染毒后的脑微血管内皮细胞呈进行性破坏，随着染毒剂量的加大细胞体积逐渐增大，胞膜模糊，细胞与细胞间、细胞与突触间连接减少，甚至消失；随着染毒时间的延长，在10、30、60min后可以观察到有进行性的细胞膜溶解破坏，胞核模糊，界限不清，突触变短。随着染毒浓度的增加或时间的延长，神经胶质细胞树突数量减少，轴突减少变短，细胞与突触间、胞体与胞体间连接减少甚至消失，超微结构显示胞浆中线粒体膜的破坏、缺失，嵴断裂、肿胀及空泡变，粗面内质网轻度扩张、脱颗粒，细胞核内染色质在核周凝集，胶质细胞间及突触间的连接松解。[结论]1，2－二氯乙烷可造成血脑屏障细胞的损伤，引起血管源性脑水肿。     

原花青素对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨原花青素对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法：体外培养内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组（Control组）、氧化损伤组（H2O2组）、氧化损伤加入VitC对照组（VC＋H2O2组）、氧化损伤加入原花青素5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度组（procyanidin-L＋H2O2组、procyanidin-M＋H2O2组、procyanidin-H＋H2O2组）。将750μmol/LH2O2作用于加入VitC及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,以细胞毒四唑盐（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）作为检测指标。结果：原花青素呈剂量依赖性降低H2O2对内皮细胞的生长抑制率,降低MDA、LDH量,增加培养液中NO2-/NO3-含量,各指标比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：原花青素可保护和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、促进NO释放有关。     

镁对入脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响

目的观察Mg2+对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响.方法取新生儿脐带内皮细胞进行细胞培养.实验分四组1.阴性对照.2.阳性对照,培养液中加H2O2.3.补镁组,培养液中加不同浓度的MgSO4.4.补H2O2与镁组培养液中加H2O2与镁.用单细胞凝胶电泳技术检测各组拖尾细胞率与拖尾细胞长.结果与H2O2组相比,H2O2+Mg2+各剂量组拖尾细胞率下降、拖尾细胞尾长减小.结论Mg2+对H2O2诱导的DNA氧化损伤有明显的拮抗作用.     

蔬菜维生素B_1、维生素B_2保留因子的研究

目的通过比较不同蔬菜、不同烹调方法间维生素B1、维生素B2保留因子(RF)的差异,探讨影响蔬菜维生素B1、维生素B2保留因子的因素。方法选取了常见的12种蔬菜,以炒、炖、炸、蒸、焯、盐腌的方法进行烹调,分别记录烹调前后的重量,采用GB/T5009.84-2003荧光法、GB/T5009.85-2003荧光法分别测定烹调前后维生素B1、维生素B2含量,计算出相应的重量保留因子(保留率)和维生素B1、维生素B2保留因子(保留率)。结果鲜豆类蔬菜,维生素B1的保留率大多在66%~75%之间,维生素B2的保留率在85%~90%之间。焯不论对于根茎类还是叶菜类都会造成维生素B1的较大损失,损失率为50%。对于叶菜类,焯同样会造成维生素B2较大损失,RF的均值为50,明显低于炒青菜(P<0.05)。根茎类和茄果类蔬菜在炒的烹调方式下维生素B2的RF值在77~79之间。结论焯会造成较大的维生素B1、维生素B2损失,炒的维生素B1、维生素B2保留率较高;烹调方法、蔬菜的品种是影响维生素保留因子的重要因素。     

贫血孕妇维生素A、维生素B_2和铁营养状况及抗氧化水平的调查分析

目的分析孕期贫血妇女的血浆维生素A(VA)、维生素B2(VB2)和铁营养状况及抗氧化水平。方法将孕中期妇女分成非贫血组(Hb≥110g/L,36人)和贫血组(HB80~105g/L,426人),经知情后同意参加。采用24小时膳食回忆法了解受试者每日主要营养素摄入情况,采集空腹静脉血5ml,分析血浆VA、VB2和铁蛋白(SF)水平,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙二醛(MDA)和红细胞膜流动性的变化。结果贫血孕妇VA、VB2摄入不足,分别为推荐摄入量(RNIs)的58·7%和57·2%,铁的来源仍为吸收率低的植物性食物。贫血孕妇的血浆VA(1·25μmol/L)和铁蛋白(20·57μg/L)水平明显低于非贫血孕妇(VA1·57μmol/L,SF33·16μg/L,P<0·05),全血谷胱苷肽还原酶活性系数(BGRAC)(1·79)水平高于非贫血组(1·52);SOD(77·1U/ml)和GSH-Px(61·9U)活性低于非贫血组(SOD92·2U/ml,GSH-Px71·6U,P<0·05);MDA(4·58nmol/ml)和红细胞膜的P和η值(P=0·2622,η=2·7465)明显高于非贫血组(MDA3·78nmol/ml,P=0·2360,η=2·3658,P<0·05)。且随贫血程度的加重,VA、铁蛋白水平、SOD和GSH-Px活性进一步下降,BGRAC、MDA、P和η值明显升高。结论妊娠中期贫血妇女血浆VA、VB2、铁蛋白及抗氧化能力均明显低于非贫血孕妇。且随贫血程度的加重而降低。     

VES抑制Raji细胞增殖中对CDK2和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的比较观察维生素E琥珀酸酯(VES)和维生素E(VE)对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期素依赖性激酶2(CDK2),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响.方法应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方法,体外观察VES和VE对Raji细胞的作用.结果 VES和VE对Raji细胞均有程度不一的生长抑制作用,20μg/mlVES对Raji细胞的生长抑制在72h即达100%,而20μg/mlVE的抑制率仅与5μg/mlVES的接近.VES较强的生长抑制作用与诱发细胞凋亡的明显增加同步发生,具有剂量效应和时间效应关系,同时VES作用后,细胞内CDK2蛋白,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达增加.结论 VES通过影响细胞周期调控因子CDK2,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达可能是其抗肿瘤的途径之一.     

血清叶酸和维生素B12水平与抑郁症的关系

目的通过观察抑郁症患者血清叶酸和维生素B12浓度,探讨营养因素与抑郁症的相关性。方法选择Hamilton抑郁量表17项中得分大于17分和／或Hamilton焦虑量表14项中得分超过14分的30例患者组成抑郁症组,Hamilton抑郁量表得分低于17分、Hamilton焦虑量表得分低于14分的30例患者作为对照组。检测血红蛋白、血清叶酸和维生素B12水平以及进行Zung抑郁自评量表（SDS,20项）和焦虑自评量表（SAS,20项）测查。采用t检验比较两组以上指标的差异。结果抑郁症组血清叶酸[（4．06±1．61）vs．（6．48±2．36）ng／ml,P〈0．05]和维生素B12水平[（427．96±126．20）vs．（498．46±119．08）pg／ml,P〈0．05]均显著低于对照组。血清叶酸和维生素B12水平与Hamilton抑郁分值均无相关性。结论抑郁症患者的血清叶酸和维生素B12水平低于正常人。     

维生素D在老年2型糖尿病患者中的作用

目的探讨维生素D在老年2型糖尿病患者中的作用。方法筛选没有接受胰岛素治疗以及服用过维生素D的老年2型糖尿病患者105例,其中维生素D缺乏的患者84例为研究组,给予每周一次维生素D3,至少服用8周;维生素D水平正常的21例为对照组;分析相关数据。结果 80.00%的老年2型糖尿病患者存在维生素D缺乏现象,患者BMI、FPG明显高于对照组(P<0.05)。研究组平均接受治疗84.13 d后,所有患者的血清25(OH)D水平均高于20ng/m L;与治疗前对比,FBG和QUICKI差异有统计学意义(P<0.01);但是在减少Hb A1c,FIN以及HOMA-B方面,差异并没有统计学意义(P>0.05)。结论老年2型糖尿病患者更容易出现维生素D缺乏现象,对于老年2型糖尿病患者补充维生素D能够降低患者空腹血糖。     

维生素D3对2型糖尿病小鼠肾脏的保护作用

目的 探讨维生素D3对2型糖尿病小鼠肾脏的影响。方法 将雄性db/db小鼠随机分为4组:糖尿病(diabetes mellitus, DM)模型组、维生素D3低剂量组(250 IU/(kg·d))、中剂量组(500 IU/(kg·d))和高剂量组(1 000 IU/(kg·d)),与其匹配的db/m小鼠作为正常对照组。维生素D3各剂量组每天灌胃相应浓度的维生素D3玉米油溶液,正常对照组和DM模型组灌胃玉米油。连续饲养16周后,测定各组小鼠空腹血糖、血肌酐及24 h尿微量白蛋白,电镜观察各组小鼠肾脏足细胞超微结构,检测各组小鼠肾脏组织肾病蛋白(Nephrin)和足细胞标记蛋白(Podocalyxin, PCX)的蛋白表达情况。结果 与DM模型组小鼠相比,维生素D3干预组空腹血糖、血肌酐及24 h尿微量白蛋白显著降低(F=4.132,P<0.05; F=5.552,P<0.05; F=8.023,P<0.05),足细胞超微结构显示足细胞损伤有明显改善,高剂量组小鼠肾脏组织中Nephrin表达显著升高(P<0.05),中剂量和高剂量组小鼠肾脏组织中PCX的表达显著升高(P<0.05)。 结论 维生素D3可上调足细胞Nephrin和PCX的表达降低足细胞损伤,减少2型糖尿病小鼠尿白蛋白排泄,进而延缓糖尿病肾病的进展。     

高效液相色谱法测定血清维生素B1和维生素B2含量

目的研究高效液相色谱测定血清中维生素B1(VB1)和维生素B2(VB2)的方法。方法采用C18反相色谱柱,以甲醇+磷酸盐缓冲溶液(pH3.5)作为流动相;二极管阵列检测器检测;采用Sep-park C18小柱吸附的样品前处理方法,考察了保留时间,洗脱液体积和比例对样品前处理效果的影响。结果方法的回收率82.67%～96.89%,变异系数<10%;线性相关系数分别为0.9985和0.9995,线性关系良好。测定正常人和肥胖人血清中VB1和VB2的含量,结果显示肥胖人血清中两种维生素的含量显著低于正常人。结论建立了HPLC测定血清中VB1和VB2的方法,肥胖人体内缺乏VB1和VB2。     

维生素Ｅ对1，2-二氯乙烷中毒性脑水肿保护作用的研究

目的探讨维生素E (vitamin E,Vit E)对1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)中毒性脑水肿的保护作用。方法将雌性昆明种小鼠随机分为空白对照组、Vit E对照组、1,2-DCE单纯染毒组及Vit E低、中和高剂量干预组。连续给予药物灌胃4 d后,采取静式吸入方式染毒3. 5 h/d,持续3 d。结果与空白对照组相比,单纯染毒组小鼠脑组织呈现明显脑水肿病理改变,脑含水量、脑组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及细胞色素P450 2E1 (cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白和mRNA表达水平显著升高,脑组织中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase assay kit,CAT)活性、Occludin蛋白和mRNA及Claudin 5蛋白表达水平显著降低。与单纯染毒组相比,各干预组小鼠的脑含水量、脑组织MDA含量、CYP2E1蛋白和mRNA表达水平显著降低,GSH含量、Occludin蛋白及mRNA水平显著升高;中和高剂量干预组的小鼠脑组织中SOD和CAT活性及Claudin 5蛋白表达水平亦显著升高(P0. 05)。结论单纯1,2-DCE染毒可引起小鼠脑水肿,诱导脑组织中CYP2E1的表达,诱发脑组织氧化损伤,破坏紧密连接蛋白,并抑制Occludin和Claudin 5的表达;而Vit E干预可显著抑制CYP2E1的表达,缓解CYP2E1介导的氧化损伤,有效预防1,2-DCE引起的中毒性脑水肿。     

维生素E同系化合物抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用

通过探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES)抑制肝癌细胞生长的生物学效应 ,为维生素E(VE)防治肝癌提供理论依据 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 1 2 5、2 5 0、50 0、1 0 0 0和 2 0 0mg L的VE同系化合物 ,采用细胞计数法和噻唑蓝比色法 (MTT)比较VE同系化合物抑制HepG2细胞增殖的效应 ;采用流式细胞仪检测四种VE同系化合物对HepG2细胞周期的影响。结果显示在 1 2 5和 2 5 0mg L浓度下 ,4种VE同系化合物均未显示出对HepG2细胞生长的抑制效应 ;在50、1 0 0和 2 0 0mg L浓度下 ,δ 生育酚、VES处理的HepG2生长速度明显减缓、细胞存活率显著降低 ,δ 生育酚处理的HepG2细胞生长轻度减缓 ,而γ 生育酚处理的HepG2细胞未见明显改变。VE同系化合物抑制HepG2细胞增殖的效应为δ 生育酚 >VES >γ 生育酚 >α 生育酚 ;细胞周期结果显示HepG2细胞增殖阻断于G1 期。提示VE同系化合物抑制肝癌细胞生长作用不同 ,δ 生育酚和VES在体外显示出较强的抗肝癌细胞增殖效应