同胞供者经G—CSF动员后外周血干细胞与幼稚粒细胞关系的研究

目的：研究供者经粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员后,采集的外周血干细胞（PBSC）移植物中的幼稚粒细胞与CD34^ 细胞及单个核细胞（MNC）之间的相关性。方法：10例异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT)供者用G-CSF（仅2例用G-CSF GM-CSF）7.25-10ug.kg^-1.d^-1进行动员,于动员前及动员后,对外周血及收集的外周血干细胞（PBSC）收集物中幼稚粒细胞及CD34^ 细胞进行检测计数。结果：（1）动员后白细胞主数及细胞计数及幼稚粒细胞逐渐增加,至5天达高峰;（2）外周血MNC中幼稚粒细胞增加与CD34^ 细胞增加有较好的相关性;（3）经2次单采后供者血小板约降低60%,但一周后基本恢复正常,结论：G-CSF7.25-01ug.kg^-1.d^-1分两次皮下注射能有效动员PBSC;allo-PBSCT供者经G-CSF动员后,外周血MNC中幼稚粒细胞数结合可做为allo-PB-SCT的剂量阈标准。     

35名正常供者经粒细胞集落刺激因子动员后异基因外周血干细胞收集结果

目前使用基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhG -CSF)动员健康供者外周血干细胞 (PBSC)作为造血干细胞来源 ,已越来越多地替代全身麻醉下的骨髓采集应用于血液恶性肿瘤患者的异基因移植。为此 ,我们采用BexterCS -3000 +血细胞分离机采集分离正常供者经rhG -CSF动员后的外周血干细胞 ,以探讨正常供者PBSC的收集效率和安全性。1.1供者选择35名健康供者分别为35名恶性血液病患者的同胞 ,经HLA配型符合供者要求。其中男性21名 ,女性14名 ;年龄分布为17～46岁 ,中位年龄29岁。1.2PBSC动员35名正常供者的动员方案均为rhG -CSF5μg·kg-1…     

化疗联合G-CSF动员外周血造血干细胞疗效观察

目的:探讨化疗联合粒细胞集落刺激因子动员外周血造血干细胞(PBSC)的效果。方法:12例恶性血液病患者采用化疗联合G-CSF进行PBSC动员和采集,并检测采集物中单个核细胞计数(MNC)和CD34+细胞。结果:12例患者均一次即获足量干细胞,获MNC平均5.7(2.2~7.6)×108/kg,CD34+细胞平均15.2(2.5~26.9)×106/kg。未出现严重不良反应。结论:化疗联合G-CSF能安全、高效地动员PBSC,满足移植的需要。     

基质金属蛋白酶9在粒细胞集落刺激因子诱导的造血干/祖细胞动员中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导的造血干/祖细胞(HSPC)动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法测定了健康供者稳态及G-CSF动员第5天骨髓、外周血MMP-9蛋白及mRNA水平的变化,比较富含MMP-9的细胞系HT1080无血清培养上清孵育前后CD34+细胞表面CXCR4表达及对基质细胞衍生因子1(SDF-1)的迁移能力的变化,将rhMMP-9与rhSDF-1孵育后应用Western印迹检测MMP-9对SDF-1的降解作用,观察注射MMP-9化学抑制剂(MPI)ο-邻二氮杂菲对G-CSF动员BALB/c小鼠外周血成熟白细胞计数(WBC)和干/祖细胞的数量的影响。结果G-CSF动员第5天,骨髓上清MMP-9浓度增加了6.6倍(P<0.01),骨髓组织表达MMP-9的中性粒细胞明显增多。动员后骨髓单个核细胞MMP-9mRNA表达水平上调(P<0.05)。rhSDF-1与rhMMP-9短期孵育后可被后者降解。HT1080无血清培养上清液能够上调脐血和动员外周血富集的CD34+细胞的CXCR4表达水平(均P<0.05)及增强CD34+细胞向SDF-1浓度梯度迁移能力(均P<0.05),该效应可被MPI阻断(P<0.05)。与G-CSF共注射MPI后BALB/c小鼠外周血成熟WBC(12.3×106/L±1.2×106/L)和造血祖细胞集落形成单位(69U/2×105MNC±3U/2×105MNC)数量显著低于对照组(P<0.05)。结论MMP-9可能通过裂解SDF-1、上调CD34+细胞表面SDF-1特异性受体CXCR4的表达及增强CD34+细胞迁移能力在G-CSF介导的HSPC动员中发挥重要作用。     

丹参酮联合rhG-CSF动员高龄健康供者外周血造血干细胞的效果分析

目的研究丹参酮联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)方案对高龄健康供者外周血造血干细胞的动员效果。方法回顾性分析2008年11月至2010年12月采用丹参酮联合rhG-CSF和单用rhG-CSF动员方案,动员高龄健康供者外周血造血干细胞的效果。其中丹参酮联合rhG-CSF组34例,单用rhG-CSF组31例;年龄45～60岁,平均49.6岁。中位体质量61.2kg(49.5～79.0kg)。给予丹参酮注射液(40mL/d)联合rhG-CSF 10μg.kg-1.d-1,或单用rhG-CSF 10μg.kg-1.d-1行外周血干细胞动员。动员第5天采集外周血单个核细胞(MNC),检测MNC和CD34+细胞数。采集外周血干细胞于当日输注给患者(预处理结束后24h)。结果丹参酮联合rhG-CSF组中30例供者1次采集充足,4例采集2次,平均采集MNC数6.7(5.9～14.3)×108/kg,CD34+细胞3.9(2.7～8.3)×106/kg;单用rhG-CSF组中22例1次采集充足,9例采集2次及以上,平均采集MNC数5.3(4.6～11.9)×108/kg,CD34+细胞数3.1(2.1～6.7)×106/kg,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。造血干细胞移植预处理后所有患者均达到明显骨髓抑制,丹参酮联合rhG-CSF组供者中性粒细胞恢复到0.5×109/L时间为12.4(10～17)d,血小板(PLT)恢复到20×109/L时间为14.2(13～18)d;单用rhG-CSF组供者中性粒细胞恢复到0.5×109/L时间为12.8(10～18)d,PLT恢复到20×109/L时间为14.8(13～19)d,两组比较差异均无统计学意义(P>0.01)。结论丹参酮联合rhG-CSF动员方案可显著提高异基因造血干细胞移植高龄健康供者外周血干细胞动员效果,保证移植后造血功能的重建。对于高龄供者是一种安全有效的动员造血干细胞的方法,临床效果满意,值得推广。     

造血干细胞移植供者应用粒细胞集落刺激因子的研究

目的:探讨外周血造血干细胞移植(peripheral b lood stem cell transp lantation,PBSCT)供者应用粒细胞集落刺激因子(granu locyte colony stimu lating factor,G-CSF)后细胞成分的变化和药物对供者身体状况的近期影响。方法:对18例健康PB-SCT供者给予G-CSF 5~10μg/(kg.d)4~5 d,采集外周血单个核细胞进行检测,临床观察用药后出现的毒副反应。结果:①外周血白细胞在动员后4~5 d达峰值,动员后比动员前高7~14倍(P<0.01)。②细胞采集在动员后第4~5 d开始,两者单个核细胞(MNC)和CD34+细胞值之间无明显差异。③本组供者不同性别和体重间,MNC值有显著差异性。④主要毒副反应为骨痛和肌痛、乏力等,采集细胞过程中出现口唇、四肢麻木。结论:对PBSCT供者应用G-CSF 5~10μg/(kg.d),4~5d可有效动员MNC和CD34+细胞。供者对此剂量的毒副反应能够耐受。     

异基因外周血干细胞移植供者动员后淋巴细胞及造血干细胞的变化

目的:观察异基因外周血干细胞移植供者动员前后淋巴细胞亚群及造血干细胞的变化。方法:粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员外周血,直接免疫荧光法标记淋巴细胞和CD34细胞,用流式细胞仪检测其表达情况,甲基纤维素半固体培养基进行CFU-GM培养评价干细胞克隆生成能力。结果:rhG-CSF动员后淋巴细胞亚群与动员前相比无明显变化,CD34 细胞由动员前的0.12±0.08增加到0.83±0.26,CFU-GM有动员前的12±6增加到102±16。结论:正常供者外周血动员后CD34 细胞明显增加,淋巴细胞无明显变化。     

粒细胞集落刺激因子动员正常供者外周血造血干细胞研究

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员正常供者外周血造血干细胞的效果、影响因素及不良反应。方法:对20例造血干细胞正常供者采用中位剂量G-CSF10.9μg/(kg·d)皮下注射3～5天后,使用COBESpectra血细胞分离机采集外周血干细胞。采用流式细胞仪检测采集物中CD34 细胞数。结果:第一次采集的单个核细胞(MNC,个)及CD34 细胞量(个)分别为(1.12～13.06,中位数3.10)×108/kg供者体重及(1.14～10.42,中位数3.8)×106/kg供者体重。MNC及CD34 细胞采集总量分别为(2.21～13.60,中位数5.80)×108/kg受者体重及(2.30～14.00,中位数6.40)×106/kg受者体重,均达到移植要求。男性CD34 细胞总量显著高于女性。不良反应较为轻微。供者年龄、体重、G-CSF剂量、采集前白细胞数等与采集所得MNC及CD34 细胞量无明显相关性。结论:G-CSF作为正常供者动员剂安全有效。     

异基因外周血造血干细胞移植治疗急性再生障碍性贫血1例报告

目的　探讨异基因外周血造血干细胞移植治疗急性再生障碍性贫血的疗效及其长期造血重建。　方法　急性再障患者 ,2 0岁 ,供者为其胞弟 ,HL A配型完全相合。供者造血干细胞动员方案 :粒细胞集落刺激因子4 5 0 μg/d× 5 d(8.8μg· kg- 1· d- 1 )。预处理方案 :环磷酰胺 5 0 mg· kg- 1· d- 1× 4 d,抗胸腺细胞球蛋白 1 5 mg·kg- 1 · d- 1 × 3d。移植有核细胞数 5 .1 0× 1 0 8kg- 1 ,CD34 + 3.0 1× 1 0 6 kg- 1 ,粒单系克隆形成单位 4 .2 0× 1 0 5kg- 1 。　结果　移植后 1 5 d造血重建。短片段串联重复序列 (STR)检测证实供者干细胞在受者体内植活。随访 1年 ,血髓象均正常 ,未发生急、慢性移植物抗宿主病。　结论　异基因外周血造血干细胞移植可有效治疗急性再障     

外周血造血干细胞动员后采集时机的快速动态监测

目的 探讨一种简单、快速判断外周血造血干/祖细胞最佳采集时机的方法.方法 利用Sysmex XT 2000I多通道血细胞分析仪的VCS和化学染色技术,对9例异基因外周血造血干细胞(Allo-PBSCT)的健康供者和5例自体外周血造血干细胞(auto-PBSCT)患者,在动员过程中采集外周血进行外周血循环幼稚细胞(PBCIC)检测.同时应用流式细胞术(FCM)和集落培养法分别对上述外周血中的CD34 细胞、粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)进行检测,观察三者之间的相关性.结果 PBCIC与CD34 细胞及CFU-GM呈良好的正相关,相关系数分别为0.789和0.877.健康供者干细胞动员后PBCIC的峰值出现于使用G-CSF后的第5～6天,PBCIC的变化幅度较CD34 和CFU-GM的变化幅度大.结论 利用Sysmex XT 2000I多通道血细胞分析仪检测PBCIC数能快速简便地监测外周血造血干/祖细胞的变化,为判断最佳采集时机提供了一种快捷简便的参考方法.     

rhEPO和rhG-CSF对小鼠CD90~+细胞的动员作用

目的:探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠外周血CD90+细胞的动员作用。方法:30只雄性昆明小鼠随机分为对照组、rhG-CSF组和rhEPO组。rhG-CSF 40μg.kg-1.d-1、rhEPO 250 IU.kg-1.d-1连续皮下注射5 d;对照组连续皮下注射生理盐水。每组均于最后一次注射后6 h收集外周血,计数有核细胞(ANC)和单个核细胞(MNC),流式细胞仪检测外周血ANC中CD90+、CD34+CD90+和CD90+CD34-细胞的比例。结果:应用rhG-CSF和rhEPO动员后,小鼠外周血中ANC和MNC的数量均较对照组增加(P<0.05),但rhG-CSF和rhEPO两组之间无差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示rhEPO组外周血ANC中CD90+细胞比例为(56.49±9.06)%,较rhG-CSF组明显增加(P<0.05);而rhG-CSF组和对照组CD90+细胞占ANC的比例无明显差异(P>0.05)。rhEPO组的CD90+CD34-细胞比例增至(53.5±8.9)%,占CD90+细胞中绝大多数。结论:rhEPO和rhG-CSF均有较强的造血干细胞动员能力,但rhEPO对CD90+细胞的动员作用强于rhG-CSF,提示rhEPO对早期造血干细胞可能具有更强的动员作用。     

小剂量G-CSF联合GM-CSF动员外周血CD34+细胞

目的 探讨小剂量粒单巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员外周血干细胞的效率。方法 20例成人恶性血液病按统计学配对方法等分为2组。非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)患者化疗方案为环磷酰胺2.0 g/d,静脉滴注,第1~2天,足叶乙甙0.2 g/d,静脉滴注,第1~3天;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者用阿糖胞苷2.0 g/d,静脉滴注,第1~3天,足叶乙甙用法同NHL。当白细胞低于1.0×10⁹/L时研究组10例应用GM-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.联合G-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.;对照组单用G-CSF 5 μg/d·kg·b.w.,全部皮下注射5~6 d。白细胞5.0×10⁹/L以上时应用CS-3000 pluse分离外周血单个核细胞,流式细胞术计数CD34⁺细胞。结果 产品细胞分类计数单个核细胞占95%~99%,在研究组CD34⁺细胞平均采集9.4(8.4~10.2)×10⁶/kg·b.w.,CFU-GM 42.4(21.9~72.8)×10⁴/kg·b.w.,对照组平均采集CD34⁺细胞4.8(4.1~8.3)×10⁶/kg·b.w.,CFU-GM 28.1(7.1~60.2)×10⁴/kg·b.w.,2组差异显著(P<0.05)。副作用2组相似。结论 恶性血液病患者化疗后应用G-CSF联合GM-CSF动员CD34⁺细胞的效果优于单用G-CSF。     

外周血造血干细胞最佳采集时机的快速判断方法

目的：探讨一种快速、简捷判断外周血造血干/祖细胞最佳采集时机的方法。方法:使用Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪上的未成熟细胞信息(IMI)通道，对5例异基因外周血造血干细胞移植(Allo-PBSCT)的健康供者,在动员过程中采集外周血进行外周血造血祖细胞（HPC）检测。同时应用流式细胞术(FCM)和集落培养法分别对上述外周血中的CD34+ 细胞、粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）进行分析，动态监测外周血造血干/祖细胞(HSC/HPC)的变化。结果：HPC与CD34+ 细胞及CFU-GM呈良好的正相关，相关系数分别为0.82和0.85。动员后第4天HPC与CD34+ 细胞和CFU-GM同时明显上升，于动员后第5天同时达到高峰，但HPC较CD34+ 细胞和CFU-GM变化幅度大（5~20倍）。结论：Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪能快速简便地动态监测外周造血干/祖细胞的变化，为外周血造血干/祖细胞最佳采集时机的判断提供了一种快捷经济的参考方法。     

自体骨髓干细胞动员治疗右心衰竭的实验研究

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对野百合碱(MCT)诱导的大鼠右心衰竭(RHF)的治疗作用. 方法:动物随机分为3组:正常对照组(CON组)、MCT组、MCT/G-CSF组,腹腔注射野百合碱诱导大鼠右心衰竭模型,采用G-CSF动员自体骨髓干细胞(BMSC),动员结束后采集外周血标本,流式细胞仪检测外周血单个核细胞中CD34 细胞含量.第4周分别对3组大鼠进行血流动力学检测,处死大鼠,取肝、心脏、肺组织行苏木精-伊红(H-E)染色. 结果:①单个核细胞中CD34 细胞含量在MCT/G-CSF组明显高于MCT组、对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01).②实验第35d,MCT组血流动力学指标明显高于对照组 (P<0.05),RHF造模成功;MCT/G-CSF组则低于MCT组(P<0.05),说明G-CSF干预治疗取得疗效.③MCT组大鼠右心室、肝脏、肺组织出现RHF的病理学改变,MCT/G-CSF组的病理学改变部分逆转. 结论:G-CSF能动员骨髓干细胞,部分逆转RHF的血流动力学和病理学改变、减缓RHF的发展,可以用于RHF的研究和治疗.     

rhG-CSF动员对外周血淋巴细胞亚群和CD34+细胞的影响

目的:动态观察自体外周血造血干细胞移植患者经rhG-CSF动员过程中外周血及外周血造血干细胞(PBPC)中淋巴细胞亚群和CD34 细胞的变化,指导临床选择最佳采集时机。方法:对大剂量化疗(HDC)联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的38例白血病和淋巴瘤患者,采用流式细胞术(FACS)测定其动员前后外周血及PBPC中的淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、NK、CD19和造血干细胞CD34细胞含量的变化,同时用甲基纤维素半固体培养基进行CFU-GM培养来评价干细胞克隆生成能力。结果:动员后外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4细胞含量均低于动员前(P<0.01),而动员后外周血中的CD34细胞含量明显高于动员前(P(0.05)。动员后第5天CD34含量达到最高峰。PBPC中CD4、CD4/CD8明显低于外周血(P<0.005),其他淋巴细胞亚群含量与外周血比较无明显变化。动员后外周血中CD34 细胞明显高于动员后,动员后PBPC中CFU-GM生成明显高于外周血(P<0.05),CD4/CD8比值严重倒置,B细胞恢复较快。结论:大剂量化疗联合rhG-CSF动员会使外周血淋巴细胞亚群发生不同程度的变化并明显增加外周血造血干细胞含量。     

健康供者骨髓血造血干细胞采集效果分析

目的：研究影响骨髓造血干细胞动员及采集的因素。方法方便选取2013年3月＿2016年6月期间就诊该院的77名健康供者,经重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF﹚动员后第4天采集骨髓,分析不同健康供者的年龄和性别对骨髓造血干细胞采集的影响以及采集时外周血白细胞数与采集效果的关系。结果77名供者均成功采集,骨髓采集物单个核细胞数(BM-MNCs)为(4.3±0.43﹚×108/kg,骨髓采集物CD34+细胞数(BM-CD34+﹚为(1.84±0.30﹚×106/kg,健康供者年龄和性别差异无统计学意义,采集时外周血白细胞数不能预测骨髓采集物中CD34+细胞的数量。结论采用5~10μg/kg G-CSF动员,健康供者均可成功采集骨髓干细胞。     

The more, the less: age and chemotherapy load are predictive of poor stem cell mobilization in patients with hematologic malignanciesThe more, the less: age and chemotherapy load are predictive of poor stem cell mobilization in patients with hematologic malignancies

Background  Intensive treatment such as autologous peripheral blood stem cell (PBSC) transplantation is an important therapeutic strategy in many hematologic malignancies. A number of factors have been reported to impact PBSC mobilization, but the predictive factors varied from one study to another. This retrospective study assessed our current mobilization and collection protocols, and explored the factors predictive of PBSC mobilization in patients with hematologic malignancies.

Methods  Data of 64 consecutive patients with hematologic malignancies (multiple myeloma, n=22; acute leukemia, n=27; lymphoma, n=15) who underwent PBSC mobilization for over 1 year were analyzed. Four patients with response to treatment of near complete remission or better were administered granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) to mobilize PBSCs. Sixty patients received G-CSF followed by chemotherapy mobilizing regimens. Poor mobilization (PM) was defined as when ≤2.0´10⁶ CD34⁺ cells/kg body weight were collected within three leukapheresis procedures.

Results  The incidence of PM at the first mobilization attempt was 19% (12/64). The PM group was older than the non-PM group (median age, 51 vs. 40 years; P=0.013). In univariate analysis, there were no significant differences in gender, diagnosis, and body weight between the PM and non-PM groups. A combination of chemotherapy and G-CSF was more effective than G-CSF alone as a mobilizing regimen (P=0.019). Grade III or IV hematopoietic toxicity of chemotherapy had no significant effect on the mobilization efficacy. Supportive care and the incidence of febrile neutropenia were not significantly different between the two groups. In multivariate analysis, age (odds ratio (OR), 9.536; P=0.002) and number of previous chemotherapy courses (OR 3.132; P=0.024) were two independent negative predictive factors for CD34⁺ cell yield. PM patients could be managed well by remobilization.

Conclusion  Older age and a heavy load of previous chemotherapy are the negative risk factors for PBSC mobilization.

     

肾上腺素与rhG—CSF协同动员小鼠造血干祖细胞的研究

目的通过比较肾上腺素和重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）单独或联合应用动员小鼠外周血造血干祖细胞（HSPC）的效果,以了解肾上腺素对HSPC的动员作用,为临床制定更为优良的动员方案奠定实验方面的基础。方法BALB／c小鼠48只,随机分成4组,每组12只。A组作为对照组,皮下注射生理盐水（NS）100μl·d^-1;B组皮下注射rhG—CSF250μg·kg^-1·d^-1;C组腹腔注射肾上腺素2．5mg·kg^-1·d^-1;D组皮下注射rhG—CSF250μg·kg^-1·d^-1＋腹腔注射肾上腺素2．5mg·kg^-1·d^-1（rhG—CSF后3h）,各组均连续用药5天。动态观察各组小鼠外周血中自细胞数（WBC）、Lin^-c—kit^＋（KL）、Lin^-c—kit^＋Sca-1^＋（KSL）细胞比例的变化。结果D组外周血WBC数及KL、KSL细胞比例明显高于B组（P〈0．05）或C组及A组（P〈0．01）;B组外周血WBC数及KL、KSL细胞比例明显高于C组及A组（P〈0．01）;C组外周血WBC数明显高于A组（P〈0．01）,但KL、KSL细胞比例与A组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论肾上腺素可协同rhG—CSF参与HSPC的动员。     

胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用

目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论 :胎儿骨髓基质细胞可协同上述外源性细胞因子支持成人骨髓造血祖细胞的有效扩增