CKD3～5期慢病管理患者肾功能进展速率及影响因素的研究

目的:分析不同分期CKD患者肾功能进展速率及相关影响因素。方法:采用t检验分析SCr、BUN、e GFR、ALB、Hb、UA对疾病病程的影响;采用方差分析检验CKD不同分期对疾病进展速率的影响; 2年e GFR下降率评价CKD不同病因进展速率。结果:SCr、BUN、e GFR、Hb与病程进展有关; Hb与CKD3、4期病程进展有关; ALB、UA与病程进展关系不显。多组分析显示SCr、BUN、e GFR、Hb与疾病所处分期有关,ALB、UA无法定论。CKD4期、病因属糖尿病肾病恶化最剧烈。结论:慢性肾脏病的进展速率与所处分期密切相关,以CKD4期进展最为迅速,病因中糖尿病肾病为进展速率之最,慢性肾炎进展相对缓慢。影响因素中病因、生活方式、高血压、蛋白尿、糖尿病、贫血、低密度脂蛋白可影响CKD进展速率,尿酸、高脂血症是否是肾功能迅速恶化的高危因素临床尚无统一定论。     

OCT4A基因对K562细胞生物学活性的影响

目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度。实验分为空白对照、p LVX空质粒、p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA和非特异sh RNA共5组。Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达。CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线。采用Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-x L和BAX m RNA表达变化。结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA。Western blot证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达。CCK-8法检测显示,p LVX-OCT4A-Zs Green1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而p LVX-OCT4A sh RNA组K562细胞增殖活性显著降低(P0.05)。感染后p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)%和(7.25±0.57)%(P0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化。OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P0.05),而BCL-x L基因表达则明显升高(P0.01)。结论:成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1及PLB-OCT4A sh RNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达。OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-x L基因上调有关。     

BRD4拮抗剂GSK525762A抗普通型急性B淋巴细胞白血病的体外研究

目的 探讨4型含Bromo结构域蛋白(BRD4)拮抗剂对普通型急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者原代白血病细胞的作用及可能机制.方法 采用流式细胞术分选14例普通型B-ALL患者(Ph+ B-ALL4例,Ph-B-ALL 10例)白血病细胞,在模拟骨髓微环境条件下进行短期培养;给予BRD4拮抗剂GSK525762A处理后,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,用Annexin V/7-AAD法检测细胞凋亡率,荧光定量PCR法检测c-MYC、CDK6、Bcl-2 mRNA表达水平,Western blot法检测c-MYC、CDK6、Bcl-2蛋白的表达.结果 GSK525762A对14例普通型B-ALL患者原代白血病细胞均有抑制增殖作用,且呈剂量依赖性,其中位IC50值为256.25 (90.64～1 378.39) nmol/L.500、1 000、2 500 nmol/LGSK525762A作用后中位细胞凋亡率分别为45.17％ (9.38％～70.91％)、66.02％ (24.36％～96.34％)、89.29％(39.29％～99.37％).GSK525762A对ph+与Ph-B-ALL细胞具有类似的作用,但对Ph+B-ALL细胞抑制增殖和诱导凋亡作用均弱于Ph-B-ALL细胞.1 000 nmol/L GSK525762A处理白血病细胞24、48 h后,c-MYC、CDK6和Bcl-2 mRNA表达水平下降,其中对ph+和Ph-B-ALL细胞c-MYC、CDK6mRNA的下调作用差异无统计学意义,而对Ph+ B-ALL细胞Bcl-2 mRNA表达水平的下调弱于对Ph-B-ALL细胞;GSK525762A处理后白血病细胞c-MYC、CDK6、Bcl-2蛋白表达水平均下调.结论 GSK525762A可抑制普通型B-ALL原代细胞的增殖,并促进其凋亡,且对Ph+ ALL细胞在体外具有一定作用.该作用可能通过下调c-MYC、CDK6和Bcl-2而实现.     

基于脑血管重建的血管内皮生长因子缓释微球制备及性质研究

目的制作用于脑血管重建研究的血管内皮生长因子(VEGF)缓释微球并研究其性质。方法采用W1/O/W2复乳溶剂挥发法制作VEGF-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)微球和载罗丹明B微球;使用扫描电镜观察其表面形态结构;采用微量蛋白测定法测定微球中药物的载药量和包封率,并对微球的体外释药性能进行研究;将用罗丹明B标记的微球注入大鼠颞肌组织,分别于第10天和第30天取颞肌组织行冰冻切片,倒置荧光显微镜下观察。结果扫描电镜观察到微球表面光滑无孔隙,粒径为4~10μm;微球载药量及包封率的测定显示其平均载药量为(25.50±1.57)%,平均包封率为(85.07±0.15)%,累积释放率可达80%以上;微球在颞肌组织中可持续存在30 d以上。结论 VEGF-PLGA微球能稳定长时间释放VEGF,可用于脑血管重建研究。     

去甲斑蝥素对人胰腺癌PANC-1 细胞凋亡作用的研究

目的 探讨去甲斑蝥素对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的作用及其机制。方法 将PANC-1 细胞株随机分为处理组 和对照组,处理组加入不同浓度的去甲斑蝥素培养24h后,CCK-8 法检测细胞增殖情况;流式细胞术分析细胞的凋亡情况;免疫印迹法检测细胞内质网应激和凋亡相关蛋白的表达;荧光定量PCR 技术检测细胞内质网应激和凋亡相关蛋白mRNA表达。结果 不同浓度去甲斑蝥素处理PANC-1细胞24h后,与对照组相比,能降低细胞的存活率并诱导其凋亡。与对照组相比,处理组中内质网应激和凋亡相关蛋白的表达水平均上调（均P＜0.05）,同时其mRNA 的表达水平亦均上调（均P＜0.05）。结论 去甲斑蝥素能明显抑制人胰腺癌PANC-1 细胞的生长并诱导其凋亡,并且具有浓度依赖性,这一作用可能是通过内质网应激介导的凋亡途径实现的。     

亚低温抑制重型颅脑创伤诱导Tau蛋白过度磷酸化的实验研究

目的 观察亚低温对重型颅脑创伤诱导的Tau蛋白磷酸化的影响.方法 体外研究通过细胞液压冲击仪建立SK-N-SH细胞损伤模型,观察冲击1h、6h和12h后Tau蛋白的磷酸化水平.体内研究通过小动物液压冲击仪建立大鼠重型颅脑损伤模型(2.4 atm),接受或不接受亚低温治疗(33℃,4h).观察液压冲击6h、24 h和72 h后Tau蛋白的磷酸化水平,以及亚低温对此变化的影响.结果 SK-N-SH细胞在液压冲击后,Tau蛋白在Thr231和Ser396位点的磷酸化水平从1h开始升高,到6h左右达到高峰.SD大鼠在液压冲击后,Tau蛋白在Thr231和Ser396位点的磷酸化水平从6h开始升高,到24h左右达到高峰,到72 h仍处于高水平;免疫组化的结果也显示,大鼠脑部海马CA1区和皮质区的Tau蛋白磷酸化水平在Thr231位点也明显增高.亚低温可显著逆转液压冲击诱导的SD大鼠Tau蛋白过度磷酸化(P＜0.01).结论 亚低温可抑制重型颅脑创伤诱导的Tau蛋白过度磷酸化.     

经皮胸腔置管灌注羟基喜树碱治疗恶性胸腔积液36例

目的:探讨经胸腔置管灌注HCPT治疗恶性胸腔积液的疗效及可行性。方法:总结经胸腔置管灌注HCPT治疗恶性胸腔积液36例的经验。结果:CR11例(30.6%),PR18例(50.0%),NC7例(19.4%)。总有效率80.6%(29/36)。置管(ARROW管)并胸腔内灌注HCPT毒副反应及并发症少。结论:胸腔置管灌注HCPT是治疗恶性胸腔积液的有效可行的方法。     

短期胰岛素强化治疗对胰岛β细胞功能恢复的临床分析

目的:探讨短期胰岛素强化治疗对口服降糖药效果差的晚期2-型糖尿病患者的血糖控制和胰岛β细胞功能的影响。方法:口服降糖药物血糖控制不佳的患者,分别采用胰岛素治疗(治疗组)及继续口服药物治疗(对照组)。观察治疗前后血糖、胰岛素、C肽的变化情况。结果:采用胰岛素强化治疗组的患者,空腹及餐后血糖有明显下降,治疗前后对比P<0.05,统计学有显著性差异;停用胰岛素改用口服降糖药治疗一个月后,空腹及餐后2 h血糖与停用胰岛素治疗时相比P>0.05,统计学无显著性差异;而对照组治疗前后相比P>0.05,统计学无显著性差异。在胰岛功能恢复方面,治疗组也有较显著改善,空腹胰岛素、C肽水平变化不明显,P>0.05,统计学无显著性差异;而餐后胰岛素、C肽分泌增加,差异有统计学意义;而对照组则无差异。结论:短期胰岛素强化治疗对口服降糖药效果差的晚期2-型糖尿病患者的血糖能得到较好的控制,并且能使胰岛β细胞功能得到部分恢复。