结缔组织生长因子反义寡核苷酸体外对人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响?

目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)体外对人增生性瘢痕组织中成纤维细胞凋亡的影响并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养的人增生性瘢痕组织中成纤维细胞, 分为CTGF-ASODN 脂质体治疗组(ASODN treatment, AT)、空白脂质体对照组(liposome control,LC) 和空白对照组(control,C),荧光显微镜观察各组CTGF-ASODN时相性分布,流式细胞术检测各组凋亡率随时相的变化,观察Fas受体表达;RT-PCR检测各组CTGF、Fas、 bcl-2 mRNA的表达.结果:AT组细胞转染24 h 后胞质内可见有大量黄绿色荧光,呈离散型、点状分布,而LC 和C 组成纤维细胞内未见荧光.转染24 h后LC组和C组成纤维细胞的凋亡率及Fas受体阳性表达率无显著差异;而AT组凋亡率及Fas受体阳性表达率明显增加,明显高于LC组和C组(P《0.01).RT-PCR结果表明,转染组CTGF mRNA相对表达量明显低于空白对照组(P《0.05),Fas mRNA表达明显高于空白对照组(P《0.01), 转染组bcl-2 mRNA与空白对照组无显著差异.结论:CTGF反义寡核苷酸体外能促进人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,可能与其上调Fas mRNA及其蛋白表达有关.     

bFGF反义寡核苷酸对大鼠肺成纤维细胞增殖信号通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸(AODN)对大鼠肺成纤维细胞增殖、转化信号通路的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组(未转染肺成纤维细胞);TGF-β1组(未转染肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+AODN组(转染AODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+RODN(正义寡核苷酸)组(转染RODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激)。每组设3复孔,并作细胞爬片,镜下计数肺成纤维细胞数量,绘制生长曲线。MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率。免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。通过ELISA法检测培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量。用RT-PCR法分析肺成纤维细胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果:1细胞计数显示:TGF-β1+RODN组各时段成纤维细胞的数目均较对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组明显增多(P<0.05);TGF-β1+AODN组中成纤维细胞增殖数比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。2MTT结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞光密度值明显比TGF-β1组减低(P<0.05)。3免疫细胞化学染色结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞与对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组比较,α-SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞α-SMA染色的平均光密度值(IOD)比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。4 ELISA法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。5RT-PCR法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显比TGF-β1组明显减低(P<0.05);TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad7mRNA表达明显低于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达比TGF-β1组明显增加(P<0.05)。结论:bFGF反义寡核苷酸可抑制肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成,bFGF反义寡核苷酸可能通过下调TGF-β1-Smad信号通路来发挥作用。     

CTGF-siRNA对低氧诱导肺成纤维细胞胶原合成的影响

目的 观察针对结缔组织生长因子(CTGF)的小干扰RNA(siRNA)对低氧诱导的人肺成纤维细胞胶原合成的影响.方法 应用siRNA表达载体介导的RNA干扰(RNAi)技术,将CTGF-siRNA表达质粒稳定转染人肺成纤维细胞MRC-5, 并将人肺成纤维细胞在低氧条件下(37 ℃, 5%CO2, 1%O2)培养1、2、4、6及12 h.采用定量PCR法测定CTGF及Ⅰ型胶原基因表达,并应用Western blot 法检测CTGF及Ⅰ型胶原蛋白表达变化.结果 低氧培养1 h后,人肺成纤维细胞即可刺激诱导CTGF mRNA表达,其升高水平可持续至6 h.而在CTGF-siRNA表达质粒稳定转染的MRC-5细胞内,低氧诱导的CTGF、Ⅰ型胶原基因及蛋白表达均降低(P<0.05).结论 针对CTGF的siRNA在体外可明显抑制低氧诱导的MRC-5肺成纤维细胞的胶原合成.     

缺氧对肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的观察不同缺氧时间对肺成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法原代培养的人肺成纤维细胞在缺氧(37℃、5%CO2、5%O2、90%N2)条件下分别孵育0、1.5、3、6及12 h,同时用抗CTGF抗体干预的人肺成纤维细胞在缺氧条件下培养12 h。RT-PCR法测定细胞CTGF mRNA、基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA表达情况,ELISA法测定细胞培养上清液CTGF、MMP9的浓度。结果缺氧刺激肺成纤维细胞CTGF mRNA高表达出现在1.5 h,并保持一相对平台至6 h,12 h开始下降。MMP9 mRNA在缺氧1.5 h出现高表达,并保持持续增高的趋势。ELISA结果证实CTGF与MMP9一样其峰浓度在缺氧12 h,用抗CTGF抗体干预的成纤维细胞组较未干预组表达MMP9量明显减少。结论缺氧可刺激人肺成纤维细胞高表达CTGF;缺氧可能是通过刺激成纤维细胞高表达CTGF,进而调节细胞分泌MMP9的量,参予细胞外基质沉积和气道重构。     

STAT1在结缔组织生长因子刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化中的作用

目的 基于既往研究,验证信号转导和转录活化因子1(STAT1)是否参与结缔组织生长因子(CTGF)刺激人增生性瘢痕成纤维细胞增殖分化过程.方法 取6例增生性瘢痕患者的手术切除组织,培养成纤维细胞.应用凝胶阻滞电泳(EMSA)方法 测定不同浓度(0、5、7.5、10、15ng/ml)CTGF刺激45 min和10 ng/ml CTGF刺激不同时间(0、10、20、30、45、60、90、120 min)对瘢痕成纤维细胞STAT1与DNA结合能力的影响.将瘢痕成纤维细胞分为CTGF刺激组、STAT1反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染组、STAT1 ASODN+CTGF组和空白对照组,用噻唑盐(MTT)法测定各组细胞培养1、2、3 d的增殖活性,RT-PCR测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达以反映瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性.结果 瘢痕成纤维细胞中STAT1与DNA的结合活性随CTGF浓度而增强,当CTGF浓度为10 ng/ml时达峰值;10 ng/ml的CTGF刺激45-60 min达峰值.MTT法检测显示CTGF刺激组培养1～3 d增殖活性明显均高于空白对照组(均P<0.05),而STAT1 ASODN转染组和STATI ASODN+CTGF组均明显低于空白对照组和CTGF刺激组(均P<0.05).RT-PCR检测结果 显示,CTGF刺激组、STAT1 ASODN转染组、STAT1 ASODN+CTGF组和空白对照组瘢痕成纤维细胞向肌成纤维细胞分化活性分别为0.78±0.08、0.38±0.09、0.76±0.10和0.40±0.12,STAT1 ASODN转染组和空白组均明显低于CTGF刺激组和STAT1 ASODN+CTGF组(均P<0.05).结论 STAT1ASODN可明显抑制瘢痕成纤维细胞的增殖活性,并阻断CTGF对细胞增殖的刺激作用,提示STAT1参与CTGF调控人增生性瘢痕成纤维细胞增殖过程.     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸对肝星状细胞胶原表达的影响

目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸对肝星状细胞株(HSC-T6)前胶原α2(Ⅰ)表达的影响。方法:实验分为反义寡核苷酸(ASODN)组、正义寡核苷酸(SODN)组、脂质体对照组、空白对照组。除空白对照组外,其余各组均于转导前提前加入TGF-β1因子刺激。结果:ASODN能显著抑制经TGF-β1活化后的HSC-T6前胶原α2(Ⅰ)mRNA的表达,而SODN和脂质体对照组对HSC-T6前胶原α2(Ⅰ)mRNA的表达均无明显影响。结论:前胶原α2(Ⅰ)表达与CTGF密切相关,进一步提示CTGF可能是肝纤维化发生发展的关键介导者;应用反义寡核苷酸封闭CTGF的表达有望成为肝纤维化治疗的一种新手段。     

survivin反义寡核苷酸对肝癌耐药细胞的作用及与化疗的关系

目的研究survivin反义寡核苷酸对人肝癌耐药细胞株的增殖和凋亡情况,以及对阿霉素化疗敏感性的影响。方法将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM分为脂质体转染组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染组、正义寡核苷酸转染 阿霉素组、反义寡核苷酸转染组、反义寡核苷酸转染 阿霉素组共6组。MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡率变化,RT-PCR和Westernblot印迹法检测细胞survivinmRNA和蛋白表达。结果survivin-ASODN作用后的人肝癌耐药细胞SMMC-7721/ADM的细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。survivinmRNA和survivin蛋白表达:脂质体转染对照组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染对照组、正义寡核苷酸转染对照 阿霉素组之间survivin蛋白表达无明显差异(P>0.05)。400ng/mlsurvivingASODN组和400ng/mlASODN 阿霉素组survivinmRNA较其他4组显著降低(P<0.05),但其两组之间表达无明显差异(P>0.05)。结论survivin反义寡核苷酸能降低肝癌耐药细胞survivin表达,增强人肝癌耐药细胞对阿霉素的化疗敏感性。     

CTNNAL1反义寡核苷酸对人支气管上皮细胞增殖和损伤修复的影响

目的 该实验旨在观察CTNNAL1反义寡核苷酸对人支气管上皮细胞增殖和损伤修复的影响.方法 引进人永生化支气管上皮细胞株进行细胞培养,设计合成CTNNAL1反义寡核苷酸和CTNNAL1错义寡核苷酸,分4组转染入人BEC:空白对照组;脂质体-CTNNAL1-ASODN转染组(Lip-CTNNAL1-A-SODN);脂质体-错义CTNNAL1-MSODN转染组(Lip-CTNNAL1-MSODN);脂质体转染组(Lip).荧光定量RT-PCR检测CTNNAL1 mRNA的表达,MTT法检测人BEC的增殖,测定损伤修复指数衡量各组细胞损伤修复速度.结果 CTNNAL1 ASODN能明显抑制人BEC的CTNNAL1 mRNA的表达,CTNNAL1ASODN能抑制人BEC的增殖,延长损伤后修复的速度,且呈剂量依赖性,在1.0μmol/L的CTNNAL1 A-SODN时,抑制作用最明显(P＜0.01).结论 CTNNAL1 ASODN通过沉默人BEC的CTNNAL1 mRNA的表达,抑制人BEC的增殖和损伤修复的速度.     

反义寡核苷酸对胆囊癌细胞端粒酶活性的作用

目的：探讨反义寡核苷酸对胆囊癌细胞端粒酶活性的影响及对胆囊癌细胞生长增殖的作用。方法：设计针对端粒酶RNA亚基模板序列并经硫代磷酸修饰的反义、正义和随机序列寡核苷酸，并以正常人成纤维细胞作对照，观察其对人胆囊癌细胞(GBC-SD)端粒酶活性和细胞生长增殖的影响以及对正常人成纤维细胞的作用。结果：反义寡核苷酸可有效地抑制GBC-SD的端粒酶活性，呈剂量依赖性，并明显地抑制GBC-SD的生长，对正常人成纤维细胞生长无明显作用。结论：硫代反义寡核苷酸对胆囊癌端粒酶活性有明显的抑制作用。     

反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞组织蛋白酶L表达的影响

目的　观察合成人组织蛋白酶L(CATL)基因的反义脱氧寡核苷酸转染后对人骨肉瘤MG 63 细胞系中CATL表达的影响。方法　人工合成正义、反义及无意义CATL基因片段,转染人骨肉瘤细胞MG 63,免疫细胞染色观察CATL的表达,RT PCR和Western blot检测CATL的mRNA和蛋白质表达水平的变化。结果　CATL反义寡核苷酸对MG 63 细胞的CATL的表达有明显的抑制作用,与正义链组、无意义链组和空白对照组相比有显著差异(P<0.05)。结论　反义寡核苷酸的转染可阻遏骨肉瘤细胞中CATL的表达。     

JAK-STAT通路参与CTGF诱导人胚肺成纤维细胞转分化的研究

目的研究JAK-STAT信号通路在重组人结缔组织生长因子(recombinant human,CTGF)诱导人胚肺成纤维细胞(HFL-I)转分化过程中的作用。方法将体外培养的HFL-I分为正常对照组、CTGF组及CTGF+JAK-STAT特异性抑制剂通路抑制剂AG490组,选取不同时相点,Western blotting测定平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、磷酸化蛋白(p-STAT3)和总蛋白STAT3的蛋白表达,RT-PCR检测STAT3 mRNA表达。结果正常体外培养的HFL-I有微量的p-STAT3、α-SMA表达,加入20ng/ml CTGF诱导15min后p-STAT3水平明显升高(P<0.05),30min时升至顶峰后逐渐减弱;诱导24h后α-SMA表达显著升高(P<0.05)。AG490 50μmol/L预处理60min,p-STAT3和α-SMA表达明显抑制(P<0.05或P<0.01)。结论 CTGF诱导HFL-I转分化为肌成纤维细胞,JAK-STAT通路参与上述过程,其特异性抑制剂AG490可有效抑制该效应。     

结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞转分化的调节机制

目的 观察结缔组织生长因子（CTGF）对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的直接影响,并探讨阻断内源性CTGF表达对转化生长因子- β1（TGF-β）诱导人肾小管上皮细胞转分化的干预效果,以阐明CTGF在肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法 体外培养人近曲小管上皮细胞（HKC）。在观察CTGF对HKC的直接作用时,将HKC细胞分为三组：（1）对照组;（2）小剂量CTGF组：培养液中加入重组人CTGF（rhCTGF）,终浓度为2．5μg／L;（3）大剂量CTGF组：rhCTGF终浓度为5．0μg／L。在探讨CTGF在TGF-β诱导HKC转分化中的作用时,将细胞分为4组：（1）正常对照组;（2）TGF-β刺激组（培养液加入重组人TGF-β1蛋白,浓度为10．0μg／L）;（3）TGF-β1＋CTGF正义寡核苷酸（ODN）组（先以CTGF正义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激）;（4）TGF-β1＋CTGF反义ODN组（先以CTGF反义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激）。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定HKC α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和Ⅳ型胶原（col Ⅳ）mRNA水平的变化;间接免疫荧光方法检测HKC胞浆内α—SMA的表达;流式细胞仪检测α—SMA阳性细胞百分率;ELISA方法测定培养液上清中col Ⅳ的浓度。结果 不同浓度rhCTGF作用于HKC24h后,α-SMAmRNA水平显著升高（P〈0．01）,而colⅣmRNA表达水平明显下降（均P〈0．01）;刺激48h后,胞浆α—SMA表达明显增强,流式细胞仪测得三组细胞α-SMA阳性百分率依次为：2．4％、38．9％、65．5％（P〈0．01）;ELISA结果表明,rhCTGF抑制了colⅣ的分泌（P〈0．01）。TGF-β1可诱导HKC高表达CTGF和α-SMA。转染后6h,CTGF反义ODN可显著抑制HKC表达CTGF和α-SMA mRNA（P〈0．01）。转染后48h,CTGF反义ODN可明显抑制胞内α-SMA蛋白合成。结论 CTGF在体外能刺激肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞（MyoF）转分化,而CTGF反义ODN的导人可有效抑制TGF-β1诱导的转分化过程。因此,CTGF可能是调节肾小管上皮细胞转分化的重要因子。     

siRNA干预CTGF和TIMP-1对大鼠肝星状细胞胶原分泌的影响

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默结缔组织生长因子(connective tissue growthfactor,CTGF)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1)对肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)CTGF和TIMP-1基因表达以及对Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响。方法根据已筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,将化学合成siRNA CTGF和siRNA TIMP-1以脂质体LipofectamineTM2000介导,瞬时转染HSC-T6细胞,分别设siRNA CTGF组、siRNA TIMP-1组、siRNA CTGF和siRNA TIMP-1联合组、脂质体组及非特异性(negative control,NC)siRNA组,抽提转染24、48h细胞mRNA和蛋白,并收集细胞上清液。应用RT-PCR鉴定CTGF和TIMP-1mRNA的表达;Western blot检测其蛋白表达;ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌。结果各干预组转染24、48h后分别与脂质体组和NC siRNA组比较,HSC-T6细胞CTGF及TIMP-1mRNA和蛋白表达均明显下调(均P<0.05),且干预组HSC-T6培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显减少(均P<0.05)。siRNA联合组分别与siRNA CTGF组和siRNA TIMP-1组比较,于转染48hsiRNA联合组较siRNA TIMP-1组抑制率高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量比siRNA TIMP-1组少,且差异具有统计学意义(均P<0.05);而与siRNA CTGF组比较,其CTGF mR-NA和蛋白抑制率增高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量较siRNA联合组减少,但差异无统计学意义(均P>0.05)。结论针对HSC-T6CTGF mRNA基因全长943位点和TIMP-1mRNA 304位点化学合成的siRNA,对靶基因mRNA和蛋白表达有较好的抑制效果,CTGF和TIMP-1沉默可显著减少细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;CTGF和TIMP-1两种基因同时沉默,有增强抗肝纤维化效果的可能。     

CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的:构建CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体并观察其介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对人肝癌细胞CTGF(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响?方法:针对已经筛选确定的人CTGF基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与Plk0.1-GFP-SP6载体连接产生shRNA 慢病毒载体,经PCR筛选阳性克隆进行DNA测序鉴定?用脂质体转染法将质粒共转染293T 细胞,将包装产生的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,Real-time PCR?Western-blot检测CTGF mRNA和蛋白的表达?结果:PCR与DNA测序证实合成的含CTGF shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确?经RNA干扰后的靶细胞CTGF mRNA以及蛋白表达水平明显降低?结论:成功构建人CTGF基因RNA干扰慢病毒载体,体外感染HepG2细胞可有效降低CTGF mRNA和蛋白的表达,为以CTGF基因为靶点的肝癌基因治疗研究奠定了基础?     

CTGF诱导的人胚肺成纤维细胞转分化中PI3K/Akt与p38MAPK磷酸化的关系

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-I)转分化中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的活动状态以及相关性的研究.方法 将体外培养的HFL-I分成4组:(1)CTGF处理组(20 ng/ml);(2) LY294002(10 μmol/L)预处理60min,再行CTGF刺激(20 ng/ml):(3)SB203580 (10 μmol/L)预处理60 min,再行CTGF刺激(20 ng/ml); (4)LY294002(10 μmol/L)和SB203580(10 μmol/L)联合作用60 min,再加入CTGF(20 ng/ml).选取不同时相点,Western blot测定平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、p-Akt和Akt的蛋白表达:RT-PCR检测PI3K和p38MAPKmRNA表达.结果 与对照组相比,CTGF诱导15 min后p-Akt水平升高,30 min时达至顶峰(P＜0.01).CTGF诱导24h后α-SMA表达显著升高(P＜0.01),可被LY294002阻断.LY294002和SB203580单独或联合预处理后,显著抑制CTGF诱导的p-Akt活化(P＜0.01).结论 CTGF诱导的成纤维细胞-肌成纤维细胞转分化中有PI3K/Akt通路的激活,PI3K和p38MAPK均可以调节Akt的活性,其特异性抑制剂均可阻断Akt的磷酸化.     

AG对大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的影响

目的:探讨氨基胍(AG)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导大鼠纤维化肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法:采用体外细胞培养,免疫细胞化学技术,流式细胞术等技术,检测AG对大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的影响。结果:TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞(MF),表达CTGF增强(P<0.05),AG抑制了TGF-β1的诱导作用(P<0.05),单独应用AG对肺成纤维细胞表达CTGF无影响。结论:AG能够削弱TGF-β1诱导大鼠纤维化肺成纤维细胞表达CTGF的能力。     

组织块法培养人胃成纤维细胞及其结缔组织生长因子的表达

[目的]探索人胃成纤维细胞体外培养的技术方法及其结缔组织生长因子表达情况。[方法]采用组织块贴壁培养法进行人胃成纤维细胞体外培养并传代,倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态,并用免疫细胞化学法检测培养细胞的波形蛋白与角蛋白表达。用RT-PCR法检测人胃成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达,免疫细胞荧光染色法检测人胃成纤维细胞CTGF蛋白表达情况。[结果]人胃成纤维细胞培养成功传代,表现为长梭形或星形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞波形蛋白阳性,角蛋白阴性。RT-PCR法与免疫细胞荧光染色法证实体外培养的人胃纤维细胞表达CTGF。[结论]组织块法培养的人胃成纤维细胞可在体外稳定培养、传代,人胃成纤维细胞能合成CTGF。     

人肺癌组织中富含酪氨酸61和结缔组织生长因子的表达

目的:研究人肺癌组织中富含酪氨酸61(CYR61)和结缔组织生长因子(CTGF)的基因表达及其与临床参数的关系.方法:采用实时定量PCR及免疫组织化学技术对60例肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常肺组织CYR61和CTGF基因mRNA表达水平和蛋白表达进行测定,并分析二者的表达与临床参数的关系.结果:肺癌组织中CYR61和CTGF mRNA表达水平和蛋白阳性表达率均低于癌旁正常组织(P均＜0.05).肺癌组织中CYR61和CTGF mRNA的表达水平与患者的病理类型、病理分级、淋巴结转移、吸烟及家族史等临床参数有关(P＜0.05);肺癌组织中CYR61和CTGF mRNA表达水平呈正相关(r=0.604;P=0.000).多元回归分析:病理类型和年龄对CYR61表达有重要影响,肿瘤的位置、CYR61表达和性别对肺癌组织中的CTGF表达有重要影响.结论:CYR61和CTGF单种基因或两者相互作用对肺癌的发展起重要作用,其表达的蛋白产物可作为临床干预治疗的重要靶蛋白.     

CTGF shRNA对肝星状细胞细胞因子及细胞外基质表达的影响

目的：研究结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肝星状细胞（HSC-T6）中TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因表达及细胞外基质分泌的影响。方法：将已构建并筛选有效含绿色荧光蛋白（EGFP）的CTGFshRNA质粒以转染试剂Metafectene转染HSC-T6，另设空质粒组、只加Metafectene组及空白对照组，24h及48h后，用RT-PCR法检测各组细胞中TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达；放免法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量；流式细胞仪分析转染效率。结果：CTGFshRNA质粒在肝星状细胞的转染效率24h、48h分别为(60±5)％、(42±3)％；与空白对照组相比，空质粒组、脂质体组对基因表达及细胞外基质的分泌均无影响，而CTGFshRNA能明显抑制CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达，降低上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量（P<0.01或P<0.05），而对TGF-β1的基因表达则无影响。结论：CTGFshRNA可明显抑制肝星状细胞CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因表达及细胞外基质的分泌。     

Connective Tissue Growth Factor Expression in Rabbit Corneal Fibroblast and Its Effect on Fibroblast Proliferation In Vitro

Connective tissue growth factor (CTGF) takespart in chemotactic,mitogenic,cell matrix inducingevents and scar formation.CTGF can activate andregulate the process that concerns with wound repairand regeneration.Itcan promote fibroblastprolifera-tion and extracellular matrix synthesis and secretion,stimulate vascular endothelial cell regeneration andneovascularization.CTGF is involved in many patho-genesis,such as dermatosclerosis,breasttumor infil-tration and metastasis,proliferating nephri…