含胎牛血清胶原酶消化法培养兔成骨细胞

背景:成骨细胞原代培养技术已经很成熟,然而各种消化酶单纯作用于原代组织时对成骨细胞膜蛋白有一定影响。目的:为尽可能避免酶对细胞的损害,用含胎牛血清的胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,进行体外成骨细胞培养,观察加入胎牛血清后胶原酶对成骨细胞消化的效果。设计:对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室。材料:实验于2004-03/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室完成。妊娠28d日本大耳白种孕兔2只。方法:将同一个批号的Ⅰ型胶原酶分别用含体积分数为0.15胎牛血清的培养基和DMEM溶液配制成0.1%的含胎牛血清的胶原酶和0.1%不含血清的胶原酶,分别作为实验组和对照组的酶消化液A液和B液。妊娠28d的孕兔,无菌条件下剖腹取出胎兔,然后取胎兔的颅盖骨,剔净、漂洗、剪碎。实验组和对照组分别加5mL37℃的A液和B液消化,两组均用含体积分数为0.15胎牛血清的培养液分别成梯度稀释为0倍、1倍、2倍和4倍后继续消化-培养成骨细胞。锥虫蓝染色测定细胞的存活率,细胞内碱性磷酸酶染色鉴定和测定成骨细胞的纯度,显微镜下观察细胞生长情况。主要观察指标:①用锥虫蓝染色来检测两组细胞的存活率。②以细胞内碱性磷酸酶染色来检测两组细胞的纯度。③用显微镜观察细胞形态来区别两组细胞的生长情况。结果:①细胞锥虫蓝染色结果:通过记数计算,实验组拒染率高达98%,细胞存活率高;对照组拒染率也高达95%,细胞存活率也较高。②细胞内碱性磷酸酶染色结果:实验组碱性磷酸酶染色阳性区域不少于95%,细胞纯度高;但对照组碱性磷酸酶染色阳性区域不超过75%细胞纯度较低。③显微镜下观察结果:实验组细胞饱满凸起,有立体感,细胞生长旺盛,营养充足;而对照组细胞凸起不明显,立体感较差,细胞生长营养较实验组差。结论:用含胎牛血清胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,培养出的成骨细胞具有典型的成骨细胞特征,且成分单一,存活率高。     

滋髓生血胶囊治疗慢性再生障碍性贫血

目的:探讨滋髓生血胶囊治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效。方法:64例慢性再生障碍性贫血患者,根据随机数字法,分为对照组(环孢菌素A及安雄治疗)和观察组(对照组治疗的基础上,加用滋髓生血胶囊),每组各32例,观察和比较两组临床疗效、治疗前后两组血红蛋白(Hb),白细胞(WBC),血小板(PLT)变化情况,以及治疗期间两组不良反应。结果:与对照组相比,观察组治疗的总有效率明显提高(81.25%VS 56.25%,P0.05);与对照组相比,观察组中医证候的总有效率明显提高(96.875%VS 78.125%,P0.05);与对照组相比,观察组治疗后Hb(80.32±21.27 VS 69.78±20.13)g·L-1,WBC(3.92±1.11 VS 3.14±1.08)×109/L,PLT(46.37±14.32 VS 31.08±13.82)×109/L水平显著提高(P0.05);与对照组相比,观察组多毛症(6.25%VS 28.125%),手颤(12.50%VS 37.50%),牙龈增生(6.25%VS 25.00%)等并发症的发生率显著降低(P0.05)。结论:滋髓生血胶囊治疗慢性再生障碍性贫血的疗效显著、不良反应少,明显改善患者的血象指标,值得临床推广。     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓神经组织损伤的早期保护作用

目的 探讨脊髓损伤后,联合应用胚胎脊髓（FSC）移植和外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对损伤脊髓组织早期Ca^2＋、Mg^2＋的影响.方法利用Wistar大鼠建立脊髓损伤模型;造模后,A组经蛛网膜下腔导管注入5 ml FSC细胞悬液;B组注入20 μl bFGF与FSC细胞悬液;C组（对照组）不做处理.术后6 h、24 h取A组、B组和C组动物损伤区脊髓组织测定水和Ca^2＋、Mg^2＋含量;术后5 d取损伤脊髓组织电镜下观察结构变化.结果 C组损伤区脊髓组织水含量增多,Ca^2＋水平升高,Mg^2＋水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变严重;A组和B组上述变化均较C组改善.结论脊髓损伤后应用FSC移植和bFGF可减轻离子失衡,从而对继发性损害有抑制作用.     

缺氧条件下骨肉瘤MG-63细胞中TG2通过线粒体途径调节细胞凋亡的机制

目的探讨缺氧条件下TG2在骨肉瘤MG-63细胞凋亡中的作用以及TG2通过阻止细胞色素C的释放和调节Caspase-3的表达及活性抑制细胞凋亡的机制。方法建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,设立四组:(1)常氧组;(2)单纯缺氧组;(3)对照si RNA缺氧组;(4)TG2 si RNA缺氧组。观察各组在缺氧培养不同时相(6、12、24、48、72 h)骨肉瘤MG-63细胞TG2、Caspase-3表达、胞核和胞质细胞色素C的变化以及细胞凋亡率。结果与常氧组比较,单纯缺氧组及对照si RNA缺氧组的TG2活性、m RNA及蛋白表达水平明显增强(P<0.01),且随缺氧时间延长明显升高;Caspase-3活性未见明显增加,而Caspase-3及细胞质内细胞色素C蛋白的表达水平和细胞凋亡率轻度增加。与前三组比较,在TG2 si RNA缺氧组,当通过转染TG2 si RNA抑制TG2的表达时,Caspase-3的活性及胞质内细胞色素C蛋白表达水平明显增强(P<0.01);细胞凋亡率也显著增加(P<0.01)。结论缺氧条件下,MG-63骨肉瘤细胞TG2表达增强,并且可以阻止细胞核内细胞色素C向胞质释放,从而降低Caspase-3的表达及活性,抑制肿瘤细胞的凋亡。     

超低频电磁场对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的:研究超低频电磁场对硝普钠诱导的SD大鼠肋骨骨骺软骨细胞凋亡的影响。方法:不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡,检测不同时间软骨细胞半数致死量(LD50)的硝普钠浓度;观察超低频电磁场对软骨细胞凋亡的影响。结果:半数软骨细胞致死的硝普钠浓度呈时间依赖性下降;经超低频电磁场和硝普钠同时作用后的细胞凋亡率明显低于单纯硝普钠作用的细胞凋亡率(P<0.05);单纯硝普钠诱导的细胞在超微结构上有典型的凋亡改变,超低频电磁场能在一定程度上恢复软骨细胞的正常结构。结论:超低频电磁场能抑制硝普钠诱导体外培养的大鼠软骨细胞的凋亡。     

含胎牛血清胶原酶消化法培养兔成骨细胞(英文)

背景:成骨细胞原代培养技术已经很成熟,然而各种消化酶单纯作用于原代组织时对成骨细胞膜蛋白有一定影响。目的:为尽可能避免酶对细胞的损害,用含胎牛血清的胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,进行体外成骨细胞培养,观察加入胎牛血清后胶原酶对成骨细胞消化的效果。设计:对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室。材料:实验于2004-03/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室完成。妊娠28d日本大耳白种孕兔2只。方法:将同一个批号的Ⅰ型胶原酶分别用含体积分数为0.15胎牛血清的培养基和DMEM溶液配制成0.1%的含胎牛血清的胶原酶和0.1%不含血清的胶原酶,分别作为实验组和对照组的酶消化液A液和B液。妊娠28d的孕兔,无菌条件下剖腹取出胎兔,然后取胎兔的颅盖骨,剔净、漂洗、剪碎。实验组和对照组分别加5mL37℃的A液和B液消化,两组均用含体积分数为0.15胎牛血清的培养液分别成梯度稀释为0倍、1倍、2倍和4倍后继续消化-培养成骨细胞。锥虫蓝染色测定细胞的存活率,细胞内碱性磷酸酶染色鉴定和测定成骨细胞的纯度,显微镜下观察细胞生长情况。主要观察指标:①用锥虫蓝染色来检测两组细胞的存活率。②以细胞内碱性磷酸酶染色来检测两组细胞的纯度。③用显微镜观察细胞形态来区别两组细胞的生长情况。结果:①细胞锥虫蓝染色结果:通过记数计算,实验组拒染率高达98%,细胞存活率高;对照组拒染率也高达95%,细胞存活率也较高。②细胞内碱性磷酸酶染色结果:实验组碱性磷酸酶染色阳性区域不少于95%,细胞纯度高;但对照组碱性磷酸酶染色阳性区域不超过75%细胞纯度较低。③显微镜下观察结果:实验组细胞饱满凸起,有立体感,细胞生长旺盛,营养充足;而对照组细胞凸起不明显,立体感较差,细胞生长营养较?     

体外骨髓基质干细胞中腺病毒介导的胶质细胞源性神经营养因子基因的表达及其生物学活性

背景：骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)是外源性目的基因的良好靶细胞，在脊髓损伤的修复中具有良好的应用前景。目的：观察重组腺病毒介导的胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)基因在体外培养的骨髓基质干细胞中的表达，并探讨其生物学活性。设计：以细胞为研究对象，对照观察性研究。单位：一所大学医院骨科实验室。材料：实验于2004-03／06在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成、SD大鼠24只，雌雄不限，体质量(180&;#177;20)g。干预：用重组腺病毒载体Adv—GDNF感染体外培养的BMSCs．并与脊髓背根神经节共培养。免疫荧光化学的方法检测BMSCs中的GDNF的表达，提取细胞总RNA进行RT—PCR扩增GDNF基因．应用ELISA方法检测其培养上清中的GDNF含量，并通过与脊髓背根神经节共培养观测GDNF的活性。主要观察指标：主要结局：①RT-PCR。②免疫荧光结果。③GDNF的体外活性。次要结局：①BMSCs的培养与鉴定。②ELISA检测蛋白表达与时间的关系。结果：免疫荧光显示Adv-GDNF感染BMSCs 48h后即有GDNF的表达．体外培养的BMSCs经Adv-GDNF转染后有GDNF的转录．其培养上清应用ELISA方法分析．在感染24h岳即有GDNF的表达．并可持续5～7d的高峰Adv—GDNF感染的BMSCs的培养液上清可以促进脊髓背根神经节大量轴突的生长。结论：Adv—GDNF基因可以在BMSCs中稳定、高效表达．其表达的GDNF具有促进轴突生长的活性，为GDNF基冈治疗脊髓损伤的研究奠定了基础。     

脊柱侧弯矫形术前自身悬吊牵引的应用研究

[目的]研究自身悬吊牵引对脊柱侧弯术前辅助治疗的可行性。[方法]将我院诊治的120例脊柱侧弯病人随机分为实验组与对照组各60例。实验组利用病人自身的重力进行自身悬吊牵引,对照组病人在牵引床上行常规头盆牵引。[结果]两组牵引前后的X光片Cobb角数据经统计学比较无统计学意义(P>0.05)。[结论]自身悬吊牵引是脊柱侧弯术前护理简单、方便、经济、可靠的一种辅助治疗方法。     

脊髓损伤后早期应用FK506抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达及细胞凋亡的实验研究

目的:观察FK506对脊髓损伤大鼠后肢运动功能及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达和细胞凋亡的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠60只,采用Allen′s法建立脊髓损伤模型后,随机分为应用FK506治疗组(n=30)和应用生理盐水对照组(n=30),于伤后不同时间点取材,行苏木精-伊红(HE)染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组织化学染色检测caspase-3的表达,原位末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡,同时以BBB评分法评价后肢运动功能恢复情况。结果:HE染色显示治疗组脊髓组织病理学改变明显轻于对照组;治疗组和对照组均存在caspase-3的表达和神经细胞凋亡,两者都于伤后24h达高峰,但治疗组较对照组明显减少(P<0.01,P<0.05);治疗组后肢运动功能评分显著优于对照组(P<0.05)。结论:FK506能抑制脊髓损伤后caspase-3的表达和神经细胞凋亡,从而减轻继发性损害,促进脊髓功能恢复。