载紫杉醇的大黄酸偶联物纳米胶束的制备及初步评价

目的制备载紫杉醇的D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(D-α-tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate,TPGS)修饰的羧甲基壳聚糖-大黄酸偶联物(PTX/TPGS-CR)纳米胶束,并对其进行初步评价。方法采用透析法,以载药量、包封率及粒径为指标,通过单因素考察优化PTX/TPGS-CR纳米胶束的制备工艺并进行验证。以溶血实验及血管刺激性实验初步考察PTX/TPGS-CR纳米胶束的安全性。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)法考察PTX/TPGS-CR纳米胶束对Hela细胞的毒性。通过激光扫描共聚焦显微镜定性和流式细胞仪定量考察Hela细胞对PTX/TPGS-CR纳米胶束的摄取情况。结果制备工艺优化后制得的PTX/TPGS-CR纳米胶束粒径为(197.3±4.4)nm,PDI为(0.131±0.021),电位为(-31.8±0.5)mV,载药量为(48.20±3.03)%,包封率为(87.26±4.91)%。溶血实验结果表明,其溶血率低于1.71%;血管静脉注射无明显刺激性。其对Hela细胞的杀伤作用具有浓度和时间依赖性,能被Hela细胞高效摄取。结论PTX/TPGS-CR纳米胶束载药量和包封率高,安全性好,其体外抗肿瘤活性稍优于Taxol?。     

HPLC法测定夏黄颗粒中芦荟大黄素、大黄酸、厚朴酚、和厚朴酚、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚

目的建立HPLC法同时测定夏黄颗粒中芦荟大黄素、大黄酸、厚朴酚、和厚朴酚、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。方法采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长254 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温30℃;进样体积20μL。结果芦荟大黄素、大黄酸、厚朴酚、和厚朴酚、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在23.8~238.4、22.8~228.0、25.8~228.0、78.7~787.2、16.7~167.2、16.6~166.4、17.5~175.2μg线性关系良好;平均加样回收率分别为99.78%、99.36%、99.71%、98.65%、99.37%、99.42%、98.78%,RSD值分别为1.88%、2.05%、2.03%、2.01%、2.56%、2.35%、2.17%。结论本法快速、简便、准确,可用于夏黄颗粒的质量控制。     

大黄及其蒽醌对自身免疫性疾病治疗的研究进展

大黄始载于《神农本草经》,药理活性广泛。自身免疫性疾病是一类因机体免疫耐受功能受损而致免疫细胞及其成分对自身组织结构和功能破坏的疾病,包括动脉粥样硬化、多发性硬化、痛风、类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺炎、溃疡性结肠炎、1型糖尿病、IgA肾病等。近年临床和实验研究显示,大黄及其蒽醌类成分对自身免疫性疾病具有良好的治疗潜力和开发前景。该文以中医药理论为指导,综述了大黄及其主要活性成分蒽醌对自身免疫性疾病的治疗和干预作用并对其作用机制进行解析,还针对大黄及其蒽醌目前研究存在的问题提出见解,旨在为大黄及其蒽醌在自身免疫性疾病的临床治疗和科学研究方面提供参考。     

大黄酸PEG-PCL-PEI纳米粒的制备及体外评价

合成聚乙二醇-聚己内酯-聚乙烯亚胺(PEG-PCL-PEI)三嵌段聚合物载体材料,制备包载大黄酸(RH)的PEGPCL-PEI纳米粒(PPP-RH-NPS),并评价其理化性质和体外生物学特性。通过开环聚合和麦克尔加成反应合成得到PEG-PCL-PEI聚合物,相对分子质量为9.5×10~3,临界胶束浓度为0.723 nmol·L~(-1)。包载RH制备得到PPP-RH-NPS,外观浅黄、乳光明显,透射电镜观察纳米粒分散均匀圆整无团聚,粒径为(118.3±3.6)nm,PDI为(0.19±0.08),Zeta电位为(6.3±1.5)mV,包封率为(93.64±5.28)%,载药量为(8.57±0.53)%。透析法考察PPP-RH-NPS体外释药特征,48 h内累积释放率为75.92%,释药曲线符合Higuchi模型方程:Q=0.121 6t~(1/2)+0.069 5(R~2=0.887 4),呈缓释特性。选用兔红细胞考察其溶血率,MTT法评价其对HK-2细胞的生物安全性,在0~0.05 mmol·L~(-1)不会引起红细胞溶血和细胞毒性。流式细胞仪考察其摄取效率,PPP-RH-NPS可被细胞迅速内吞,摄取效率高,30 min内摄取完全,经激光共聚焦显微镜观察,PPP-RH-NPS能够从溶酶体进入细胞质,具有溶酶体逃逸特性。因此,该研究成功合成PEG-PCLPEI聚合物和制备得到PPP-RH-NPS,粒径分布均匀,包封率及载药量较高,摄取迅速,具有缓释特征、溶酶体逃逸特性、优良的生物安全性,是一种良好研究前景的新型纳米制剂。     

大黄酸通过抑制CDK9/STAT3途径防治低氧性肺动脉高压

目的：探究中药单体大黄酸对低氧性肺动脉高压（HPH）的影响及其作用机制。方法：以SPF级SD大鼠为研究对象,设置常氧组（N）、低氧组（H）、低氧+大黄酸组（HR）。Western blot法检测每组大鼠体内提取的肺组织匀浆中p-CDK9、CDK9、p-STAT3/STAT3、PCNA、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3（CC-3）蛋白表达差异。以右心导管法插管检测平均肺动脉压（mPAP）评估大鼠的血流动力学情况,称重法检测右心肥厚程度,HE染色后观察血管形态以评估大鼠的肺血管重塑情况。结果：与N组比,H组肺匀浆中p-CDK9、CDK9、p-STAT3/STAT3、PCNA、Bcl-2 蛋白表达均上调,而Bax、Caspase-3、CC-3 蛋白表达下调（均P ＜0.05）,H组大鼠的mPAP及右心肥厚指数显著上升（均P ＜0.05）,管壁面积（WA）/管总面积（TA）明显增加（P ＜0.05）,提示大鼠的肺血管重塑程度明显加重;与H组比,HR组肺匀浆中p-CDK9、CDK9、p-STAT3/STAT3、PCNA、Bcl-2蛋白表达均下调,而Bax、Caspase-3、CC-3 蛋白表达上调（均P ＜0.05）,mPAP及右心肥厚指数显著降低（均P ＜0.05）,WA/TA明显降低（P ＜0.05）,提示肺血管重塑改善。结论：大黄酸可能通过抑制CDK9的表达及磷酸化,抑制STAT3的磷酸化,缓解低氧诱导的大鼠肺动脉高压,改善肺血管重塑和右心肥厚。     

赤芍、大黄药对提取物中丹皮酚和大黄酸的组织分布研究

目的:建立同时测定大鼠组织中丹皮酚和大黄酸含量的高效液相色谱法。方法:采用Phenomsil BDS C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸(37∶63)为流动相,流速1.0 m L·min-1,以橙黄决明素为内标,在274 nm下进行检测。结果:丹皮酚的线性范围为Y=-0.055+0.03X(r=0.993 2),日内和日间的RSD均4.1%;大黄酸的线性范围为Y=-0.152+0.014X(r=0.993 5),日内和日间的RSD均4.9%。组织样品的稳定性符合要求。结论:所建立的大鼠组织中丹皮酚和大黄酸HPLC测定方法,适用于大鼠体内赤芍、大黄药对的组织分布研究。     

基于支持向量机的5种大黄苷元治疗脑缺血的配伍研究

目的筛选大黄中5种能够治疗脑缺血的大黄苷元(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)的最佳配伍。方法采用均匀设计法将大鼠分为14组,每组15只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,以神经功能症状评分、脑梗死面积为指标,探讨不同配伍的大黄苷元对脑缺血大鼠的影响,同时基于支持向量机(SVM)建立大黄苷元药效预测模型。结果经SVM回归分析,得到大黄苷元最优配伍为芦荟大黄素6.653 4 mg/kg、大黄酸26.000 8 mg/kg、大黄素11.004 2 mg/kg、大黄酚3.841 4 mg/kg和大黄素甲醚3.862 0 mg/kg。结论不同配比的大黄苷元能有效改善大鼠脑缺血的各个指标,采用均匀设计结合SVM的模拟预测方法优选出了5种大黄苷元组分的最佳配比。     

Anti‐fibrotic and Anti‐tumorigenic Effects of Rhein,a Natural Anthraquinone Derivative,in Mammalian Stellate and Carcinoma Cells

Anthraquinone compounds have been recognized to possess antiinflammatory, anti‐fibrotic and anti‐tumour properties and thus applied in human and veterinary therapeutics as active substances of medicinal products. Amongst the anthraquinones isolated from Rheum palmatum, also known as da‐huang, rhein was detected as one of the highest metabolite contents in the bloodstream of mammals. The biological activities of rhein therefore deserve detailed investigation. In this study, we aimed to delineate the mechanism of inhibitory actions of rhein on fibrotic and tumorigenic processes by means of various biochemical assays, such as immunofluorescent staining, real‐time polymerase chain reaction (PCR) and western blotting analyses in rat pancreatic stellate cells (LTC‐14), human pancreatic ductal adenocarcinoma cells (PANC‐1) and human colon carcinoma cells (SW480 and SW620). Our results demonstrated that the application of rhein notably suppressed the mRNA and protein levels of various fibrotic and tumorigenic mediators including alpha‐smooth muscle actin, type I collagen, fibronectin, N‐cadherin and matrix metalloproteinases in the testing mammalian cells. The mechanism of the suppressive actions of rhein was associated with the modulation of the sonic hedgehog and serine‐threonine kinase signalling pathways. In conclusion, we suggest that rhein may serve as a therapeutic or an adjuvant agent in anti‐fibrotic and anti‐tumorigenic approaches. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化大鼠Smad2、Smad3表达的影响

目的探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠Smad2、Smad3表达的影响。方法采用胆总管结扎(BDL)的手术方法建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,将大鼠随机分为5组:对照组、模型组、赖氨酸组、低剂量RHL组[35mg/(kg·d)]、高剂量RHL组[70mg/(kg·d)]。应用实时荧光定量PCR的方法检测大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3mRNA的相对表达量。Western blot的方法检测Smad2、Smad3蛋白时相对表达量的变化。结果与模型组大鼠比较,经RHL治疗后胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3mRNA相对表达量降低,差异有统计学意义(P0.05);与模型组大鼠相比,经RHL治疗后胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3蛋白的相对表达量降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 RHL能够抑制肝纤维化的发展,可能是通过抑制Smad2、Smad3mRNA和蛋白的表达,阻断TGF-β1/Smads信号传导通路实现的。