HPLC测定温肾降浊散中大黄酸、大黄素及大黄酚的含量

目的:建立温肾降浊散中大黄酸、大黄素及大黄酚的含量测定方法。方法:采用高效色谱法,ANGLA Promosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃,流动相乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长224 nm,进样量10μL。结果:在上述色谱条件下,大黄酸、大黄素及大黄酚之间有良好的分离度,大黄酸线性范围0.757 2~3.786 0μg(r=0.999 4),大黄素线性范围0.347 6~1.738 0μg(r=0.999 3),大黄酚线性范围1.731~8.656μg(r=0.999 2),平均回收率分别为101.7%,102.6%,101.1%,RSD分别为2.9%,2.3%,1.9%。结论:该方法简便、准确,重复性好,可为温肾降浊散的质量控制提供可借鉴的分析方法。     

大黄酸人工抗原合成及免疫原性鉴定

大黄药理作用广泛,是临床常用中药材之一.大黄酸是其主要活性成分,大黄酸的含量是大黄质量控制的主要指标之一.目前对大黄酸的检测主要是通过仪器分析手段,如高效液相色谱法,但是仪器分析通常操作繁琐、耗时长、通量小且仪器设备昂贵.与之相比,酶联免疫检测法(ELISA)则具有灵敏度高、操作简单、设备仪器需求少、通量高等优点,是实现中药材快速检测的有效手段之一.该研究制备大黄酸(rhein)人工抗原及血清,为之后大黄酸单克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附检测方法提供基础.通过碳二亚胺法活化大黄酸,分别与牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原及包被抗原;通过紫外分光光度法检测人工抗原的半抗原与载体蛋白偶联比,分别为4.0∶1(rhein-BSA)和2.6∶1 (rhein-OVA).用免疫原免疫Bal b/c雌性小鼠,制备抗血清,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗血清效价及特异性.结果表明血清效价均高于8 000,特异性强,免疫原性良好.     

酒制对大黄中游离蒽醌在大鼠体内组织分布的影响

传统炮制理论指导思想"酒制升提",大黄经过炮制成为饮片酒大黄治疗上焦病症,如目赤肿痛,口舌生疮等疾病,炮制前后大黄药性的改变使得其临床应用侧重点不同,为研究中药炮制理论的科学内涵,该文同时建立测定大鼠组织中芦荟大黄素、大黄酸和大黄素的液-质联用方法,通过分别灌胃给予SD大鼠大黄生品和酒制品水煎液,采用LC-MS测定组织(心、肺、脑、肝、肾)中芦荟大黄素、大黄酸和大黄素的含量,探讨酒制对大黄中游离蒽醌成分在大鼠体内组织分布的影响。试验结果显示大黄酒制能明显改变芦荟大黄素、大黄酸和大黄素在大鼠体内的分布,其中各成分在心与肺组织中的分布增加,在肝和肾中的分布与生品组相比变化不大,而在脑中没有检测到3种成分,提示芦荟大黄素、大黄酸、大黄素不能透过血脑屏障。酒制对大黄中游离蒽醌成分在大鼠体内的药物组织分布有较大影响,这也验证了传统中医理论,酒大黄多用于治疗上焦病症,该研究结果为探讨大黄炮制机制提供了实验依据。     

赖氨大黄酸与顺铂联合对人肺癌A549细胞系增殖和凋亡的影响简

 目的 研究赖氨大黄酸（RHL）、顺铂和两者联合对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制,为RHL联合顺铂抗肺癌的临床实验研究提供理论依据。方法 肺癌细胞株A549随机分为对照组、顺铂组、RHL组和顺铂联合RHL组,用MTT法和流式细胞术分别检测细胞48 h增殖和凋亡。Western blot 法检测细胞48h后凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达。结果 细胞培养48 h后,顺铂组和RHL组的细胞增殖受到一定的抑制并有细胞凋亡发生,但两药联合后的增殖抑制作用和凋亡诱导作用显著高于单用顺铂和RHL组(P<0.05)。顺铂和RHL均能上调caspase-3、caspase-7和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的切割片断蛋白表达,但两药联合后caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达进一步增高(P<0.05),并显著下调Bcl-2蛋白的表达水平,上调Bax蛋白的表达水平,同时RHL还能降低顺铂上调的ERK蛋白磷酸化。结论 RHL能够通过抑制顺铂对ERK的激活、上调caspase-3、caspase-7和PARP的切割片断蛋白表达,增强顺铂对肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。     

NO供体型大黄酸衍生物的合成及抗肿瘤活性

以大黄酸为原料,利用其羧基通过不同的连接臂与呋咱氮氧化合物偶联,得到7个NO供体型大黄酸衍生物,其结构经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证。采用MTT法测试了目标化合物对人肝癌细胞HepG2、Bel-7402,人结肠癌细胞HCT116,人骨肉瘤细胞U2OS,耐药细胞Bel-7402/5-FU及正常肝细胞LO2的体外抗细胞增殖活性。结果显示,所有目标化合物对受试的肿瘤细胞和耐药细胞均具有较强的增殖抑制活性,其中化合物4g对人肝癌细胞HepG2、Bel-7402,人骨肉瘤细胞U2OS及耐药细胞Bel-7402/5-FU具有强的增殖抑制活性,而且对正常细胞影响很小,表现出较好的选择性。采用Griess法测定了目标化合物4g在肿瘤细胞HepG2中对NO释放的影响。结果表明,化合物4g在细胞中能释放高浓度的NO,其抗肿瘤作用可能与NO的释放相关。NO清除剂验证实验表明,化合物4g的抗肿瘤活性部分来自于NO的释放。     

大黄酸对小鼠非酒精性脂肪肝病的治疗效果分析

目的:探讨脂肪相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)及其抑制剂大黄酸(rhein)在非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的作用。方法:采用高脂饲料喂养的方法构建NAFLD小鼠模型,利用灌胃的方式使用rhein进行治疗。为评估造模是否成功及药物治疗效果,分别采用H-E染色、油红染色确定小鼠肝细胞中脂肪沉积的情况,采用Western blot检测FTO蛋白在小鼠肝脏组织中的变化情况。结果:与普饲组相比,高脂组小鼠的摄食量明显降低(P<0.01),高脂+rhein组小鼠的体质量明显低于高脂组(P<0.05)。与高脂组相比,高脂+rhein组小鼠肝细胞中脂肪空泡明显减少,高脂组小鼠肝细胞中脂肪沉积明显多于普饲组,rhein灌胃的小鼠肝细胞中脂肪沉积明显减少。与高脂组相比,高脂+rhein组小鼠的脂肪代谢明显恢复。FTO蛋白在高脂组小鼠的肝组织中显著增多,而在高脂+rhein组小鼠肝组织中FTO蛋白的表达量明显回落。结论:Rhein可减少NAFLD小鼠模型中肝组织FTO蛋白的表达,有治疗NAFLD的潜能。     

HPLC同时测定连花清瘟胶囊中绿原酸、连翘苷、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量

目的建立HPLC同时测定连花清瘟胶囊中的绿原酸、连翘苷、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量。方法采用Agilentc18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈－0．1％磷酸溶液,梯度洗脱（0min→10min→20min→30min→45min±53min,乙腈：10％±10％→20％→30％±68％→75％）,流速：1．0mL·min^-1,检测波长：0～15min为327nm,15～35min为205nm,35-43min为230nm,43～48min为221nm,48～55min为224nm;柱温32℃。结果可在55min内完成对绿原酸、连翘苷、大黄酸、大黄素和大黄酚的色谱分析,主成分峰与相邻的色谱峰之间分离度均〉2．0;各测定成分的线性范围分别为0．4445～7．112肛g（,=0．9996）,0．1678-2．684μg（r=0．9999）,0．031O～0．4963μg（r=0．9995）,0．0315～0．504μg（F0．9997）,0．0655～1．048μg（r=0．9999）;平均加样回收率（n=9）分别为102．2％（RSD=0．5％）,101．0％（RSD=0．8％）,98．32％（RSD=0．5％）,95．83％（RSD=0．6％1,102．65％（RSD=0.3％）。结论本方法简便,准确,可用于评价莲花清瘟胶囊的质量。     

大黄黄芩药对配伍在内毒素血症大鼠体内的药动学比较研究

目的:研究大黄、黄芩单用及配伍后水煎液中大黄酸和黄芩苷在内毒素血症大鼠体内的药动学差异。方法:采用尾静脉注射内毒素(LPS)5 mg/kg制备大鼠内毒素血症模型,单次灌胃大黄水煎液(1.54 g/kg)、黄芩水煎液(0.77 g/kg)及大黄-黄芩水煎液(2.31 g/kg)后不同时间点采血,分离血清,高效液相色谱-荧光(HPLC-FLD)法测定大黄酸血药浓度,高相液相色谱-质谱(HPLC-MS)法测定黄芩苷血药浓度,以Kinetica软件计算药动学参数并进行比较分析。结果:黄芩苷在单味药及药对中,吸收均呈现明显双峰现象。与单味药给药组比较,大黄-黄芩配伍应用后,药对中大黄酸、黄芩苷Cmax、AUC均有增加,T1/2和MRT均有所延长。结论:大黄-黄芩配伍后大黄酸与黄芩苷消除减缓,生物利用度均有所增加;配伍可能通过提高有效成分的体内含量及延长其作用时间而达到协同增效的作用。     

基于近红外光谱技术的复方大黄汤浓缩液同步快速检测

目的:采用近红外光谱技术检测复方大黄汤浓缩过程中浓缩液密度、含固量、大黄酸和甘草酸质量浓度4个指标,建立该复方浓缩过程中多项指标的快速定量分析方法。方法:运用近红外光纤透射光谱法对复方大黄汤浓缩液进行快速测定,通过高效液相色谱法(HPLC)测定大黄酸和甘草酸的含量,选择51个样品进行内部交叉验证,采用偏最小二乘法回归分别建立近红外光谱与密度、含固量和指标成分含量之间的校正模型,应用采集的10个未知浓缩液样品进行外部验证预测。结果:复方大黄汤浓缩液近红外光谱与密度、含固量、大黄酸及甘草酸质量浓度的外部验证复相关系数(R2)分别为0.9959,0.9996,0.9970和0.9922,预测均方根误差(RMSEP)分别为2.50×10-3,0.17,7.57,67.10。结论:近红外光谱技术适用于复方大黄汤浓缩液的评价指标测定,且具有分析快速、简便、稳定可靠的特点。     

小儿导赤片质量控制方法改进研究

目的建立小儿导赤片中大黄、栀子含量测定的高效液相色谱(HPLC)法及栀子的薄层色谱(TLC)鉴别方法。方法用TLC法和HPLC法对小儿导赤片中大黄及栀子进行定性、定量分析。结果 TLC色谱中,栀子苷和栀子对照药材斑点清晰。大黄素质量浓度的线性范围为8.096～104.48μg/mL(r=0.999 9),平均回收率为98.01%(RSD为1.25%);大黄酚质量浓度的线性范围为10.83～112.23μg/mL,r=0.999 9;芦荟大黄素的线性范围为8.12～89.90μg/mL,r=0.999 8;大黄酸的线性范围为9.96～89.48μg/mL,r=0.999 8;大黄素甲醚的线性范围为8.896～54.44μg/mL,r=0.999 7;栀子苷的线性范围为6.771～141.48μg/mL(r=1.000 0),平均回收率为99.04%(RSD为1.20)。结论定性鉴别方法专属、斑点清晰;含量测定方法可靠,重现性好。