鼠抗人S100A9 天然蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的:探索以白细胞为免疫原的鼠抗人白细胞天然蛋白单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs)制备与克隆筛选鉴定方法,制备鼠抗人S100A9 天然蛋白单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法:用健康人外周血白细胞免疫小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备mAbs,通过免疫细胞化学法对杂交瘤细胞进行非特异性阳性筛选,有限稀释法进行亚克隆,应用免疫沉淀鄄质谱法进行mAb 特异性鉴定,通过Western blot 进行细胞株筛选,小鼠体内诱生腹水法制备单抗,亲和层析法纯化,ELISA 间接法测定效价及亲和力,Western blot 进行特异性鉴定及交叉反应性分析,免疫组化染色人乳腺癌石蜡切片。结果:获得免疫细胞化学检测阳性多克隆细胞35 孔,分泌鼠抗人S100A9 蛋白单克隆抗体细胞株11 株,优选1 株制备腹水并纯化鉴定抗体,抗体效价为1 3.18 105 ,亚类为IgG1,轻链为kappa 链,抗体纯度达95%以上,亲和力常数3.54 108 L/ mol,与S100A8的交叉反应率为0.12%,与S100A12 和S100A13 几乎无交叉反应,组化染色识别人乳腺癌组织中的S100A9 蛋白。结论:成功制备鼠抗人S100A9 天然蛋白单克隆抗体,该单抗具有高效价、较高亲和力和高特异性,能为其应用于免疫组化检测S100A9蛋白的表达提供依据。     

蝎毒素对人T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞增殖的影响

目的 探讨蝎毒素BmK IA对人T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞增殖的影响并与IL-2对Jurkat E6-1细胞的作用进行对比.方法 不同浓度的BmK IA、IL-2分别作用48h,采用MTT法检测BmK IA、IL-2对细胞增殖的影响.结果 在一定范围内,随着BmKIA浓度的增加,细胞增殖率相应增加,当BmK IA浓度增加到10μg /L时,细胞的增殖率达峰值.同时,与IL-2相比,BmK IA具有用量微的特点.结论 BmK IA可促进T细胞的增殖,对免疫系统有一定的增强作用.     

安福雷颗粒剂对奶牛乳房炎主要致病菌的体外抑菌试验

目的：观察安福雷颗粒剂体外抑菌效果,为中药防治乳房炎提供实验依据。方法：采用琼脂平板扩散法（牛津杯法）,选用安福雷颗粒剂对奶牛乳房炎4种主要致病菌进行体外抑菌试验。结果：安福雷颗粒剂抑菌试验金黄色葡萄球菌的抑菌环直径为21.00mm,表皮葡萄球菌的抑菌环直径为26.52mm,停乳链球菌的抑菌环直径为17.68mm,大肠杆菌的抑菌环直径为11.31mm。结论：安福雷颗粒剂对奶牛乳房炎致病菌有较好的体外抑菌效果,尤其是革兰氏阳性菌,为中草药防治奶牛乳房炎提供了实验依据。     

低血糖生成指数食物InZone对代谢综合征者代谢性指标的影响

目的:观察低血糖生成指数营养补充剂InZone对代谢综合征者血糖、血脂指标的作用.方法:31例处于代谢综合征前期者,对其饮食和生活习惯不做任何干预,于饭前加服食品补充剂InZone.干预84 d,对受试者的血脂指标进行观测.分别于0 d、28 d、84 d测量其血脂的变化.结果:TC、HDL、LDL等血脂指标均得到改善(P＞0.05).结论:采用低血糖生成指数食品补充剂InZone与正常膳食混合后,可降低饮食的GI值、必需营养素得以且食物中营养素的配比合理,使人体血糖应答保持较低的水平,从而诱导较低的胰岛素水平,达到改善人体代谢,调节人体脂质代谢的作用.     

利用不同电泳技术对东亚蝎毒素ITX 蛋白组分分离的研究

目的 :初步建立蝎毒素ITX(Immunotoxin)蛋白组分的电泳分离方法和蛋白质组表达谱。 方法 :阴极电泳(T=18%,C=6%)对蝎毒进行分离,Bio-Rad Quantity-one电泳软件分析条带;双向电泳技术:第一向为固相pH梯度等电聚焦,第二向电泳为垂直平板SDS-PAGE(T=18%)。在以上过程中分别对上样方式、等电聚焦程序等条件进行优化控制,利用PDQ7.1软件分析获得二维凝胶图像。 结果 :阴极电泳图谱显示蝎毒素ITX由7个蛋白组分组成;二维凝胶图谱显示蝎毒素ITX包含相对分子质量相同(约为5.8×10³)而等电点不同9种蛋白组分,其中酸性蛋白质4种,碱性蛋白质5种。 结论 :通过各种条件的优化,初步建立了ITX的阴极电泳和双向电泳方法,获得了分辨率和重复性较好的阴极电泳图谱和二维凝胶图谱。     

炎症对肿瘤恶性生物学行为的影响

免疫系统一直被认为在延缓肿瘤生长、导致肿瘤消退方面起着重要的作用，如肿瘤在免疫功能低下的新生儿和老年人更为常见；肿瘤好发于免疫抑制的个体；肿瘤可出现自行消退等。然而，近年来一些重大的发现却使该传统观点有所改变：参与炎症反应、促进伤口愈合的免疫细胞竟然与肿瘤的恶化息息相关，     

生物样品中组织胺和去甲肾上腺素的同时测定

目的：建立生物样本中组织胺（Ｈｉｓｔ）和去甲肾上腺素（ＨＡ）的同时测定方法,探讨体内Ｈｉｓｔ和ＮＡ的代谢关系。方法：用高效液相色谱电化学检测器（ＨＰＬＣ／ＥＣＤ）、柱前衍生法定量分析生物样本中Ｈｉｓｔ和ＮＡ。结果：２０ｍｉｎ内可分离检测Ｈｉｓｔ和ＮＡ,线性范围为０．０１５～５０μｇ·Ｌ－１,最低检出限为１５ｎｇ·Ｌ－１,回收率为９５％,精密度为５．８０％～１１．１０％。结论：ＨＰＬＣ／ＥＣＤ法具有灵敏、稳定、特异性高等特点。两种指标在同一标准条件下检测结果显示,Ｈｉｓｔ和ＮＡ在体内的代谢变化关系具有相关性。     

人心肌特异性肌钙蛋白的提取与鉴定

目的从人心肌组织中提取和纯化心肌特异性肌钙蛋白,为建立心肌梗塞病人免疫诊断试剂准备抗原。方法取新鲜人心室肌组织经捣碎离心提取,ＤＥＡＥ５２柱层析纯化,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳鉴定。结果１００ｇ心室肌可提取３７ｍｇ纯品肌钙蛋白。结论本次提取的心肌特异性肌钙蛋白纯度较高,能作抗原使用。     

红岩草中三种成分的体外抑菌实验及组方优选研究

目的：通过红岩草中连苯三酚、氢醌和没食子酸甲酯等3种成分的体外抑菌作用,验证红岩草的抑菌活性,同时为其成分组方提供依据。方法：采用常量稀释法,测定连苯三酚、氢醌、没食子酸甲酯对导致奶牛乳房炎5种主要致病菌的体外抑菌效果;采用正交试验方法优选3种成分的最佳配比并对其进行验证。结果：连苯三酚对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌和停乳链球菌的最低抑菌浓度分别为160 mg.L-1、80 mg.L-1、1 280 mg.L-1、640 mg.L-1和640 mg.L-1,氢醌对5种细菌的最低抑菌浓度分别为640 mg.L-1、80 mg.L-1、〉1 280 mg.L-1、80 mg.L-1和80 mg.L-1,没食子酸甲酯对5种细菌的最低抑菌浓度分别为12 800 mg.L-1、〉1 280 mg.L-1、640 mg.L-1、〉1 280 mg.L-1和〉1 280 mg.L-1。正交试验结果直观分析显示连苯三酚、氢醌、没食子酸甲酯对于金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的抑菌效果为连苯三酚〉氢醌〉没食子酸甲酯;对于停乳链球菌的抑菌效果为氢醌〉没食子酸甲酯〉连苯三酚。方差分析显示,3种成分对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大肠杆菌,因素水平间存在显著性差异（P〈0.05）,而对于无乳链球菌和停乳链球菌,因素水平间无显著性差异。结论：氢醌对奶牛乳房炎主要致病菌有较好的体外抑菌作用,3种成分的最佳组方为A3B3C2。     

反相高效液相色谱法测定人血清中氯氮平含量

目的　探讨血清中氯氮平含量的测定方法。方法　以C18色谱柱、甲醇 -水 (80∶2 0 )、0 .1%三乙胺 (pH =7.75 )为流动相 ,在 40℃、2 30nm波长下分离、检测氯氮平 ,以安定做内标 ,内标法定量。结果　线性范围为 0～ 16 0 0ng·ml-1,r =0 .9998。氯氮平的相对回收率为99.85 %～ 10 1.2 0 %。三浓度的平均日内相对标准偏差 (RSD)为 2 .5 % ,平均日间RSD为 4.0 %。结论　本方法快速、简便、准确 ,可用于科研和临床工作中氯氮平血药浓度的快速检测