燕窝鉴别中的蛋白质电泳研究

目的：探讨SDS-PAGE和等电聚焦电泳应用于燕窝蛋白分离及燕窝鉴定中的可行性。方法：提取印尼燕窝、怀集燕窝及常作为伪品的明胶、银耳、猪皮的蛋白质,进行SDS-PAGE和等电聚焦电泳研究。结果：印尼燕窝与怀集燕窝在SDS-PAGE图谱上可见明显差异,而明胶、银耳和猪皮等伪品可见特征性蛋白条带。燕窝蛋白经等电聚焦电泳可见清晰的蛋白条带,且主要集中于酸性端。结论：SDS-PAGE和等电聚焦电泳均可获得燕窝蛋白质的特征性电泳图谱,用于鉴别不同品种燕窝及掺伪燕窝是可行的。     

燕窝鉴别中的蛋白质电泳研究

目的：探讨SDS-PAGE和等电聚焦电泳应用于燕窝蛋白分离及燕窝鉴定中的可行性。方法：提取印尼燕窝、怀集燕窝及常作为伪品的明胶、银耳、猪皮的蛋白质，进行SDS-PAGE和等电聚焦电泳研究。结果：印尼燕窝与怀集燕窝在SDS-PAGE图谱上可见明显差异，而明胶、银耳和猪皮等伪品可见特征性蛋白条带。燕窝蛋白经等电聚焦电泳可见清晰的蛋白条带，且主要集中于酸性端。结论：SDS-PAGE和等电聚焦电泳均可获得燕窝蛋白质的特征性电泳图谱，用于鉴别不同品种燕窝及掺伪燕窝是可行的。     

墓头回提取物作用白血病K562细胞蛋白双向电泳方法的建立

目的建立适用于体外培养的K562细胞总蛋白的双向电泳图谱,提高电泳分辨率和重复性,以进一步了解中药墓头回作用于白血病细胞的新机制。方法采用标准裂解法提取K562细胞总蛋白,后续进行丙酮沉淀和三氯乙酸/丙酮沉淀,分别比较一步裂解法所得蛋白和丙酮沉淀法、三氯乙酸/丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱,优选最佳的样品制备方法。此外在等电聚焦时,聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化。结果 丙酮沉淀法不仅能减少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱显示出更好的溶解性和重复性,在聚焦条件上对传统聚焦条件的优化使横向和纵向拖尾有明显改善,所得图谱蛋白点更清晰,分离更完全,能获得分辨率较高的双向电泳图谱。结论 在标准裂解液提取蛋白基础上结合丙酮沉淀法更适于制备K562细胞的双向电泳样品,等电聚焦(IEF)电泳时适当延长除盐时间能更有效的分离K562细胞全蛋白,而且后续实验证明此方法同样成功建立了墓头回作用白血病K562细胞蛋白和肿瘤组织蛋白2-DE图谱。     

双向电泳在大鼠脊髓的蛋白质组分析中的应用研究

目的 建立大鼠中枢神经系统双向电泳技术平台，从分子水平探索中枢神经系统损伤、修复的机制。方法以固相pH梯度等电聚焦为第一向和SDS均一胶T=12．5％、10％的水平电泳为第二向成功地得到了神经组织双向电泳图谱，并借助图像分析软件研究了双向电泳重复性，另外对胶的银染和脱色作了进一步改进。结果 获得了重复性较好的检测蛋白点的肽质指纹图。结论 本研究为大鼠中枢神经损伤、修复蛋白质组研究工具平台的建立奠定了基础。     

双向电泳-质谱法探索实验性重症肌无力大鼠疾病相关蛋白

目的:分离和鉴定实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清差异表达蛋白,寻找并比较疾病相关蛋白,以进一步阐明重症肌无力的发病机制。方法:采用二维蛋白电泳技术分离正常组和模型组大鼠血清差异表达蛋白,凝胶经银染显色后,Bio-Rad凝胶扫描仪扫描,Imagemaster图像软件分析,差异蛋白点用基质辅助激光解析电离-两级飞行时间串联质谱法进行鉴定。结果:通过双向电泳,建立血清蛋白质双向电泳图谱,重症肌无力组血清双向电泳图谱可见678个蛋白点,而正常对照组可见702个蛋白点。选取9个具有明显差异的蛋白点进行质谱鉴定,共鉴定出5种蛋白质。结论:正常组和模型组大鼠间存在一定的差异表达蛋白,该类蛋白为一些与机体免疫应答、信息调控相关的蛋白质。     

蝎皮蛋白质组分的提取分离及体外活性成分筛选

目的:为了证明蝎皮对免疫功能的影响并探讨蝎皮中含有的活性成分,通过提取分离蝎皮中的水溶蛋白质和角蛋白质组分,经过体外药理活性筛选,观察其对细胞或体液免疫系统的影响,以期获得具有生物活性的蛋白质组分。方法:采用水提与盐析法获得水溶性总蛋白(ST1),还原法获得总角蛋白(ST2),通过Sephadex G-50凝胶色谱对水溶总蛋白和总角蛋白进行分离,并对获得的各种蛋白组分进行了体外药理筛选。结果:发现蝎皮的蛋白质组分在体外药理实验中显示对T/B淋巴细胞转化具有显著促进作用,但对NK活性无明显作用。结论:蝎皮蛋白提取组分具有一定的免疫调节生物活性,研究结果对蛋白质药物开发提供了基础数据。     

针灸治疗胃溃疡蛋白质组学效应研究平台技术优化与策略研究

目的 为开展针灸治疗胃溃疡的蛋白质组研究,建立并优化其蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法 对醋酸型胃溃疡大鼠进行针刺后取其胃部溃疡处组织,对组织蛋白质的提取方法进行改进,优化双向凝胶电泳的关键因素与环节,如样品的制备及预处理,第一向IPG等电聚焦的上样量及电泳参数,第二向垂直平板SDS凝胶浓度、染色方法等.利用PDQuest7.1软件分析获得的二维凝胶图像.结果 以固相pH梯度-IPG胶条(pH3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS 均一胶(12.5%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了两组大鼠胃组织斑点分布均匀、数目较多的双向凝胶电泳图谱.结论 通过对蛋白质双向凝胶电泳技术的建立及优化,获得了适合于研究胃溃疡高分辨率、高重复性的双向凝胶电泳图谱.     

鹿尾腺总蛋白双向电泳体系的建立

目的:建立一套适用于鹿尾腺总蛋白分析的双向电泳体系,为实现通过蛋白质组学研究手段探究鹿尾腺的组织发育及其发挥药理作用的机制奠定基础.方法:使用三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、饱和酚抽提法和Trizol法3种方法提取鹿尾腺中总蛋白,采用固相pH梯度胶条进行双向电泳,并对蛋白上样量和等电聚焦参数进行选择和优化,凝胶考马斯亮蓝染色后用PDQuest 8.0软件进行图谱分析.结果:Trizol法得到的总蛋白质纯度最高,能满足双向电泳分析对样品的要求,蛋白质样品在7 cm pH 3 ～ 10 IPG胶条上,上样量为300 μg,按优化的程序Ⅱ进行双向电泳,可以得到较满意的双向电泳图谱,此时清晰可见蛋白点数多达209个.结论:通过优化双向电泳条件,建立了适合鹿尾腺蛋白质组学研究的双向电泳体系.同时该体系可以为其他类似的动物组织样品制备和双向电泳提供借鉴.     

全蝎蛋白药效组分的生物鉴定法研究

目的 :研究全蝎蛋白药效组分的提取方法,摸索全蝎蛋白药效组分SDS-PAGE的最佳电泳条件,测定全蝎蛋白药效组分电泳图谱条带的大致分子质量,确定其SDS-PAGE的表达特征,从而建立全蝎蛋白药效组分的电泳鉴别法。 方法 :采用水提与盐析法获得全蝎蛋白药效组分,考马斯亮蓝法测定蛋白药效组分的蛋白质含量,SDS-PAGE法和Alpha Ease FC 4.0.0软件测定全蝎蛋白药效组分的蛋白质相对分子质量。 结果 :全蝎蛋白药效组分的蛋白质质量分数为50.37%;得到较好的全蝎蛋白药效组分的10条电泳谱带,相对分子质量分别为94.162 0,66.400 0,40.357 0,27.541 0,22.518 0,19.520 0,12.766 0,11.190 0,9.665 3,8.534 2 KDa。 结论 :这10条谱带是全蝎蛋白药效组分的特征谱带,可用于全蝎蛋白药效组分的鉴别。     

盆炎消温敏凝胶对金黄色葡萄球菌抑菌作用的初步研究

目的:观察盆炎消温敏凝胶对金黄色葡萄球菌的抑菌效果,初步探讨盆炎消温敏凝胶的抑菌机制。方法:采用KB纸片法、液体稀释法检测盆炎消温敏凝胶对金黄色葡萄球菌的抑菌效果及最小抑菌浓度(MIC值);采用SDS-PAGE电泳法,观察盆炎消温敏凝胶作用下菌体蛋白质电泳图谱的变化。结果:盆炎消温敏凝胶对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为(32.3±2.2)mm,最小抑菌浓度(MIC)为1∶64。在SDS-PAGE电泳中,盆炎消温敏凝胶作用后,金黄色葡萄球菌蛋白质图谱有变化。结论:盆炎消温敏凝胶有抑菌作用,并影响菌体蛋白质的合成,初步揭示了对金黄色葡萄球菌的可能作用机制。     

雪莲组织中蛋白质提取方法比较

目的:比较雪莲组织中蛋白质的提取方法.方法:采用酚法、TCA/丙酮法、尿素法提取雪莲组织中蛋白质,所得蛋白质进行一维SDS-PAGE和双向电泳检测,通过比较电泳图谱确定雪莲组织中蛋白质的最佳提取方法.结果:酚法提取的雪莲组织蛋白质杂质量最少、纯度最高,一维SDS-PAGE和双向电泳图谱显示其具有较多的蛋白质点,且蛋白质种类较多.结论:3种提取方法均有一定的蛋白质损失,建议采用酚法从雪莲组织中提取蛋白质,为雪莲蛋白质组学研究提供参考.     

人参皂甙Rbl作用后大鼠神经细胞蛋白质组双向电泳技术的建立

目的:建立人参皂甙Rbl作用后大鼠神经细胞蛋白质组双向电泳分离体系,提高其分辨率和重复性。方法:人参皂甙Rbl 50mg/L作用于大鼠神经细胞,提取全蛋白,按标准条件对蛋白质进行双向电泳分离,并对各个关键因素进行了优化。结果:最终选择的裂解液配方是1%TBP,4%CHAPS,0.2%Bio-Lyte,40mmol/L Tris,8mol/L尿素,2mol/L硫脲;使用pH 4～7的IPG胶条进行被动水化上样,等电聚焦采用缓慢升压模式,电泳参数根据Bio-Rad公司的预设方案进行调整;改良硝酸银法进行蛋白质斑点染色。从而获得了满意的蛋白质组双向电泳图谱。结论:成功建立了人参皂甙Rbl作用后大鼠神经细胞蛋白质组双向电泳分离体系,具有较高的分辨率和重复性。     

半夏种茎的薄层等电聚焦电泳鉴别

目的:研究半夏种茎的薄层等电聚焦电泳鉴别方法。方法:对不同产地成熟期和发芽期半夏种茎进行蛋白质圆盘IEF电泳和薄层IEF电泳图谱的比较。结果:不同产地发芽期半夏种茎的蛋白质圆盘IEF电泳图谱有一定差别,但同一产地半夏发芽期的圆盘IEF电泳图谱相同;成熟期和发芽期半夏的薄层IEF的谱带基本一致,只是浓度略有差别。结论:薄层IEF电泳的分辨率较高,不同产地半夏种茎的薄层IEF电泳图谱较为稳定,可用于半夏种茎的真实性鉴定。     

双向电泳-质谱法探索实验性重症肌无力大鼠疾病相关蛋白

目的：分离和鉴定实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清差异表达蛋白，寻找并比较疾病相关蛋白，以进一步阐明重症肌无力的发病机制。方法：采用二维蛋白电泳技术分离正常组和模型组大鼠血清差异表达蛋白，凝胶经银染显色后，Bio—Rad凝胶扫描仪扫描，Imagemaster图像软件分析，差异蛋白点用基质辅助激光解析电离-两级飞行时间串联质谱法进行鉴定。结果：通过双向电泳，建立血清蛋白质双向电泳图谱，重症肌无力组血清双向电泳图谱可见678个蛋白点，而正常对照组可见702个蛋白点。选取9个具有明显差异的蛋白点进行质谱鉴定，共鉴定出5种蛋白质。结论：正常组和模型组大鼠间存在一定的差异表达蛋白。该类蛋白为一些与机体免疫应答、信息调控相关的蛋白质。     

舌苔蛋白质双向电泳技术的建立

目的：建立针对舌苔蛋白质组学研究的双向电泳及其相关技术体系。方法：采用超声裂解法提取舌苔蛋白，利用固相pH梯度等电聚焦对舌苔总蛋白进行双向电泳，银染后获得的双向电泳图谱进行ImageMaster 2D Platinum软件分析，并对实验条件进行调整优化。结果：成功构建了高重复性的舌苔蛋白质双向电泳图谱，共获得（1082±105）个蛋白质斑点，pI值主要集中在4～8之间。结论：通过相关条件的调整优化提高了双向电泳的分辨率，为后续舌苔蛋白质组学研究奠定了基础。     

大叶蛇葡萄蛋白质组双向电泳分析

目的：利用双向电泳法研究大叶蛇葡萄活性成分蛋白表达。方法：采用Tris饱和酚提取和醋酸铵甲醇沉淀大叶蛇葡萄嫩叶中的蛋白质;运用双向电泳法分离蛋白质,并对扫描后的二维凝胶电泳图谱进行分析,得到蛋白质表征图谱。结果：根据各个样品间蛋白点灰度值的比值差异,选择了差异较大的7个蛋白点进行质谱鉴定,鉴定了其中两种蛋白,分别为Hypothetical Protein和Unnamed Protein Product。结论：双向电泳技术的应用为从分子水平研究大叶蛇葡萄活性成分蛋白表达奠定了良好的基础。     

红芪多糖3作用小鼠胸腺组织蛋白双向电泳技术的建立

目的建立和优化红芪多糖3(HPS-3)作用后小鼠胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法采用标准裂解法提取HPS-3 100 mg/(kg.d)灌胃14 d小鼠的胸腺组织总蛋白,后续进行三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和去脂蛋白纯化法获取胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条进行双向凝胶电泳,并对等电聚焦程序进行改良和优化,同时将去脂蛋白纯化法运用于A549细胞蛋白的纯化并进行双向电泳,银染色后进行凝胶图像比较。结果去脂蛋白纯化法不仅能减少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此去脂蛋白纯化法所得蛋白的双向电泳图谱显示更好的溶解性和重复性,此外在双向凝胶电泳(2-DE)时,聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化,使横向和纵向拖尾有明显改善,成功建立了背景清晰,蛋白分离良好、分辨率较高的胸腺组织蛋白的双向电泳体系。去脂蛋白纯化法同样适用于A549细胞蛋白提取纯化。结论建立了HPS-3作用后小鼠胸腺组织蛋白质组提取纯化的方法,采用去脂蛋白纯化法可以更有效地提取胸腺组织蛋白。利用优化后的实验方法,获得了HPS-3作用后小鼠胸腺组织蛋白2-DE图谱,为后续研究打下基础。     

不同寄主的管花肉苁蓉可溶性蛋白的电泳分析

目的:对5个管花肉苁蓉材料进行鉴别,探索可溶性蛋白电泳指纹图谱与鉴定之间的关系,同时为建立中药材电泳图谱库提供材料。方法:研究了不同寄主的5个管花肉苁蓉材料的可溶性蛋白在SDS-PAGE条件下的电泳特性。结果:不同寄主的管花肉苁蓉可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱分辨率高,重现性强,其多态性条带为55.56%。结论:各个材料的电泳图谱可以相互区别。不同寄主管花肉苁蓉可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱可作为种间鉴定的依据。     

露峰房抗炎蛋白中多肽成分的分离、纯化及性质研究

 目的:从药用露峰房(Nidus vespae)筛选出的具有较好的抗炎、免疫活性蛋白粗品——NV₃中分离纯化,得到一多肽类化合物,命名为NV-PP-1,并检测其理化性质?方法:以离子交换层析、排阻层析、HPLC等进行分离纯化,并以高效凝胶排阻色谱(HPSEC)、高效毛细管等电聚焦电泳(IEF-HPCE)、亲水性分子排阻液相Protein-Pak^TM60柱、氨基酸分析、DNS-Cl法的N-末端测定检测其理化性质。结果:高效凝胶排阻色谱(HPSEC)及高效毛细管等电聚焦电泳(IEF-HPCE)检测其皆为单峰。亲水性分子排阻液相Protein-Pak^TM60柱测得其分子量为7.079kD。IEF-HPCE确定其PI值为4.08。紫外吸收最高峰为274nm。氨基酸分析表明其含有近56个氨基酸残基,其中谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸较多,还有天冬氨酸等,是一酸性多肽。末端测定表明其N-末端封闭。结论:酸性多肽NV-PP-1是从药用露蜂房抗炎蛋白粗品中首次分离得到的成分。     

不同来源黄芪药材蛋白质电泳鉴别研究

目的 :探讨利用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术鉴别黄芪药材的可行性。方法 :超声提取黄芪药材的水溶性蛋白质,对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,并采用凝胶成像系统分析电泳图谱。结果:黄芪药材的蛋白电泳图谱信息量丰富,不同来源黄芪药材的电泳图谱相似,存在11条明显的共有特征带,同时在条带数目、迁移率和蛋白质相对含量方面存在一定的差异性。结论:PAGE电泳具有分辨率高、谱带稳定、重现性好等优点,可用于黄芪药材的鉴别。