遗传病基因诊断技术(中)

目前常用的基因诊断方法有(1)DNA点杂交;(2)限制性内切酶酶谱;(3)限制性片段长度多态性分析;(4)寡核苷酸杂交和(5)多聚酶链反应(PCR)体外DNA扩增。每种诊断方法的具体操作步骤因实验室而略有不同,这里我们根据自己的经验并结合国内的情况介绍实用的操作方法。(一)DNA点杂交DNA点杂交是根据分子     

中国人经典型苯丙酮尿症(PKU)突变基因的鉴定与产前诊断

经典型苯丙酮尿症(PKU)是由于苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变导致,患儿有严重智力低下等表现。早期诊断与及时给予低苯丙氨酸饮食治疗可防     

应用多重等位基因特异PCR技术进行β地中海贫血的基因诊断

在等位基因特异ＰＣＲ及多重ＰＣＲ的基础上建立了多重等位基因特异ＰＣＲ技术（ＭＡＳＰＣＲ），对中国人常见的－２８Ａ→Ｇ，ＣＤ１７→０，ＣＤ４１－４２（－４ｂｐ）和ＣＤ７１－７２（＋Ａ）等β地中海贫血基因突变进行检测，应用该技术对２１例β地中海贫血患者或携带者进行基因诊断和２例高风险胎儿进行产前诊断诊断，诊断结果与ＰＣＲ／ＡＳＯ探针点杂交或ＤＮＡ测序的结果完全一致，证实多重等位基因特异ＰＣＲ技术具有简便、快速、可靠和经济等优点。     

东方人苯丙酮尿症的分子遗传学—苯丙氨酸羟化酶基因中一终止突变与单体型4的连锁不平衡性

应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的每个外显子及其侧翼的内含子,并克隆到M 13载体中进行序列分析。发现中国人苯丙酮尿症(Phenylketonuria,PKU)患者的PAH基因外显子3中有1个Arg~(111)→Ter~(111)的点突变,此突变与东方人最常见的突变单体型4呈连锁不平衡。此突变占中国人PAH等位基因的10％左右,但不存在于高加索人群中,表明在种族分化过程中PAH基因位点发生了互不相关的突变事件。     

四川地区血红蛋白病与葡萄糖—6—磷酸脱氢酶缺乏症的流行病学研究

我们于1983～1989年在四川省16市县范围内,对血红蛋白(Hb)病与葡萄糖—6—磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症进行调查研究,现将结果报道如下。     

血红蛋白分析技术Ⅴ:肽链解离试验

血红蛋白分子在对汞苯甲酸(PMB)或对氯化汞苯甲酸(PCMB)的作用下,容易解离为肽链(亚单位),由此可以分离和鉴定血红蛋白的各种肽链,研究它的理化特性。这两种肽链解离作用原理相同,但操作方法各异,现已成为鉴定异常血红蛋白病和研究血红蛋白亚单位的重要方法。本文分别介绍经改进的这两种技术,并对操作要点进行讨论分析。     

血红蛋白分析技术Ⅵ.柱层析分析

在血红蛋白研究中,往往需要分离提纯血红蛋白成分,常用的技术除了前文介绍的淀粉板电泳外,还广泛应用离子交换树脂柱层析。所用的离子交换树脂有CM-Cellulose,Amberlite IRC-50、DEAE-Cellulose、DEAE-Sephadex和CM-Sephadex等,其中以CM-Cellulose(羧甲基纤维素,简称CMC)柱层析对血红蛋白的分离效果最好本文介绍我室采用的羧甲基纤维素柱层析技术。方法一、离子交换树脂的预处理:称取国产或进口的离子交换树脂(CM-22)8克,加10～20倍的0.5N NaOH和0.5N NaCl等量混合液浸泡24小     

海口地区的血红蛋白 E 特征及其一个家系的结构分析

血红蛋白(以下简称 Hb)E 是一种慢泳异常 Hb,其结构分析首先由 Hunt 等于1964年完成,证实是 Hb 的β—珠蛋白肽链N 端第26位谷氨酸残基被赖氨酸所取代。近年来国内外均发现有多种 HbE 的类型,据文献报道东南亚地区发生率最高,在我国广西、广东、四川、湖南、湖北等地都陆续有报告,本文报道了在海口市区血红蛋白分子病普查中发现的 HbE 特征及其一个家系的一级结构分析结果,并对 HbE 的生化遗传     

血红蛋白M Iwate(附一例报道)

本文报道了一例祖籍是上海市宝山县的遗传性青紫的病人,家系调查中发现,此病至少遗传了四代。应用醋酸纤维薄膜电泳能从患者溶血液中分离出一种快速异常的血红蛋白。通过血红蛋白理化性质测定和结构分析,证实其α链N端第87位的组氨酸被酪氨酸替代,即血红蛋白MIwate[α87(F8)His→Tyr]。该例异常血红蛋白在中国属首次报道。