东方人苯丙酮尿症的分子遗传学—苯丙氨酸羟化酶基因中一终止突变与单体型4的连锁不平衡性

应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的每个外显子及其侧翼的内含子,并克隆到M 13载体中进行序列分析。发现中国人苯丙酮尿症(Phenylketonuria,PKU)患者的PAH基因外显子3中有1个Arg~(111)→Ter~(111)的点突变,此突变与东方人最常见的突变单体型4呈连锁不平衡。此突变占中国人PAH等位基因的10％左右,但不存在于高加索人群中,表明在种族分化过程中PAH基因位点发生了互不相关的突变事件。     

遗传病基因诊断技术(中)

目前常用的基因诊断方法有(1)DNA点杂交;(2)限制性内切酶酶谱;(3)限制性片段长度多态性分析;(4)寡核苷酸杂交和(5)多聚酶链反应(PCR)体外DNA扩增。每种诊断方法的具体操作步骤因实验室而略有不同,这里我们根据自己的经验并结合国内的情况介绍实用的操作方法。(一)DNA点杂交DNA点杂交是根据分子     

反义RNA对地中海贫血红系细胞β-珠蛋白mRNA异常剪接的纠正作用

目的 研究反义ＲＮＡ对β－地中海贫血红系细胞ＩＶＳ２－６５４Ｃ→Ｔ（β＾６５４）突变ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用。方法 构建特异性针对β＾６５４ｍＲＮＡ 前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体,和不针对上述位点的反义对照载体,转染培养的β＾６５４红系细胞后,抽提总ＲＮＡ;以ＲＴ－ＰＣＲ法作ｍＲＮＡ定量,检测正常和异常剪接的β－珠蛋白ｍＲＮＡ产物的比例［β／（β＋β＾＊）］;以珠蛋白肽链体外生物合成分析     

中国人经典型苯丙酮尿症(PKU)突变基因的鉴定与产前诊断

经典型苯丙酮尿症(PKU)是由于苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变导致,患儿有严重智力低下等表现。早期诊断与及时给予低苯丙氨酸饮食治疗可防     

应用多重等位基因特异PCR技术进行β地中海贫血的基因诊断

在等位基因特异ＰＣＲ及多重ＰＣＲ的基础上建立了多重等位基因特异ＰＣＲ技术（ＭＡＳＰＣＲ），对中国人常见的－２８Ａ→Ｇ，ＣＤ１７→０，ＣＤ４１－４２（－４ｂｐ）和ＣＤ７１－７２（＋Ａ）等β地中海贫血基因突变进行检测，应用该技术对２１例β地中海贫血患者或携带者进行基因诊断和２例高风险胎儿进行产前诊断诊断，诊断结果与ＰＣＲ／ＡＳＯ探针点杂交或ＤＮＡ测序的结果完全一致，证实多重等位基因特异ＰＣＲ技术具有简便、快速、可靠和经济等优点。     

血红蛋白分析技术Ⅵ.柱层析分析

在血红蛋白研究中,往往需要分离提纯血红蛋白成分,常用的技术除了前文介绍的淀粉板电泳外,还广泛应用离子交换树脂柱层析。所用的离子交换树脂有CM-Cellulose,Amberlite IRC-50、DEAE-Cellulose、DEAE-Sephadex和CM-Sephadex等,其中以CM-Cellulose(羧甲基纤维素,简称CMC)柱层析对血红蛋白的分离效果最好本文介绍我室采用的羧甲基纤维素柱层析技术。方法一、离子交换树脂的预处理:称取国产或进口的离子交换树脂(CM-22)8克,加10～20倍的0.5N NaOH和0.5N NaCl等量混合液浸泡24小     

血红蛋白分析技术Ⅴ:肽链解离试验

血红蛋白分子在对汞苯甲酸(PMB)或对氯化汞苯甲酸(PCMB)的作用下,容易解离为肽链(亚单位),由此可以分离和鉴定血红蛋白的各种肽链,研究它的理化特性。这两种肽链解离作用原理相同,但操作方法各异,现已成为鉴定异常血红蛋白病和研究血红蛋白亚单位的重要方法。本文分别介绍经改进的这两种技术,并对操作要点进行讨论分析。     

成都地区发现的异常血红蛋白

1978～81年,作者对成都地区的机关干部和中小学生6479人进行了血红蛋白病的普查,发现了几种异常血红蛋白(Hb)并进行了化学结构分析,现报道如下. 方法先取末梢血,用简快Hb电泳法(1)筛选,有异常Hb区带者进行体检和家族调查,并取静脉血作血红蛋白测定和红细胞形态观察,Hb的醋酸纤维素薄膜和淀粉胶电泳,HbA_2和异常Hb定量,抗硷Hb测定,不稳定性试验(异丙醇试验、热变性试验、变性珠蛋白小体检查),Hb溶解度测定及异常Hb肽链分析(8M尿素解离和醋纤膜肽链电泳法):然后作异常Hb的化学结构分析,即先将Hb溶液制成珠蛋白干粉,经CM—22纤维素柱     

培养成人外周血红系细胞的珠蛋白生物合成研究

培养成人外周血红系细胞的珠蛋白生物合成研究顾小锋黄淑帧曾溢滔人类血红蛋白合成的一个重要特征是伴随个体生长发育过程中的珠蛋白基因表达的两次转换：即从卵黄囊造血期转入胎肝造血期的ε基因向γ基因表达转换，以及胎肝造血期转入骨髓造血期的γ基因向β基因表达转换...