补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用

  目的：探讨常用补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用。  方法：采用水提醇沉法制备淫羊藿、仙茅、巴戟天、肉苁蓉、杜仲、菟丝子、补骨脂、知母、黄柏、生地黄、六味地黄丸和金匮肾气丸等常用补肾中药和复方的提取物。①分别以不同浓度(0、2、4、8、16、31、63、125、250、500、1 000 μg/ml)的补肾中药或复方干预细胞48 h,MTT法检测Y1细胞增殖的情况,筛选各单味中药和复方的适宜浓度。②将细胞分为对照组、模型组和中药(复方)组。除对照组外,其他各组Y1细胞给予10 μmol/L氢化可的松和5 μmol/L H89(促肾上腺皮质激素信号阻断剂)诱导模型;造模同时,各中药(复方)组给予相应提取物。药物干预48 h后,PCR检测类固醇合成急性调节蛋白(Star)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21α-羟化酶1(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)、3β-羟基类固醇脱氢酶1(Hsd3b1)、3β-羟基类固醇脱氢酶2(Hsd3b2)等mRNA表达;Western blot检测StAR、CYP11A1、CYP11B1、3β-HSD1、3β-HSD2的蛋白表达;ELISA检测细胞培养液皮质酮含量。  结果：①MTT检测结果显示,黄柏对Y1细胞增殖具有明显的抑制作用。筛选出的适宜药物浓度分别为黄柏10 μg/ml、知母100 μg/ml、其他中药(复方)200 μg/ml。②各单味中药和复方干预模型细胞48 h后,PCR检测结果显示,淫羊藿、仙茅、黄柏和生地黄对皮质酮合成的相关基因影响较显著。③与对照组相比,模型组Star、Cyp21a1的mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01),Cyp11a1、Cyp11b1和Hsd3b1的mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,生地黄组Cyp21a1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01);仙茅组Cyp21a1、Cyp11a1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01);淫羊藿组Star和Hsd3b1的mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),Cyp21a1 mRNA表达显著降低(P<0.01);黄柏组Cyp21a1、Cyp11a1、Cyp11b1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01)。④与模型组相比,仙茅组3β-HSD2蛋白表达显著降低(P<0.01),黄柏组StAR、CYP11A1和3β-HSD2蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),3β-HSD1蛋白表达显著升高(P<0.01)。⑤与模型组相比,仙茅、淫羊藿、黄柏作用后皮质酮含量显著降低(P<0.01)。  结论：大剂量氢化可的松可诱导Y1细胞培养液皮质酮含量显著升高。补肾中药淫羊藿对模型细胞的皮质酮合成具有促进作用,可上调Star和Hsd3b1基因表达;而黄柏则具有抑制作用,可下调StAR、CYP11A1和3β-HSD2蛋白表达,降低皮质酮含量。     

丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠胰腺NLRP3炎症小体的影响

  目的：观察具有益气养阴活血作用的丹蛭降糖胶囊(DJC)对糖尿病大鼠胰腺炎症小体NLRP3的影响。  方法：取大鼠55只,除正常对照组9只外,其余大鼠高能量饮食4 周后加小剂量一次性腹腔注射STZ 的方法建立2型糖尿病大鼠模型; 造模成功后,模型组大鼠分为模型组,DJC高、低剂量组和吡格列酮组。各药物组分别予DJC(1.08、.0.54 g·kg-1·d-1)、吡格列酮10 mg·kg-1·d-1,正常组、模型组予等量生理盐水灌胃干预,连续8周。检测大鼠血糖及血脂水平；实时荧光定量PCR方法检测大鼠胰腺组织NLRP3 mRNA表达。  结果：与正常对照组比较,模型组胰腺炎症小体NLRP3 mRNA表达明显升高(P<0.01)。与模型组比较,DJC高剂量组NLRP3 mRNA表达明显降低(P<0.01)；DJC高、低剂量组及吡格列酮组的血糖和血脂水平显著降低(P<0.01),而各用药组之间比较无明显差异。  结论：DJC可控制NLRP3的过度表达,抑制细胞炎症反应、改善微炎症状态,从而减轻氧化应激损伤、保护胰岛B细胞。     

八种助阳药对小鼠甲减模型M胆碱能受体的调节作用

用中药去甲乌药碱、仙茅、补骨脂、杜仲、葫芦巴、肉苁蓉、菟丝子、锁阳分别治疗方小鼠甲状腺机能减退症。用放射配体结合分析法观察此八种药对甲减模型小鼠脑组织Ｍ受体最大结合容量（ＲＴ）的影响。结果：“甲减”模型脑组织Ｍ受体最大结合容量较正常组显著增加（Ｐ＜０．００１），肉苁蓉、杜仲、去甲乌药碱，葫芦巴能使之恢复至正常水平，而锁阳与菟丝子仅使之有恢复趋势。补骨脂、仙茅却影响不大（Ｐ＜０．０５）．表明：助阳药去甲乌药碱、杜仲、葫芦巴、肉苁蓉、菟丝子、锁阳能使“甲碱”时及组织Ｍ受体数目减少，补骨脂、仙茅对“甲减”时Ｍ受体数目影响不大。     

健脾解毒方对湿热证结肠癌小鼠肿瘤血管新生的抑制作用

  目的：探索健脾解毒方对湿热证结肠癌小鼠肿瘤血管新生的影响。  方法：将Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组及健脾解毒方低、中、高剂量组,对照组复制结肠癌原位模型,其余各组建立小鼠湿热证结肠癌模型。健脾解毒方低、中、高剂量组分别灌胃给药(250 、500、1 000 mg·kg-1·d-1),对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,均干预28 d。干预结束,每组各处死部分荷瘤鼠,测量瘤体质量,免疫组化法检测各组瘤体的Ki67和肿瘤微血管密度(MVD)表达,ELISA测定血清中血管内皮生长因子(VEGF)表达;剩余小鼠用于观察生存时间。  结果：健脾解毒方各剂量组的瘤体质量均较模型组显著减小(P<0.01),荷瘤鼠中位生存时间均较模型组明显延长(P<0.01),且中、高剂量组的瘤重抑制率和生命延长率均高于低剂量组(P<0.01)。检测结果显示,模型组肿瘤MVD及VEGF表达水平较对照组显著提高(P<0.01),健脾解毒方各剂量组肿瘤细胞Ki67指数、MVD计数及VEGF水平均较模型组显著降低(P<0.01),且中、高剂量组明显低于低剂量组(P<0.01),呈剂量依赖效应。  结论：健脾解毒方能够抑制湿热证结肠癌小鼠肿瘤的生长、延长荷瘤鼠生存时间,其机制可能与下调VEGF表达从而抑制肿瘤血管新生有关。     

氢化可的松诱发虚证状态对H22肝癌小鼠肿瘤增长的影响

目的?研究氢化可的松诱发的虚证状态对肝癌小鼠肿瘤增长的影响。方法?将雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组、肿瘤模型组、氢化可的松组,氢化可的松肿瘤组,采用氢化可的松给药小鼠14?d造成虚证状态,给药第1天同步接种H22肝癌细胞至腋下复制荷瘤小鼠模型。动态观测小鼠体质量与肿瘤大小变化;处死小鼠后,取脾脏、胸腺称质量并计算脏器指数;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇合成酶以及肿瘤增殖相关的mRNA表达;运用Western blot方法检测肿瘤Akt、p-Akt蛋白表达。结果?与正常对照组比较,肿瘤模型组脾脏显著增大（P＜0.05）,肾上腺Cyp11a1、Cyp11b1、Cyp11b2的基因表达显著下调（P＜0.05）;使用氢化可的松的小鼠脾脏和胸腺明显萎缩（P＜0.01）,肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1基因均下调（P＜0.05）。与肿瘤模型组比较,氢化可的松肿瘤组小鼠接种肿瘤第7天肿瘤体积减小（P＜0.05）,同时氢化可的松显著抑制肿瘤组织Akt1基因表达（P＜0.05）,促使Foxo3基因表达上调（P＜0.05）、抑制Akt、p-Akt蛋白表达。与氢化可的松组比较,氢化可的松肿瘤组小鼠脾脏、胸腺萎缩减轻,肾上腺类固醇合成酶基因表达均上调（P＜0.05）。结论?氢化可的松通过抑制内分泌免疫功能诱发小鼠虚证,短期使用小鼠肿瘤增殖减缓,而持续性虚损状态下促进肿瘤生长。      

氢化可的松减停给药致小鼠药源性阴虚证及其对肾上腺皮质功能的影响

目的:研究小剂量氢化可的松长期给药及减停后对小鼠证候和肾上腺皮质功能的影响。方法:96只雄性ICR小鼠随机分为对照组和氢化可的松低、中、高剂量(0.33、0.66、1.32mg·kg~(-1)·d~(-1))组,每组24只。氢化可的松组小鼠实验第1～28天灌胃给予相应剂量的氢化可的松溶液,实验第29～35天灌胃给予原剂量减半的氢化可的松溶液,实验第36～49天停药。对照组小鼠实验第1～35天灌胃给予等体积灭菌水。实验期间,每周定期测定每只小鼠的体质量。分别于实验第27、41、48天,采用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠腋温、四肢抓力和旷场活动度。分别于实验第28、42、49天,取每组8只小鼠,分离胸腺、脾脏、肾上腺组织,采集血清。计算胸腺与脾脏的脏器指数;ELISA检测血清皮质酮含量;PCR检测肾上腺类固醇激素合成急性调节蛋白(Star/StAR)、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1的mRNA表达;Western blot检测StAR、B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)、低密度脂蛋白受体(LDLR)的蛋白表达。结果:(1)药物干预期间,氢化可的松各剂量组小鼠体质量增长缓慢,显著低于同期对照组(P0.05,P0.01);停药后各剂量组小鼠体质量快速增长,与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。实验第28天,氢化可的松高剂量组小鼠的腋温较对照组显著下降(P0.01),停药后恢复正常水平。在各观察时间点,各组小鼠四肢抓力和旷场活动度比较,差异均无统计学意义(P0.05)。(2)与对照组同期相比,实验第28天,氢化可的松各剂量组小鼠的脾脏指数和胸腺指数均显著下降(P0.05,P0.01);实验第42天,中、高剂量组小鼠的脾脏指数显著降低(P0.05);实验第49天,高剂量组小鼠的脾脏指数仍显著降低(P0.05)。(3)在各观察时间点,氢化可的松各剂量组小鼠的血清皮质酮含量较对照组均显著降低(P0.01)。(4)与对照组同期相比,实验第28天,氢化可的松中剂量组小鼠肾上腺组织Cyp21a1 mRNA表达显著下降(P0.05),高剂量组Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1的mRNA表达显著下降(P0.05,P0.01);实验第42天,中剂量组Star mRNA表达恢复性上调(P0.05);实验第49天,低剂量组Cyp21a1、Cyp11b1的mRNA表达恢复性上调(P0.01),中剂量组Star、Cyp11a1的mRNA表达恢复性上调(P0.01),高剂量组Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1的mRNA表达恢复性上调(P0.01)。(5)与对照组同期相比,实验第28天,氢化可的松低剂量组小鼠肾上腺StAR蛋白表达量显著降低(P0.01),中剂量组StAR、SRBⅠ蛋白表达量显著降低(P0.01),高剂量组LDLR、StAR、SRBⅠ蛋白表达量均显著降低(P0.01);实验第42天,低剂量组LDLR蛋白表达量显著升高(P0.05);实验第49天,低剂量组LDLR、SRBⅠ、StAR蛋白表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05),中剂量组StAR以及高剂量组LDLR和StAR蛋白表达水平仍显著下降(P0.05,P0.01)。结论:小剂量氢化可的松长期给药可诱发小鼠阴虚证表象,抑制其肾上腺皮质功能;药物减停后,小鼠外观表征恢复较快,而肾上腺皮质酮分泌功能恢复较慢。     

糖肾宁对KK-Ay小鼠肾脏病理及足细胞凋亡的影响

目的观察糖肾宁对KK-Ay小鼠肾脏病理及足细胞凋亡的影响。方法利用KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,将造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、糖肾宁组及缬沙坦组。另外选取相同数量的C57BL/6J小鼠作为正常对照组。糖肾宁组小鼠予20 g·kg-1·d-1的糖肾宁灌胃,缬沙坦组小鼠予10 mg·kg-1·d-1的缬沙坦灌胃,正常对照组及模型组予等剂量蒸馏水灌胃。灌胃时长为12周。分别在灌胃0、4、8、12周时检测24 h尿蛋白,灌胃12周后心尖取血检测血肌酐及尿素氮水平。HE、Masson、PAS染色观察各组小鼠肾脏病理改变,免疫组化及RT-PCR检测各组小鼠足细胞Caspase-3蛋白表达,TUNEL染色观察各组小鼠足细胞凋亡情况。结果①与正常对照组比较,模型组小鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平明显降低(P<0.05)。②与正常对照组比较,模型组小鼠肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生;与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠肾小球系膜细胞减少,细胞外基质增生减轻。③与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞Caspase-3蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞Caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)。④与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞凋亡数目明显升高(P<0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞凋亡数目明显降低(P<0.05)。结论糖肾宁能够降低糖尿病肾病蛋白尿,改善肾功能,其机制可能与其改善肾脏病理及减轻足细胞凋亡有关。     

复方中药组分对糖尿病大鼠血浆ET-1、AngI、AngⅡ的影响

  目的：观察复方中药组分(黄连生物碱40%、三七总皂苷35%、麦冬多糖25%)对糖尿病模型大鼠血浆内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的影响。  方法：用链脲菌素制备糖尿病大鼠模型,随机分为5组(模型对照组、二甲双胍组及高、中、低剂量中药组),每组各10只;另取10只作为空白对照组。其中模型对照组和空白对照组用0.9%NaCl溶液10 ml·kg-1·d-1,二甲双胍组用二甲双胍0.05 mg·kg-1·d-1,高、中、低剂量中药组分别用中药组分0.45、0.15、0.05 g·kg-1·d-1,连续灌胃干预4周后断头采血;用酶联免疫吸附法检测血浆中ET-1、AngⅠ、AngⅡ的含量。  结果：模型对照组ET-1、AngⅠ、AngⅡ含量明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)。中、高剂量中药组和二甲双胍组ET-1、AngⅠ含量低于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);高剂量中药组与二甲双胍组AngⅡ含量低于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。高剂量中药组AngⅡ含量低于二甲双胍组,差异有统计学意义(P＜0.05)。  结论：复方中药组分可能通过降低ET-1、AngⅠ和AngⅡ的水平减轻血管内皮损伤,起到改善糖尿病血管并发症的作用。     

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠颈总动脉血管紧张素转换酶2表达的影响

目的观察阿托伐他汀对自发性高血压大鼠(SHR)颈总动脉血管紧张素转换酶2(ACE2)表达的影响及其改善血管重构的可能作用机制。方法24只13周龄雄性SHR随机分为3组(每组8只):SHR组(0.5%阿拉伯胶浆15 mg·kg~(-1)·d~(-1))、阿托伐他汀组(30 mg·kg~(-1)·d~(-1))、缬沙坦组(20 mg·kg~(-1)·d~(-1));8只同周龄雄性WKY大鼠作为正常血压对照组(WKY组)(0.5%阿拉伯胶浆15 mg·kg~(-1)·d~(-1))。连续灌胃给药4周后处死。放免分析法测定血浆和颈总动脉血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度;病理图像分析系统测定颈总动脉内膜增生程度和中膜增生面积。免疫组化法检测颈总动脉ACE 2蛋白表达;RT-PCR法检测颈总动脉ACE 2 mRNA的表达。结果(1)与SHR组比较,阿托伐他汀组和缬沙坦组内膜增生程度显著降低(P<0.01),且缬沙坦组优于阿托伐他汀组(P<0.05),但2组中膜增生面积差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与SHR组比较,阿托伐他汀组、缬沙坦组颈总动脉AngⅡ浓度降低(P<0.01),血浆AngⅡ浓度、ACE 2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),且缬沙坦组优于阿托伐他汀组(P<0.05,P<0.01)。结论阿托伐他汀可显著抑制血管内膜增生,与其降低颈总动脉AngⅡ浓度、升高ACE 2 mRNA和蛋白表达有关。     

依达拉奉对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的探讨依达拉奉(edaravone)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的C57BL/6J帕金森病模型小鼠的保护作用及相关机制。方法 90只雄性C57BL/6J小鼠随机分为依达拉奉组(ED组)、帕金森病模型组(PD组)和生理盐水对照组(NS组),每组30只。ED组和PD组小鼠给予皮下注射MPTP建立PD模型后,ED组给予依达拉奉(3mg/kg)治疗。用滚轴实验检测小鼠的旋转次数,用免疫组织化学实验检测小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达,用RT-PCR和免疫印迹实验分别检测小鼠黑质脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA与蛋白的表达。结果与NS组比较,ED组、PD组小鼠在滚轴实验中的旋转次数下降(P<0.05,P<0.01),黑质TH表达减少(P<0.05,P<0.01),黑质BDNF的mRNA(P均<0.01)和蛋白(P均<0.05)表达降低;与PD组比较,ED组小鼠在滚轴实验中的旋转次数增加(P<0.05),黑质TH表达增加(P<0.05),黑质BDNF的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达升高。结论依达拉奉可增加C57BL/6JPD模型小鼠黑质区BDNF的mRNA及蛋白表达,降低MPTP对小鼠黑质的损伤,对多巴胺能神经元有保护作用。     

清肠化湿方对实验性大鼠结肠炎结肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1的影响

目的 观察清肠化湿方对实验性大鼠结肠炎结肠组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α），紧密连接跨膜蛋白claudin-1表达水平的影响，以探讨其治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能机制。方法 使用TNBS/无水乙醇造模成功后，分为空白组、模型组、清肠化湿方组12.8 g/(kg·d）、美沙拉嗪组（0.67 g/（kg·d）。一次性ig给药，连续10 d后，处死大鼠，留取结肠组织；ELISA法检测结肠组织TNF-ａ水平，免疫组化法观察结肠上皮claudin-1蛋白的表达情况，实时荧光定量PCR法检测claudin-1 mRNA相对表达水平。结果 清肠化湿方可以降低大鼠结肠炎模型结肠组织TNF-α水平[模型组，清肠化湿组分别为（99.40±32.37），（55.07±12.80）pg/mL]，（P<0.01），提高claudin-1 mRNA相对表达水平[模型组，清肠化湿组分别为(2.18±0.78)，(3.94±0.91)]（P<0.01），减轻对claudin-1蛋白的损伤（P<0.05），清肠化湿方组与美沙拉嗪组疗效无明显差异。结论 清肠化湿方降低结肠组织TNF-α水平，保护紧密连接蛋白claudin-1，是其治疗UC的机制之一。     

香草扶正合剂对Lewis肺癌模型小鼠癌细胞自噬的影响

[目的]探讨香草扶正合剂(Xiangcao Fuzheng Mixture,XCFZ)的抑瘤作用及其机制。[方法]建立Lewis肺癌小鼠移植瘤模型,随机分为模型组,XCFZ低、中、高剂量组,顺铂组(阳性对照组),并设置空白组。模型组以双蒸水0.2mL·d-1灌胃,XCFZ低、中、高剂量组分别以XCFZ低、中、高剂量0.2mL·d-1灌胃,XCFZ低、中、高剂量浓度分别为0.93g·mL-1、1.86g·mL-1、3.72g·mL-1;顺铂组以0.64mg·mL-1的顺铂溶液0.1mL·(2d)-1腹腔注射,同时以双蒸水0.2mL·d-1灌胃。每天固定时间给药,给药14d。称取小鼠体质量、瘤质量和去瘤后体质量,并计算抑瘤率,常规石蜡切片观察肿瘤组织病理改变,透射电镜观察瘤组织自噬小体,Western blot检测瘤组织自噬相关基因Beclin1、自噬相关蛋白5(autophagy related 5,Atg5)、微管相关蛋白1轻链3-β(microtubule associated protein 1 light chain 3-β,LC3b)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测瘤组织Beclin1、Atg5、LC3b、Unc-51样自噬激活激酶1(Unc-51 like autophagy activating kinase 1,ULK1)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)mRNA表达水平。[结果]与模型组比较,各给药组瘤质量降低(P＜0.01)。顺铂组抑瘤率最高,其次为XCFZ中剂量组。与模型组比较,XCFZ中剂量可升高小鼠去瘤后体质量(P＜0.05),增加肿瘤组织Atg5、Beclin1、LC3b蛋白及Atg5、Beclin1、LC3b、ULK1 mRNA表达水平,并升高Bax/Bcl-2 mRNA比值(P＜0.05,P＜0.01)。与顺铂组比较,XCFZ中剂量可升高小鼠去瘤后体质量(P＜0.01),增加肿瘤组织Atg5、LC3b蛋白及Beclin1 mRNA表达水平(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05)。[结论]XCFZ对肺癌小鼠模型肿瘤生长具有抑制作用,其抑瘤作用可能与自噬诱导相关;或与增加自噬相关蛋白Beclin1、Atg5表达,引发凋亡相关。     

阿托伐他汀对糖尿病心肌病大鼠心肌组织赖氨酰氧化酶的影响

目的 探讨阿托伐他汀对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌组织赖氨酰氧化酶(LOX)表达的影响及机制.方法 将30只DCM大鼠分为DCM组、治疗组(阿托伐他汀2 mg· kg-1·d-1灌胃)、β氨基丙腈(BAPN)组(BAPN 80 mg·kg-1·d-1灌胃),每组10只;另选10只SD大鼠为空白对照组.第8周末处死大鼠.提取心肌组织RNA及蛋白质,RT-PCR和Western blot测定心肌组织LOX、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达.结果 DCM组LOX、MMP-2及NF-κB mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P＜0.01);与DCM组比较,治疗组及BAPN组LOX、MMP-2及NF-κB mRNA和蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 阿托伐他汀可逆转DCM大鼠心肌组织LOX表达,进而调控MMP-2及NF-κB表达.     

佛手宁神方改善睡眠作用的机制

目的 评价佛手宁神方镇静催眠作用并研究其对失眠大鼠海马5-羟色胺(5-HT)、5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)表达的影响.方法 雄性昆明小鼠随机分为空白组,艾司唑仑组[0.4 mg/(kg·d)],佛手宁神方低、中、高剂量组[12,24,48 g/(kg·d)];连续给药1周,末次给药后进行阈下剂量和阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠实验.雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,艾司唑仑组[0.2 mg/(kg·d)],佛手宁神方低、中、高剂量组[6,12,24 g/(kg·d)],每组8只;采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)350 mg/(kg·d)制作失眠大鼠模型;造模完成后第1天开始灌胃给药,连续1周.旷场实验测试各组大鼠运动总路程和站立次数;酶联免疫吸附法测定海马5-HT的含量;免疫组化法和实时荧光定量PCR分别检测海马5-HT1AR蛋白和mRNA的表达.结果与空白组相比,佛手宁神方高剂量组阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数增加(P<0.05),阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠潜伏期缩短(P<0.01),睡眠持续时间延长(P<0.01).与空白组比较,模型组大鼠在旷场实验中运动总路程增加(P<0.05),海马5-HT含量减少(P<0.01),海马5-HT1AR蛋白和mRNA表达水平下降(P<0.01).与模型组相比,艾司唑仑组和佛手宁神方高剂量组运功总路程减少(P<0.05),海马5-HT含量增加(P<0.05),海马5-HT1AR蛋白和mRNA表达水平上升(P<0.01).结论 佛手宁神方可能通过提高海马5-HT的含量,上调海马5-HT1AR蛋白和mRNA的表达,从而起到治疗失眠的作用.     

清心通络方通过调控Nrf2/HO-1通路改善小鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 研究清心通络方对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响,并探讨其机制是否与调控Nrf2/HO-1信号通路相关。方法 将45只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和中药组,每组15只。中药组予清心通络方(1.08g·kg-1·d-1)灌胃给药,余各组予等体积生理盐水(0.2mL·d-1)灌胃,灌胃处理14d后通过结扎小鼠左侧冠状动脉左前降支30min后再灌注构建心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)模型,其中假手术组仅穿线不结扎。采用伊文思蓝和2,3,5-氯化三苯基四氮唑双重染色法测定小鼠心肌缺血和心肌梗死面积;采用生化试剂盒检测小鼠血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平;采用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)法检测心肌组织白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA 相对表达量;采用蛋白免疫印 迹法(Western blot)检测心肌组织PARP-1、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1的蛋白表达。利用H2O2模拟氧化应激损伤细胞模型,采用细胞凋亡试剂盒检测HL-1细胞的凋亡情况。结果 与假手术组相比,模型组小鼠心肌损伤加重,血清CK、CK-MB、LDH、AST水平升高(P 均<0.01);与模型组相比,中药组小鼠血清CK、LDH、AST水平均下降(P<0.05或P<0.01),且心梗面积明显减少(P<0.01)。与假手术组相比,模型组小鼠血清中SOD水平下降(P<0.05),MDA 含量升高(P<0.01);与模型组相比,中药 组小鼠血清SOD水平升高(P<0.01),MDA 含量下降(P<0.01)。炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α的mRNA表达在模型组中升高(P 均<0.01),中药处理后可显著降低上述炎症因子的mRNA 表达(P 均<0.01)。模型组心肌组织PARP-1、Bax蛋白表达较假手术组升高(P 均<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达则下降(P 均<0.01);与模型组相比,中药组心肌组织PARP-1、Bax蛋白表达量减少(P 均<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达量增加(P 均<0.05)。此外,H2O2 处理后的HL-1 细胞凋亡明显增加(P<0.01),不同浓度中药均可明显减少H2O2导致的细胞凋亡(P<0.01)。结论 清心通络方通过减轻炎症和氧化应激改善MIRI,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

基于调控结肠组织中SCF和c-kit mRNA表达分析苍术燥性效应量效关系

目的：基于结肠组织中干细胞因子（SCF）及其受体c-kit mRNA表达分析苍术燥性效应的量效关系,确定引起小鼠燥性反应的苍术基础剂量,为临床用药提供参考。方法：75只C57BL/6小鼠分为对照组和185、370、555及740 mg·kg^-1苍术挥发油组,每组15只,给药体积为0.015 mL·g^-1,灌胃给药14 d,对照组给予同体积1%吐温-20溶液。测定小鼠日均饮水量和日均尿量,采用免疫组织化学法检测小鼠肾组织中水通道蛋白2（AQP2）蛋白表达水平,计算小鼠脾脏和肾脏系数,采用RT-PCR法检测小鼠结肠组织中SCF和c-kit mRNA表达水平,根据以上指标考察各组小鼠燥性效应。结果：与对照组比较,185和370 mg·kg^-1苍术挥发油组小鼠日均饮水量、日均尿量、肾组织中AQP2蛋白表达水平、肾脏系数和脾脏系数差异均无统计学意义（P>0.05）,小鼠结肠组织中SCF mRNA表达水平明显升高（t=4.859,P<0.01;t=6.651,P<0.05）,185 mg·kg^-1苍术挥发油组小鼠结肠组织中c-kit mRNA表达水平明显升高（t=2.946,P<0.05）,而370 mg·kg^-1苍术挥发油组差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,555 mg·kg^-1苍术挥发油组小鼠日均尿量、结肠组织中c-kit mRNA表达水平明显降低（t=7.708,P<0.01;t=8.465,P<0.01）,其他指标差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,740 mg·kg^-1苍术挥发油组小鼠饮水量、肾组织中AQP2蛋白表达水平明显升高（t=3.554,P<0.01;t=4.636,P<0.01）,日均尿量、脾脏系数、结肠组织中SCF和c-kit mRNA表达水平明显降低（t=7.708,P<0.01;t=4.985,P<0.01;t=7.314,P<0.01;t=28.45,P<0.01）。结论：低剂量（185和370 mg·kg^-1）苍术挥发油对健康小鼠无明显燥性作用,而高剂量（555 mg·kg^-1以上剂量）苍术挥发油可能通过影响SCF/c-kit信号通路对小鼠产生明显的燥性作用。     

积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化的保护作用

  目的：观察积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。  方法：①小鼠实验:将KM小鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照(醋酸泼尼松,5 mg/kg)组和积雪草苷低剂量(40 mg/kg)、高剂量(80 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其他各组小鼠采用一次性气管注入平阳霉素(5 mg/kg)的方法诱导肺纤维化模型。造模次日,各组灌胃给予相应的药物干预,连续28 d。末次给药后,分离肺组织;测定肺指数;ELISA检测肺组织白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β含量;PCR检测肺组织转化生长因子-β₁(TGF-β₁)mRNA表达。②大鼠实验:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照(醋酸泼尼松,4 mg/kg)组和积雪草苷低剂量(20 mg/kg)、高剂量(40 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其他各组大鼠采用一次性气管注入平阳霉素(5 mg/kg)的方法诱导肺纤维化模型。造模次日,各组灌胃给予相应的药物干预,连续28 d。末次给药后,分离肺组织;测定肺指数;HE染色后光镜下观察各组大鼠肺组织形态学变化;ELISA检测肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量;PCR检测肺组织TGF-β₁mRNA表达。  结果：①小鼠实验:模型组小鼠肺指数,肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量及TGF-β₁ mRNA表达均较对照组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组与积雪草苷低、高剂量组小鼠的肺指数及肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.05,P<0.01),积雪草苷低、高剂量组小鼠肺组织TGF-β₁ mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。②大鼠实验:模型组大鼠肺指数,肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量及TGF-β₁ mRNA表达均较对照组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组与积雪草苷低、高剂量组大鼠肺指数显著降低(P<0.05,P<0.01),肺组织TGF-β₁ mRNA表达水平显著降低(P<0.01);阳性对照组和积雪草苷高剂量组大鼠肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),积雪草苷低剂量组TNF-α、IL-1β含量较模型组明显降低(P<0.05)。③HE染色观察显示,模型组大鼠肺泡结构破坏,成纤维细胞增生,伴有大量炎症细胞浸润;积雪草苷低、高剂量组和阳性对照组大鼠上述病变均有改善,炎症细胞浸润和肺泡萎陷减轻。  结论：积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化具有保护作用,其机制可能与下调TGF-β₁mRNA表达、抑制炎症细胞因子激活有关。     

地塞米松对哮喘小鼠MIP-1α蛋白和mRNA表达的调控

目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)蛋白和mRNA表达的调控作用.方法:30只二级雄性BALB/C小鼠分为3组:正常小鼠组(A组)、哮喘小鼠组(B组)和地塞米松处理组(C组).以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型.采用免疫组化法和原位杂交法检测MIP-1α蛋白和mRNA在支气管中的表达情况.结果:免疫组化和原位杂交均显示B组支气管MIP-1α蛋白和mRNA的表达显著高于A组(P＜0.01),C组支气管MIP-1α蛋白和mRNA的表达显著低于B组(P＜0.01).结论:MIP-1α参与哮喘发病机制,上皮细胞是主要的表达细胞;地塞米松对哮喘的治疗部分通过抑制MIP-1α等趋化因子起作用.     

顺铂短期给药诱发小鼠药源性虚证模型的评价研究

目的:研究顺铂短期给药诱发小鼠药源性证候的属性及对类固醇激素合成功能的影响。方法:40只雄性ICR小鼠随机分为对照组及顺铂不同剂量(3、5、10 mg·kg~(-1)·d~(-1))组,每组10只。各药物干预组小鼠腹腔注射相应剂量的顺铂,连续5 d。分别于干预5 d后和停药5 d后,观察小鼠体征(体质量、摄食量、腋温、爪色泽),并进行行为学测试(抓力、旷场试验和转棒试验)。观察期后,取血清;分离肾脏、心脏、胸腺和脾脏,计算脏器指数;收集肾上腺和睾丸。ELISA检测血清皮质酮和睾酮含量;HE染色后光镜下观察肾上腺与睾丸组织形态学变化;PCR、Western blot分别检测肾上腺皮质类固醇激素合成酶和睾丸睾酮合成酶相关的mRNA、蛋白表达。结果:(1)干预5 d后,顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠体质量、摄食量、腋温、水平运动及垂直运动较对照组均显著降低(P0.05,P0.01);顺铂3、5 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠腋温明显低于对照组,而爪色r值高于对照组(P0.05,P0.01)。停药5 d后,顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠体质量、摄食量、在棒时间、抓力、腋温、爪色r值、水平运动及垂直运动较对照组均显著降低(P0.05,P0.01);顺铂3、5 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠垂直运动较对照组亦明显减少(P0.01)。(2)与对照组相比,10 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂作用显著抑制小鼠脾脏、胸腺、心脏,脏器指数明显降低(P0.05,P0.01),而肾脏指数显著升高(P0.01);5 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂作用亦抑制心脏(P0.05)。(3)形态学观察显示,顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠肾上腺皮质球状带细胞肿胀明显,顺铂5、10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠可见各级生精细胞排列略紊乱,睾丸间质细胞收缩明显。(4)与对照组相比,顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P0.01),血清睾酮含量无明显变化。(5)与对照组相比,顺铂3 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠肾上腺Star、Cyp21a1的mRNA表达受到抑制(P0.05),而顺铂10 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠肾上腺Star、Cyp11b1、Cyp21a1的mRNA表达及StAR、CYP21A2、CYP11B1蛋白表达显著上调(P0.05,P0.01)。(6)与对照组相比,10 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂作用显著抑制睾丸StAR、CYP11A1、CYP17A1、HSD3B2的mRNA与蛋白表达(P0.05,P0.01);5 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂干预显著抑制Star和Hsd3b2的mRNA表达(P0.05,P0.01);3 mg·kg~(-1)·d~(-1)顺铂作用亦显著抑制Cyp17a1和Hsd3b2的mRNA表达(P0.01)。结论:顺铂短期给药可诱发小鼠虚证表现,以精气亏虚为主,其物质基础与类固醇激素合成及储备下降有关。     

短期大剂量氢化可的松诱发小鼠药源性证候的评价研究

目的:研究大剂量氢化可的松短期给药诱发小鼠药源性证候的特征及对肾上腺皮质功能的影响。方法:32只雄性ICR小鼠随机分为对照组与氢化可的松不同剂量干预组(12.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)组、25 mg·kg~(-1)·d~(-1)组、50 mg·kg~(-1)·d~(-1)组),每组8只。氢化可的松不同剂量组小鼠分别灌胃给予相应浓度的氢化可的松溶液,对照组小鼠灌胃给予相同体积灭菌水,连续5 d。分别于给药第1、3、5天称量每只小鼠体质量。末次给药后,采用课题组前期建立的小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠表征信息(躯体不同部位红外温度、腋温、抓力);取各只小鼠胸腺、脾脏称重,计算脏器指数;分离肾上腺组织,实时荧光定量PCR技术检测类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)基因表达,Western blot检测StAR、SRBI与LDLR蛋白表达。结果:①给药1、3、5 d后,氢化可的松25 mg·kg~(-1)·d~(-1)和50 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠的体质量均较对照组显著降低(P0.05,P0.01)。②给药5 d后,氢化可的松12.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)和25 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠的头部最高温度均较对照组显著降低(P0.05),但氢化可的松各剂量组小鼠的躯干平均温度、尾部最低温度、腋温、抓力无明显变化。③与对照组相比,氢化可的松各剂量组小鼠的脾脏指数均明显下降(P0.01),且呈剂量依赖性;50 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠的胸腺指数较对照组显著降低(P0.01)。④与对照组相比,氢化可的松25 mg·kg~(-1)·d~(-1)和50 mg·kg~(-1)·d~(-1)组肾上腺组织中Star、Cyp11a1、Cyp11b1和Cyp21a1的mRNA表达均显著减少(P0.05,P0.01),StAR、LDLR和SRBI蛋白表达均显著降低(P0.05,P0.01)。结论:大剂量氢化可的松(25 mg·kg~(-1)·d~(-1)和50 mg·kg~(-1)·d~(-1))短期给药5 d可显著抑制小鼠肾上腺皮质功能,其证候表现以药源性阴虚证为主。