改良体外光化学疗法提高淋巴细胞凋亡诱导率

目的探讨改良体外光化学治疗(ECP)方法提高淋巴细胞凋亡诱导率的效果。方法以无菌离体移植肝供者脾脏作为实验材料,分别以改良和传统ECP方法制备供者脾脏淋巴细胞悬液(SP),所得SP经8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)联合A波段长波紫外线(UVA)照射(PUVA)、8-MOP、UVA处理,并分别设对照组;不同处理的SP于37℃、50 mL/L CO2孵箱中培养过夜(6~8 h),通过观察细胞形态学改变并用流式细胞术检测凋亡率,比较各组间淋巴细胞凋亡率的差异。结果改良ECP方法制备的SP,经PUVA、8-MOP、UVA处理早期凋亡率和总凋亡率分别为(95.33±3.03)%和(97.10±2.12)%,(23.39±4.55)%和(36.32±6.63)%,(66.98±3.60)%和(68.65±4.35)%,与对照组(12.82±1.86%和13.4±2.65%)相比,差异显著,具有统计学意义(P0.01);传统ECP法各实验组早期及总凋亡率分别为(79.73±4.21)%和(82.70±4.13)%,(61.42±2.28)%和(68.91±2.18)%,(19.30±1.78)%和(28.06±1.88)%,(10.84±0.98)%和(12.77±1.22)%,组间比较差异显著,具有统计学意义(P0.01);改良法与传统ECP法相比,早期和总凋亡率有显著性差异(P0.01),而晚期凋亡率无显著性差异(P0.05)。结论改良型ECP方法可简便、安全、高效提高离体脾脏淋巴细胞早期凋亡率,为进一步研究ECP诱导的树突细胞免疫调节作用奠定基础。     

肝硬化患者凝血、抗凝及纤溶指标的变化与Child-Pugh分级的关系

目的 探讨肝硬化患者凝血、抗凝及纤溶指标的变化及其与Child-Pugh分级的关系。 方法肝硬化患者43例,Child-Pugh分级A级13例,B级15例,C级15例。正常对照组16例,男11例,女5例。均检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、血管性假性血友病因子(vWF)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、蛋白-C(PC)、D-二聚体(D-d)、组织纤溶酶原激活物(t-PA)抗原和组织纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)。 结果 PT、APTT随病情加重而显著延长,F值分别为32.828和18.743,P值均<0.01;Fib随病情加重逐渐降低,F=4.747,P<0.01。凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ随病情加重活性逐渐降低,F值分别为43.129、12.677、36.405、9.380和21.988,P值均<0.01。Ⅷ、vWF因子随病情加重活性逐渐增高,F值分别为16.672和14.657,P值均<0.01。AT-Ⅲ、PC随病情加重活性逐渐降低,F值分别为22.602和15.430,P值均<0.01。D-d、t-PA抗原随病情加重逐渐增高,F=5.957,P<0.05。PAI活性正常对照组和3组患者检测结果近似,差异无统计学意义。 结论 肝硬化患者存在明显的凝血、抗凝血以及纤溶机制的异常,且与肝硬化程度密切相关。在防治肝硬化患者出血时,不仅要纠正患者的凝血因子异常,还要给予一定的抗纤溶治疗。     

中晚期肝病患者凝血酶原时间标准化形式探讨

目的 探讨中晚期肝病患者凝血酶原时间(PT)的标准化形式。方法 收集慢性重型肝炎患者l6例，肝硬化失代偿患者50例，口服抗凝治疗4～6周患者30例。用6种不同凝血活酶国际敏感化指数(ISI)值的组织凝血活酶检测这些患者的PT，凝血酶原时间活动度(PTA)．凝血酶原时间比率(PTR)与国际标准化比率(INR)。结果 慢性重型肝炎患者6组间PTA差异较小，平均值波动于24％～34％，上限值波动于47％～61％；而INR组间差异非常显著，平均值波动丁2．55～5．13，上限值波动于4．65～l2．77。单因素方差分析PPTA(0．489)＞1NR(0．120)。肝硬化患者6组间PTA平均值波动于50％～59％，上限值波动于82％～90％；INR平均值波动于1．40～1．80，上限值波动于1．97～3．69。单因素方差分析PPTA(0．102)＞PINR(0．01)。PTA的波动范围均小于INR。但对口服抗凝治疗的患者，INR的波动范围最小。以STAR血凝仪的配套试剂Neoplastine所测PT值与其它5种试剂所测值进行相关分析，中晚期肝病患者PTA作为PT的表达方式时，相关性最好，而其它形式较为弥散。口服抗凝治疗患者INR作为PT的表达方式时，相关性最好。结论 PTA可将中晚期肝病患者PT标准化。     

进驻海拔4300m地区工人外周血T淋巴细胞亚群和免疫球蛋白水平

我们于2009年对进驻海拔4300 m地区工作不同时间的养路工人进行了T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8及免疫球蛋白IgG、IgA、IgM检测,现将结果报告如下.一、对象与方法1.对象:选择从西宁(2260 m)到海拔4300 m高原地区工作的109名养路工人作为对象,其中,工作10年以内34例,年龄(27.6±1.8)岁;10～20年43例,年龄(36.4±2.6)岁;20年以上32例,年龄(43.0±2.8)岁;均进行了T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8及免疫球蛋白IgG、IgA、IgM检测.对照组为平原地区(西安)健康人群34例,年龄(28.3±2.6)岁,但只进行了T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8检测.由于平原的养路工人和健康人群资料难以收集,所以,对照组免疫球蛋白水平空缺.     

调节性树突细胞对皮肤移植小鼠IL-10+调节性B细胞的影响

目的 探讨吞噬了供者凋亡淋巴细胞的未成熟树突细胞(imDC)对皮肤移植受体小鼠外周血IL-10+CD19+调节性B细胞(Breg)比例及移植物存活时间的影响.方法 以C57BL/6小鼠作为受者,BALB/c小鼠为供者,建立小鼠皮肤移植模型.分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,经小鼠重组白细胞介素4(IL-4)和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)共同诱导,制备并培养imDC.分离BALB/c小鼠脾淋巴细胞(SP),经光化学照射方法(PUVA)处理,得到供者小鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP).在体外将PUVA-SP与C57BL/6小鼠骨髓来源的imDC共同培养,得到PUVA-SP DCs.根据受体小鼠术前接受的静脉输注成分将其随机分为4组(n=14):PUVA-SP DC组、imDC组、成熟树突细胞(maDC)组和PBS对照组.于手术前7d分别从尾静脉注入1×106个(0.2ml)PUVA-SP DC、imDC、maDC或0.2ml PBS.于移植术后观察受体小鼠的移植物存活时间、外周血IL-10+CD19+ Breg比例及IL-10的表达情况.结果 移植术后,受体小鼠外周血IL-10+CD 19+Breg细胞占CD19+B细胞的比例在PUVA-SP DC组为7.48％,明显高于imDC组(4.12％)、maDC组(3.01％)和PBS对照组(2.37％).PUVA-SP DC组小鼠血清中IL-10表达水平为58.2±0.9ng/ml,与maDC组(20.1±1.6ng/ml)、imDC组(26.2±1.3ng/ml)及PBS对照组(19.0±0.6ng/ml)比较显著升高(P＜0.01).PUVA-SP DC组移植物存活时间为62.3±2.6d,显著长于maDC组(20.7±1.9d)、imDC组(12.1±1.0d)和PBS对照组(11.0±1.3d,P＜0.01).结论 移植术前输注PUVA-SP DCs可显著延长移植物存活时间,增加受者体内IL-10的表达水平,诱导产生较多分泌IL-10的调节性B细胞.     

树突状细胞分类及调节性树突状细胞获取方式的研究进展

树突状细胞(DC)虽然数量少,但其在机体免疫系统中发挥的作用却逐渐受到认可和重视。研究表明DC由不同的亚群组成,具有不同的处理抗原的能力和激活不同效应淋巴细胞等能力。其中,调节性树突状细胞(DCreg)是一群具有负向免疫调控功能的DC亚群。DCreg能够通过不同的机制诱导机体免疫耐受,在器官移植、自身免疫性疾病、肿瘤等不同领域均发挥着重要作用。但DC在体内分布广泛,且含量少,生理情况下半衰期短,建立成熟的DC培养技术,特别是如何获取足量的DCreg,是目前免疫学界研究的重要领域。本文就DC的分类和DCreg体外获取方式进行综述。     

CLINICAL OBSERVATION ON TREATMENT OF CHILD CEREBRAL PALSY WITH PENETRATION NEEDLING FROM SISHENCONG TO BAIHUI POINT

Childcerebralpalsy(CCP)isanon-pro-gressivecerebralinjury-inducedsyndromeoccur-ringwithinamonthfrompre-birthtopoSt-birth,manifestedmainlybycentralneurogenicdyskinesiaandabnormalPosture,disturbanceofvision,audition,speechandintelligence,andepilepticattack.Itseriouslyendangerschildren'smentalandphysicalhealthandoftenresultsinpermanentdisability.Uptonow,therehavenoyetbeenanyspecialtherapeuticapproaches.Inrecentyears,theauthorsadoptedpenetrationneedlingandmoxibustiontotreatCCPandachievedsatisfac…     

不同海拔地区养路工外周血T细胞亚群水平的比较

[目的]观察高原地区不同海拔高度养路工人的细胞免疫水平。[方法]对海拔2800m、3500m、4000m3个海拔高度的养路工人进行T细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8和白细胞（WBC）、淋巴细胞（LY）检测。[结果]海拔4000m养路工人的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、WBC值增高最为明显（分别为85.46±7.18、47.25±8.62、33.25±9.55、1.58±0.69、6.94±1.65）,而2800m则无明显增高。3个海拔高度工人的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8和WBC值比较差异有统计学意义（P〈0.01）,各项值随海拔增高而增高（以CD3更为明显）。LY各组间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。[结论]高原缺氧影响人体生理功能和免疫功能,因此在高原地区,做好体力劳动者的劳动和卫生保障工作是十分必要的。     

耐核糖核酸酶内含长片段嵌合体RNA的病毒样颗粒的构建和表达

目的 通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点(19碱基的茎环结构)的数量及亲和力,构建新的原核表达系统,探讨表达内含长片段(达到理论上的1 900 bp)RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性.方法 首先设计含Hind Ⅲ和Not Ⅰ酶切位点的引物,扩增ms2包膜蛋白的编码成熟酶蛋白和衣壳蛋白的1 700 bp序列,并将原来的19mer的包装位点序列改变为C-5变异体(19 bp stem-loop结构中-5位的尿嘧啶改变为胞嘧啶),Hind Ⅲ和Not Ⅰ酶切后,与用同样酶切的表达载体pET-28(b)相连接,得到重组载体pET-ms2-pac.应用重叠PCR扩增3种病毒的5段嵌合体序列(包括3段SARS-CoV基因、一段HCV基因和一段HSN1基因),并在SARS-CoV3和HCV序列之间插入一个19mer的变异体包装位点序列,在设计引物时,使嵌合体两端含有Not Ⅰ酶切位点,与Not Ⅰ酶切的重组载体pET-ms2-pac相连接,构建得到具有2个变异包装位点的表达载体pET-ms2-3V.同时构建3种对照重组表达载体,分别测定N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V 4种重组表达质粒表达产物的260 nm吸光度(A260)值,根据公式A160=0.125 mg/ml计算4种表达产物的表达效率.结果 成功构建了4种原核表达载体:pET-ms2-3V、P-3V-pET-P、N-P3V-pET-P和N-P3V-pET-C.pET-ms2-3V和P-3V-pET-P经原核表达后得到含全长为1 891的5段嵌合体RNA的病毒样颗粒;N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C其原核表达产物病毒样颗粒中仅包装了1 200 bp的目的 嵌合体RNA.N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V的表达效率分别为0.23、0.35、0.35和0.51 mg/ml.N-P3V-pET-C比N-P3V-pET-P表达效率高52%,而pET-ms2-3V比P-3V-pET-P表达效率高38%.所包装的RNA具有耐RNase和DNase消化的特性以及良好的不同温度条件下的稳定性.结论 通过改变噬菌体ms2 RNA包装位点(19碱基的茎环结构)的数量,可构建能表达内含达到理论上的约1 900 bp外源RNA的耐RNase病毒样颗粒的原核表达载体平台.通过应用包装位点的变异体C-变异体,可以增加病毒样颗粒的表达效率.     

肝硬化患者血小板计数与血小板生成素及脾脏指数间的关系

目的 研究肝硬化患者外周血血小板计数、血清血小板生成素(TPO)水平及脾脏指数间的关系,以明确肝硬化患者血小板减少的原因。方法 血清TPO水平采用酶联吸附法检测,脾脏指数由同一医生在相同的条件下用彩色多普勒超声仪测量。结果 健康对照组与肝硬化组外周血小板计数分别为(169.63±26.60)×10~(12)/L、(109.20±53.39)×10~(12)/L,t=3.630,P<0.05;血清TPO水平分别为(412.63±132.80)pg/ml、(436.42±258.97)pg/ml,t=0.272,P>0.05。随着肝脏损伤的加重,血清TPO水平依次下降,Child-Pugh A级、B级、C级分别为(526.13±317.44)pg/ml、(445.22±214.90)pg/ml、(311.45±182.66)pg/ml,A级与C级之间差异有显著性,而其它指标(血小板计数、脾脏指数、门静脉宽度)A级与B级、C级之间差异有显著性。血小板正常组(35例)与血小板减少组(36例)血清TPO水平分别为(529.43±282.64)pg/ml、(351.27±228.25)pg/ml,t=-2.926,P<0.01;而两组间脾脏指数分别为(19.65±12.00)cm~2、(36.35±12.68)cm~2,t=1.891,P>0.05。结论 血清TPO水平降低可能是肝硬化患者血小板减少的原因之一,脾脏在血小板减少中的作用有待进一步研究。