流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值

目的探讨流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值。方法根据术后影像学和实验室检查结果,将51例首次肾移植受体分为细菌组33例、真菌组9例、BK病毒组9例;另选择肾移植术后稳定的受体28例作为稳定组。采用流式细胞术分析各组受体外周血淋巴细胞亚群比例和绝对计数。比较各组肾移植受体的肾功能、外周血淋巴细胞亚群的比例及绝对计数;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析淋巴细胞亚群比例和绝对计数在肾移植术后感染性疾病中的诊断价值。结果与稳定组相比,细菌组、真菌组和BK病毒组血清肌酐(Scr)水平和血尿素氮(BUN)水平均有不同程度升高,差异均有统计学意义(P=0.035、0.007、0.024;0.037、0.006、0.032)。与稳定组比较,细菌组和真菌组CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞比例均下降(P=0.036、0.015);真菌组CD4+/CD8+T细胞比例明显下降(P=0.004)。与细菌组相比,真菌组和BK病毒组的CD3+CD8+T细胞比例均升高(P=0.013、0.008),CD3+CD4+T细胞比例均降低(P=0.003、0.010),CD4+/CD8+T细胞比例均明显下降(P=0.003、0.005)。与稳定组比较,细菌组、真菌组、BK病毒组CD3+T细胞数量、CD3+CD8+T细胞数量、CD16+CD56+NK细胞数量均明显降低(P=0.025、0.002、0.003;0.015、0.005、0.006;0.001、0.001、0.031);真菌组和BK病毒组CD3+CD4+T细胞数量降低(P=0.001、0.003);BK病毒组CD19+B细胞数量明显降低(P=0.019)。与细菌组比较,真菌组CD3+CD4+T细胞数量明显降低(P=0.023)。ROC曲线分析显示,CD3+CD4+T细胞和CD16+CD56+NK细胞数量诊断真菌感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8492和0.8889;CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD19+B细胞数量诊断BK病毒感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8472、0.8452和0.8115。结论采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群可以评估患者机体免疫功能状态,绝对计数能够直观地判断免疫程度,两者结合对于肾移植受者感染性疾病的诊断和鉴别诊断具有指导意义。     

器官移植受者术后巨细胞病毒感染的监测

目的:评价外周血巨细胞病毒pp65抗原检测在器官移植受者移植术后巨细胞病毒感染监测中的价值,并与巨细胞病毒抗体检测进行对比.方法:选择2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院器官移植中心器官移植受者43例,于移植术后两三个月取外周血检测巨细胞病毒抗原和抗体.①巨细胞病毒早期抗原pp65检测:取5～7 mL外周血加入EDTA抗凝,采用间接免疫荧光方法进行,以每2×105个白细胞中发现1个或以上阳性细胞定为阳性.②巨细胞病毒特异性IgG,IgM抗体检测:取3 mL外周血,不抗凝,以间接ELISA法检测.结果:43例受试者均进入结果分析,无脱落.①43例中术后外周血巨细胞病毒早期抗原pp65阳性9例,均在检测同时或2～10d后出现明显的巨细胞病毒感染症状.②巨细胞病毒抗体IgG均为阳性,仅能说明受试者有过巨细胞病毒感染史.③巨细胞病毒抗体IgM阳性2例,检出率低于pp65抗原阳性者.结论:应用间接免疫荧光方法检测巨细胞病毒pp65抗原具有快速、特异、更易于接受的优点,适用于器官移植术后巨细胞病毒感染的监测,而巨细胞病毒抗体的检测仅能作为辅助参考.     

SARS患者与普通肺炎患者心肌酶谱特征调查

传染性非典型肺炎(“重症急性呼吸综合征”，severe acute respiratory syndrome，SARS)是由冠状病毒的一个变种(SARS coronavirus，或SARS-CoV)所引起的。SARS已成为严重危害人类健康和生命安全的全球性流行性疾病。鉴于SARS与普通肺炎的临床症状相似，都有发热、咳嗽、胸透阴影，有时难以区别。现对29例最初诊断为SARS后又被排除的肺炎患者和70例确诊SARS患者的血清心肌酶谱进行调查和分析。     

离体消化法分离原代肝星状细胞

目的:改进大鼠肝星状细胞的分离方法,提高肝星状细胞分离的纯度和活力.方法:本研究主要依据Weiskirchen的方法并加以改进,灌注后即将肝脏从原位分离,随之使用0.25%的链霉蛋白酶E和0.025%的胶原酶Ⅳ消化,经DNA酶Ⅰ分散,筛网过滤、离心,将细胞沉淀用18%Nycodenz密度梯度离心,获取肝星状细胞.台盼蓝染色鉴定细胞活率,Desmin免疫细胞化学染色法鉴定肝星状细胞纯度.结果:本方法所建立的离体消化分离肝星状细胞方法,每只大鼠肝约获取2.7×107个肝星状细胞,活率、纯度分别为99%、90%.该方法可有效减少细胞污染、提高细胞活力,值得广泛应用.结论:本文所建立的大鼠离体消化法分离肝星状细胞,方法简单可行,较大程度避免了细胞污染,提高了细胞的存活率和纯度.     

更昔洛韦对原位肝移植术后巨细胞病毒感染的预防和治疗:19例临床资料回顾

目的:巨细胞病毒感染是器官移植后的一个严重并发症,回顾性分析肝移植术后患者巨细胞病毒感染的诊断和防治方法.方法:①回顾分析2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院全军器官移植中心收治的19例肝移植受者的临床资料,供者均为健康献肝者.供者、受者对治疗方案均知情同意,且得到医院伦理道德委员会批准.②术后1个月检测1次巨细胞病毒血清抗体,预防和治疗巨细胞病毒感染均采用静脉注射更昔洛韦.术后采用三联免疫抑制疗法,根据术后血药浓度及肝功能改变调整免疫抑制药物用量.③采用酶联免疫吸附法检测患者血中巨细胞病毒抗体巨细胞病毒IgG、巨细胞病毒IgM.结果:19例受者中6例发生巨细胞病毒感染,均无临床症状,并全部治愈.结论:更昔洛韦能够有效治疗肝移植术后巨细胞病毒感染.积极预防、早期治疗肝移植术后患者巨细胞病毒感染是治疗成功的关键.     

肾移植术后尿液DYZ-1检测的临床意义

背景:对移植受者尿液成分进行定期监测可以作为判断移植肾功能、状态的一种方法.目的:分析肾移植受者尿液中供者细胞出现与急性排斥反应的关系及临床意义.方法:选取60例供者为男性、受者为女性的肾移植受者,分为移植后早期检测组40例、急性排斥组10例、移植后功能稳定组10例.定期提取尿液中细胞DNA,利用PCR检测Y染色体上特异的基因片段DYZ-1.结果与结论:在手术第1日受者的尿液中可检测到供者细胞DNA,随着时间的延长,尿液中供者细胞DNA量逐渐减少,至术后1个月,有8例受者的尿液中供者细胞DNA消失,其中1例发生急性排斥反应;另外32例受者的尿液中仍有供者细胞DNA的出现,其中7例发生了急性排斥反应;存活3个月以上发生急性排斥反应10例患者,7例尿液标本中能检测到供者细胞DNA,对急性排斥者进行治疗后1个月,71.4%转为阴性;而在稳定期的10例肾功能良好受者,仅1例受者尿液中DYZ-1基因阳性.提示对肾移植受者尿中供者细胞DNA的进行定期检测,可以作为监测急性排斥反应发生及预后的一种手段.     

基于免疫学展开多学科研究生培养模式的探索与实践

解放军总医院第八医学中心呼吸与危重症医学部研究所适临改革调整学科转型之际,依托北京市器官移植与免疫调节重点实验平台,构建以免疫学为核心的多学科研究生联合培养模式,从个体化研究生培养背景、教学模式、能力培养等方面进行分析,探索多个临床学科研究生共同培养的实践模式,以期培养具有系统和整体论的医学思维人才,更好地展开临床工作。     

肾移植后诱导活化高表达CD25的CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞的表型特点与免疫调节功能

目的 探讨肾移植受者活化并表达不同强度CD25的CD4细胞的表型特征和功能特点.方法依据CD25的表达水平,应用流式细胞仪将9例行初次亲属活体肾移植受者的外周血CD4~+ T细胞分为CD25~-、CD25高表达(CD25~(high))和CD25低表达(CD25~(low))3群,并比较3群细胞叉头翼状螺旋转录因子(FoxP3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)表达强度.经免疫磁珠法和CD4~+ CD25~+调节性T细胞分选试剂盒分选得到受者外周血CD4~+ CD25~-、CD4~+ CD25~(high) T细胞,分别作为反应细胞,以Co~(60)γ射线照射灭活的供者外周血单个核细胞(PBMC)作为刺激细胞,建立体外单向混合淋巴细胞培养系统.采用半定量RT-PCR检测系统中IL-2 mRNA的表达.结果 在肾移植术后受者3群细胞中,FoxP3的表达以CD4~+ CD25~(high)细胞最高(93.7%±3.58%),其次是CD4~+CD25~(high)细胞(16.4%±6.8%),CD4~+ CD25~-细胞最低(1.8%±1.1%),三者间差异均有统计学意义(P<0.01);CTLA-4表达以CD4~- CD25~(high)细胞最高(80.8%±7.9%),其次是CD4~- CD25~(low)细胞(22.9%±6.5%),CD4~- CD25~-细胞最低(4.1%±2.4%),三者间差异均有统计学意义(P<0.01).在混合淋巴细胞培养中,CD4~- CD25~(high)细胞受移植抗原刺激后不表达IL-2 mRNA;按照1:2比例加入CD4~- CD25~(high)细胞后,CD4~-细胞表达的IL-2 mRNA平均被抑制了60%.结论 肾移植受者所有活化T细胞的表面均有CD25表达,高表达CD25的细胞群具有调节性T细胞的表型特点,为CD4~+ CD25~(high)曲调节性T细胞.     

总胆汁酸及前白蛋白等指标诊断肝硬化及肝肿瘤的应用价值

 目的 调查血清总胆汁酸(TBA)等指标在肝硬化及肝肿瘤患者中的水平,讨论其临床应用价值.方法 163例分为三组:肝硬化代偿组56例,肝硬化失代偿组62例,肝肿瘤组45例;对照组51例,为心、肺、肝、肾功能均无异常的健康体检者.所有受试者均空腹抽血检测以下指标:血清总胆汁酸(TBA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆红素、前白蛋白(PA)、白蛋白(ALB)、胆碱脂酶活性(CHE)、总蛋白(TP)、超敏C反应蛋白(HS-CRP)、补体C3.比较患者组与健康体检者化验指标的差异.结果 (1)疾病组血清总胆汁酸(TBA)均显著升高(P<0.01),失代偿组水平最高.(2)转氨酶均升高(P<0.01),代偿组以谷丙转氨酶(ALT)升高显著;而另两组以谷草转氨酶(AST)升高更为明显.(3)前白蛋白(PA)均下降(P<0.01),三组间无显著性差异(P>0.05).白蛋白(ALB)、胆碱脂酶活性(CHE)的水平按代偿组、失代偿组、肝肿瘤组依次降低(相邻两组间P<0.05).(4)肝硬化失代偿前后补体C3水平均显著下降(P<0.01),失代偿组下降更为明显.结论 在肝硬化、肝肿瘤患者中,血清总胆汁酸(TBA)的检测较其他指标更为敏感.前白蛋白(PA)更为敏感地反映肝脏合成功能的损害程度.补体C3的改变与肝硬化病情密切相关.HS-CRP与病情进展高度相关,尽早控制炎症有利于疾病的治疗.总胆汁酸(TBA)等指标的联合检测有利于对病情的分析和诊治.     

慢性肝病血清总胆汁酸、胆碱脂酶活性检测及意义

血清总胆汁酸（ ＴＢＡ）和胆碱酯酶活力（ ＣＨＥ）对肝病的诊断意义已有许多报道［１］。本文调查了血清ＴＢＡ、ＣＨＥ和其他常规肝功能指标用于慢性肝病的早期诊断，转归和预后的价值。１对象和方法１．１研究对８正常对照组为健康查体者，８６例（年龄１８－５０岁），按常规留取静脉血。肝病组按照１９９５年５月北京第５次全国传染病与寄生虫学术会议修订的诊断标准，选择慢性肝炎轻度 ６３例、中度 ５１例，肝硬化７４例，原发性肝癌无并发肝硬化者 ６０例，年龄（ １４－６３岁），均按常规留取静脉血。１．２方法试剂为日本第一化…