大肠埃希菌质粒氨基糖苷类耐药基因分布及多态性研究

目的 通过大规模测序研究临床分离的大肠埃希菌的质粒基因组所携带的氨基糖苷类耐药基因分布及其多态性.方法 收集4年临床分离非重复的320株大肠埃希菌.菌株分为两个部分,碱裂解法提取全部质粒,Solexa测序获得大规模的短序列.采用比较基因组学和分子进化方法分析两个样本所含的氨基糖苷类耐药基因类型及丰度的差异,研究氨基糖苷类耐药基因存在的核苷酸多态位点.结果 测序法获得两批数据,E1短序列总数为11 077 768,可以定位到参照序列上为71 528（0.646%）.E2短序列总数为9 377 792,可以定位到参照序列上是49 944（0.532%）.两个样本中共有9个氨基糖苷类耐药基因型,strB基因最多,其次是strA、aacC2.两个样本中9个氨基糖苷类耐药基因共发现67个单核苷酸多态性（SNPs）位点,约50%为非同义突变.同一个位点的A、G二核苷酸多态现象常见.结论 此次样本中大肠埃希菌质粒上分布多种氨基糖苷类耐药基因.存在着大量的SNPs.     

严重急性呼吸综合征冠状病毒刺突蛋白在酿酒酵母中的表达和纯化

目的构建重组表达质粒pYES6-S，诱导SARS冠状病毒刺突蛋白（spikeprotein）在酿酒酵母中的表达并纯化。方法反转录获得SARS冠状病毒DNA片段，PCR法获得刺突蛋白基因互相重叠的四部分片段，酶切连接成全长，在大肠埃希菌E．coliJM109中构建重组表达克隆pYES6-S，在酿酒酵母巾诱导表达并纯化。结果重组克隆pYES6～S经酶切、测序鉴定确定，插入片段大小、方向、碱基匹配与预期一致，获得1个完整的刺突蛋白基因，表达产物纯化后，电泳鉴定，相对分子质量大小近110000。结论 成功克隆SARS冠状病毒刺突蛋白基因全长，并在酿酒酵母中诱导表达成功，有助于抗SARS分子疫苗的研究。     

钙离子通道基因CACNA1C多态性与原发性高血压病的关系研究

目的:探讨钙离子通道基因CACNA1C的SNP位点rs10848683C/T、rs2299661C/G与原发性高血压的关系。方法:采用多重聚合酶链反应方法及基质辅助激光解析-飞行时间质谱分析技术对413例中国汉族原发性高血压患者以及372例正常对照CACNA1C基因rs10848683C/T、rs2299661C/G的等位基因进行检测,观察各基因型频率及等位基因频率。结果:原发性高血组rs10848683 T等位基因频率与对照组相比无明显差异(58.24%:60.69%,P>0.05),OR=0.472,95%C I:0.382-1.441;原发性高血组rs2299661 G基因频率与对照组相比无明显差异(63.80%:64.83%,P>0.05),OR=1.255,95%C I:0.636~2.477。结论:CACNA1C rs10848683C/T rs2299661C/G基因多态性与中国汉族人群原发性高血压的发生不具有关联性。     

温州地区汉族正常人群CYP1A2基因多态性分布特征

目的检测CYP1A2基因多态性在温州地区汉族正常人群的分布特征。方法采用聚合酶链反应（PCR）产物直接测序法检测108例随机血液样本DNA中CYP1A2基因序列单核苷酸多态性位点（SNP）的分布。对检测到的3个多态位点2159G〉A、3613T〉C、5347C〉T,进一步采用PCR技术分析472例正常人位点的基因型频率和等位基因频率。结果 （1）2159 G〉A位点：G和A等位基因的频率分别为93.8%,6.2%,GG、GA、AA基因型频率分别为87.7%、12.1%、0.2%（χ2=0.325,P〉0.05）;（2）3613 T〉C位点：T和C等位基因的频率分别为97.9%、2.3%,TT、TC、CC基因型频率分别为95.3%、4.4%、0.3%（χ2=0.298,P〉0.05）;（3）5347 C〉T位点：C和T等位基因的频率分别为87.9%、12.1%。CC、CT、TT基因型分布频率分别为77.8%、20.3%、1.9%（χ2=0.742,P〉0.05）;（4）2159 G〉A、5347 C〉T组成的单倍型频率为3.2%。结论温州地区汉族正常人群CYP1A2基因存在2159G〉A、3613T〉C、5347C〉T多态位点。     

志贺菌的质粒谱及耐药性分析

目的　分析志贺菌质粒谱、耐药性及流行菌株在遗传学上的同源关系。方法　用改良 Ｋａｄｏ Ｌｉｕ 法提取细菌质粒,琼脂糖凝胶电泳检测质粒,用平板稀释法测定药物最低抑菌浓度（ Ｍ Ｉ Ｃ） ,用试管内肉汤接合法和平板表面接合法进行接合转移试验。结果　１３０ 株志贺菌都含有５ 条小质粒带（ 除１ 条分子量稍大于６ ×１０６ 外,其余４ 条均小于６ ×１０６） ,１２８ 株含有１ 条分子量约为１２０ ×１０６ 的大质粒带,１８ 株有１ 或２ 条分子量介于３４ ～８０ ×１０６ 之间的质粒带;１５ 种抗生素的 Ｍ Ｉ Ｃ 测定结果显示,这些菌株对头孢三嗪、阿米卡星、头孢哌酮、头孢唑啉,庆大霉素敏感（ 敏感率为１００ ％ ～８８ ．６ ％ , Ｍ Ｉ Ｃ９０为＜ ２ ～１０ μｇ／ｍｌ） ,对卡那霉素等其余１０ 种药物的敏感率很低或不敏感,不同质粒谱菌株对药物的敏感性几乎相同,对包括１８ 株含３４ ～８０ ×１０６ 质粒在内的２５ 株菌进行接合转移试验,未检出传递性耐药性质粒。结论　细菌的耐药性由非传递性的小质粒所携带,且大多流行菌株在遗传学上具有同源性相关。     

SARS冠状病毒CT基因型发现及相关特征

目的 研究SAPS冠状病毒基因型及相关特征。方法 对杭州市首例SAPS病人分离的SAPS冠状病毒ZJ01株进行全基因组测序，并在GenBank数据库登录。记录号：AY297028，版本号：gi：30910859。整个全基因组由29715bp组成。使用GeaBank数据库中最新登陆的SARS病毒的基因组进行序列比对、突变点分析和多态性分析、特殊片段的系统进化分析。结果 发现在ZJ0l株的9391、17555、21712、22213和27819位点，分别是T、T、G、T和T核苷酸碱基，和CenBank数据库中的其他SARS冠状病毒株比较，除第l、2、4和5突变位点(C：G：C：C／T1 T1 T2 T)之外，发现在21712位点(第3个)A／G突变也参于这一遗传标识。因此我们提出5个突位点将17株病毒分为两种基因型的新概念，即C：G：A：C：C与T：T：G：T：T两型，简称C型和T型。ZJ01病毒株属于T基因型．在中国大陆内地是首次发现和发表。突起蛋白基因片断的进化树分析，广州的GZ01 C基因型株进化距离和其他病毒株相差甚远；比较而言，和C基因型BJ0l、CUHK-Wl病毒株较为接近，其次是T基因型的Fl和F2组。5个突变位点(C：G：A：C：C／T：T：G：T：T)的两个发生在编码突起蛋白(S)的基因中，分别是A／G和C／T突变，由此引起的突起蛋白(S)氨基酸变化是Asp／Gly(天门冬氨酸／甘氨酸)和Thr／Ile(苏氨酸／异亮氨酸)。结论 这些基因型特征和变异是否会引起生物学及临床症状的差异是非常值得重视的。     

单纯疱疹病毒和沙眼衣原体与慢性宫颈炎的关系

单纯疱疹病毒和沙眼衣原体与慢性宫颈炎的关系温州医学院微生物学教研室包其郁张丽芳陈向敏陈韶温州医学院附属第二医院妇产科王玉环朱雪琼陈文兵单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）和沙眼衣原体（ＣＴ）是引起性传播性疾病（ＳＴＤ）的主要病原体，且与宫颈疾病，尤其是宫颈...     

2株SARS相关冠状病毒主要结构蛋白基因的多态性分析

目的:分析2株SARS相关冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus,SARS-CoV)HK21378和BJi04的主要结构蛋白基因序列的多态性以及蛋白质结构变化与功能的关系.方法:提取组织培养物中的SARS-CoV基因组RNA,对RT-PCR产物进行测序;以GZ02为参照序列,对蛋白质编码序列进行基因多态性分析和蛋白质结构与功能关系分析.结果:①与SARS-CoV GZ02株相比较,HK21378和BJi04主要结构蛋白编码序列共有14个变异位点,其中9个变异位点为两者共有,3个变异位点见于HK21378,2个变异位点见于BJ104;与GenBank数据库已发表的103株SARS-CoV基因组数据比较,变异位点22901(T→G)为BJ104特有,未见于已发表的其他SARS-CoV基因组中;在14个多态位点中,有5个多态位点为同义突变,其余9个为非同义突变.②14个变异位点中有11个变异发生在S蛋白编码区,其碱基变异频率为3.7/kb;2个见于M蛋白编码区,其碱基变异频率为3.0/kb;1个见于N蛋白编码区,碱基变异频率为0.8/kb;而E蛋白编码区未见变异位点.结论:SARS-CoV的主要结构蛋白编码区容易发生变异,尤其是膜表面S蛋白和M蛋白编码区.     

SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因克隆和变异分析

目的:获得SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因的克隆.方法:将SARS病毒RNA基因组逆转录合成cDNA,PCR得到阳性条带,将其亚克隆到pUCm-T载体中进行酶切及测序分析,并与Genbank中核苷酸序列进行同源性分析.结果:阳性克隆经酶切鉴定,目的基因片段长度为1905 bp,与Genbank中另外45株的SARS病毒株的S蛋白S1片段基因比较,共有13个位点发生突变,其中有8处为同义突变,5处为错义突变.结论:成功克隆SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因,为该基因的表达及功能研究奠定了基础.