严重急性呼吸综合征冠状病毒刺突蛋白在酿酒酵母中的表达和纯化

目的构建重组表达质粒pYES6-S，诱导SARS冠状病毒刺突蛋白（spikeprotein）在酿酒酵母中的表达并纯化。方法反转录获得SARS冠状病毒DNA片段，PCR法获得刺突蛋白基因互相重叠的四部分片段，酶切连接成全长，在大肠埃希菌E．coliJM109中构建重组表达克隆pYES6-S，在酿酒酵母巾诱导表达并纯化。结果重组克隆pYES6～S经酶切、测序鉴定确定，插入片段大小、方向、碱基匹配与预期一致，获得1个完整的刺突蛋白基因，表达产物纯化后，电泳鉴定，相对分子质量大小近110000。结论 成功克隆SARS冠状病毒刺突蛋白基因全长，并在酿酒酵母中诱导表达成功，有助于抗SARS分子疫苗的研究。     

Solexa测序法在肺炎克雷伯菌质粒基因组测序中的应用

Solexa测序方法以单分子阵列技术为基础[1],具有所需样品量少、高通量、高精确性、拥有简单易操作的自动化平台和功能强大等特点.可以同时检测上亿个核苷酸片段,在同一个芯片或几个芯片上花费很少的成本(只需常规方法的1%)就可测试全基因组.     

肠道杆菌耐药性及其耐药相关Ⅰ类整合子可变区结构与进化

目的：了解大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌临床菌株耐药性,及其Ⅰ类整合子分布、可变区耐药基因盒与分子进化关系。 方法：采用K-B法检测大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌对12种药物的敏感性。采用PCR及其产物测序检测上述菌株中Ⅰ类整合子携带率及可变区耐药基因盒。采用Clustal X和MEGA软件分析Ⅰ类整合子基因盒中耐药基因分子进化关系。 结果：鲍曼不动杆菌对临床常用青霉素类和头孢菌素类抗生素耐药率为54.2%～100%,大肠埃希菌和阴沟肠杆菌对菌素类抗生素耐药率也高达41.6%～62.5%。62.5%（15/24）大肠埃希菌、67.9%（19/28）阴沟肠杆菌、83.3%（20/24）鲍曼不动杆菌检出Ⅰ类整合子,81.5%（44/54）Ⅰ类整合子呈现为4种单条带谱型,其余为3种双条带谱型。Ⅰ类整合子可变区耐药基因盒中存在aac(6′)、sad(3″)、aad(2″)、cat(4′)和dfr（7、A13和15）耐药基因,可分别介导细菌对氨基糖苷类、氯霉素和磺胺类抗生素耐药。根据二氢叶酸还原酶基因序列差异,上述菌株携带的Ⅰ类整合子可分成4个分子进化组。 结论：上述肠道杆菌耐药情况严重并携带高含多种耐药基因盒的Ⅰ类整合子,Ⅰ类整合子有4条不同的进化途径。     

肝病实验诊断项目分类方法研究

肝病实验室诊断项目的分类国内外长期以来均单一使用“肝功能试验”,这严重阻碍了几十年来对肝病的研究和防治所取得的成就在临床上的应用。为消除某些误解,便于临床使用,本研究将诊断肝病敏感特异的实验项目与肝病病理改变的新进展相     

大肠埃希菌质粒氨基糖苷类耐药基因分布及多态性研究

目的 通过大规模测序研究临床分离的大肠埃希菌的质粒基因组所携带的氨基糖苷类耐药基因分布及其多态性.方法 收集4年临床分离非重复的320株大肠埃希菌.菌株分为两个部分,碱裂解法提取全部质粒,Solexa测序获得大规模的短序列.采用比较基因组学和分子进化方法分析两个样本所含的氨基糖苷类耐药基因类型及丰度的差异,研究氨基糖苷类耐药基因存在的核苷酸多态位点.结果 测序法获得两批数据,E1短序列总数为11 077 768,可以定位到参照序列上为71 528（0.646%）.E2短序列总数为9 377 792,可以定位到参照序列上是49 944（0.532%）.两个样本中共有9个氨基糖苷类耐药基因型,strB基因最多,其次是strA、aacC2.两个样本中9个氨基糖苷类耐药基因共发现67个单核苷酸多态性（SNPs）位点,约50%为非同义突变.同一个位点的A、G二核苷酸多态现象常见.结论 此次样本中大肠埃希菌质粒上分布多种氨基糖苷类耐药基因.存在着大量的SNPs.     

钙离子通道基因CACNA1C多态性与原发性高血压病的关系研究

目的:探讨钙离子通道基因CACNA1C的SNP位点rs10848683C/T、rs2299661C/G与原发性高血压的关系。方法:采用多重聚合酶链反应方法及基质辅助激光解析-飞行时间质谱分析技术对413例中国汉族原发性高血压患者以及372例正常对照CACNA1C基因rs10848683C/T、rs2299661C/G的等位基因进行检测,观察各基因型频率及等位基因频率。结果:原发性高血组rs10848683 T等位基因频率与对照组相比无明显差异(58.24%:60.69%,P>0.05),OR=0.472,95%C I:0.382-1.441;原发性高血组rs2299661 G基因频率与对照组相比无明显差异(63.80%:64.83%,P>0.05),OR=1.255,95%C I:0.636~2.477。结论:CACNA1C rs10848683C/T rs2299661C/G基因多态性与中国汉族人群原发性高血压的发生不具有关联性。     

SARS冠状病毒CT基因型发现及相关特征

目的 研究SAPS冠状病毒基因型及相关特征。方法 对杭州市首例SAPS病人分离的SAPS冠状病毒ZJ01株进行全基因组测序，并在GenBank数据库登录。记录号：AY297028，版本号：gi：30910859。整个全基因组由29715bp组成。使用GeaBank数据库中最新登陆的SARS病毒的基因组进行序列比对、突变点分析和多态性分析、特殊片段的系统进化分析。结果 发现在ZJ0l株的9391、17555、21712、22213和27819位点，分别是T、T、G、T和T核苷酸碱基，和CenBank数据库中的其他SARS冠状病毒株比较，除第l、2、4和5突变位点(C：G：C：C／T1 T1 T2 T)之外，发现在21712位点(第3个)A／G突变也参于这一遗传标识。因此我们提出5个突位点将17株病毒分为两种基因型的新概念，即C：G：A：C：C与T：T：G：T：T两型，简称C型和T型。ZJ01病毒株属于T基因型．在中国大陆内地是首次发现和发表。突起蛋白基因片断的进化树分析，广州的GZ01 C基因型株进化距离和其他病毒株相差甚远；比较而言，和C基因型BJ0l、CUHK-Wl病毒株较为接近，其次是T基因型的Fl和F2组。5个突变位点(C：G：A：C：C／T：T：G：T：T)的两个发生在编码突起蛋白(S)的基因中，分别是A／G和C／T突变，由此引起的突起蛋白(S)氨基酸变化是Asp／Gly(天门冬氨酸／甘氨酸)和Thr／Ile(苏氨酸／异亮氨酸)。结论 这些基因型特征和变异是否会引起生物学及临床症状的差异是非常值得重视的。     

单纯疱疹病毒和沙眼衣原体与慢性宫颈炎的关系

单纯疱疹病毒和沙眼衣原体与慢性宫颈炎的关系温州医学院微生物学教研室包其郁张丽芳陈向敏陈韶温州医学院附属第二医院妇产科王玉环朱雪琼陈文兵单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）和沙眼衣原体（ＣＴ）是引起性传播性疾病（ＳＴＤ）的主要病原体，且与宫颈疾病，尤其是宫颈...