异基因骨髓源间充质干细胞对BXSB小鼠T、B细胞的影响

目的：探讨异基因骨髓源间充质干细胞（Bonemarrow derived mesenchymal stem cells，BMSCs）对BXSB小鼠T、B细胞增殖、活化及功能成熟等方面的影响。方法：采用。H．TdR掺入法、FACS法、EIJSA等方法检测BMSCs对BXSB小鼠T、B细胞的影响。结果：BALB／c小鼠的BMSCs在不影响BXSB小鼠T细胞诱导活化的基础上抑制其诱导增殖；可降低由ConA诱导的CD4^＋IL^＋细胞的数量，而提高由ConA诱导的CD4^＋IFN-γ^＋细胞数量。对于B细胞，BALB／c小鼠的BMSCs可以抑制其增殖、活化及IgG的分泌。另外，BALB／c小鼠的BMSCs可以抑制BXSB小鼠B细胞上CIMOL的异位表达。结论：异基因BMSCs对自身免疫病小鼠的T、B细胞有一定的调节作用。     

骨髓源间充质干细胞在异基因小鼠免疫器官内的分布及其免疫功能调节作用

目的：探讨骨髓源间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC)在异基因小鼠免疫器官内的分布及其免疫调节作用。方法：以CM-Dil荧光染料示踪BMSC的体内分布情况，并辅以PCR检测Y染色体的方法进一步鉴定；体外实验采用MTT法、ELISA和FACS等方法检测BMSC的免疫调节作用。结果：BMSC可进入并较长期(30天)存在于异基因小鼠免疫器官内；在体外，BALB／C小鼠的BMSC对由ConA诱导的BALB／C和C57BL／6(B6)和BXSB小鼠的T细胞增殖均有抑制作用；而对前两种小鼠由12S诱导的B细胞增殖和分泌k方面表现为促进作用，对BXSB小鼠由IPS诱导的B细胞增殖和k分泌有抑制作用。BALB／C小鼠的BMSC对BALB／C和B6小鼠由ConA诱导的IL-4生成细胞的数量无明显影响，却可降低由ConA诱导的两种品系小鼠的IFN-γ生成细胞的数量；但对于BXSB小鼠却不同，BALB／C的BMSC可降低由ConA诱导的BXSB小鼠的IL-4生成细胞的数量，而提高由ConA诱导的IFN-γ生成细胞的数量。结论：异基因BMSC不但可进入受体的免疫器官，且可较长期(30天)存在；另外，BMSC对同基因正常、异基因正常和异基因自身免疫病的个体均有一定程度的免疫调节作用。     

亚全能干细胞群生物学特性及移植应用研究

近年来 ,人体干细胞因为其广阔的应用前景而备受重视。我们从胎儿、儿童和成人组织中分离出较多多能干细胞具有更广泛分化潜能的干细胞称之为“亚全能干细胞群”。为干细胞的临床移植实现组织再生修复提供理论基础。1分离与培养多种组织亚全能干细胞群及其生物学特性研究 :①心脏、肝脏、肺脏、肾脏、肌肉、真皮等组织来源干细胞具干细胞形态学特征 ;②超过80 %的细胞都处于G0/G1期 ;③原始干细胞亚群细胞表型具CD34,HLA -DR为阴性 ,CD44、CD29、CD13为阳性等特点 ;④从胎儿多种组织中培养出原始干细胞亚群并可诱导分化为成骨、软骨、…     

明胶微冰胶支架有利于脂肪来源间充质干细胞体外干性维持并提高其体内应用价值

目的研究人脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)与明胶微冰胶材料体外联合培养时,材料是否能维持间充质干细胞的生物学特性。方法 ADSCs种植于明胶微冰胶材料后进行Calcein-AM和PI活细胞染色检测细胞活力,细胞滴度蓝法检测细胞增殖能力,定量PCR检测干性基因OCT4、Nanog、SOX2表达情况,以及在成脂成骨诱导过程比较ADSCs在二维环境和种植于明胶微冰胶材料后的分化潜能。结果 ADSCs在三维明胶微冰胶支架材料中能保持较高活性,增殖能力不受影响,干性基因表达上调,成脂成骨分化相关基因表达水平比二维诱导环境低。结论明胶微冰胶可以为ADSCs提供一个较二维培养更好的微环境,有利于ADSCs体外干性维持,从而在干细胞移植法治疗相关疾病时以非侵入性的细胞传递方式发挥更长期的应用价值。     

肾缺血-再灌注损伤模型中Flk-1+间质干细胞参与损伤修复的机制研究

目的:研究Flk-1 骨髓间充质干细胞(bMSC)移植治疗损伤性疾病有效的机制。方法:建立肾缺血-再灌注小鼠模型。分别在建立模型后1 h和10 d移植分离培养的小鼠Flk-1 bMSC,作为急性期治疗组和慢性期治疗组。在移植bMSC后的不同时间点(3 d、10 d和6个月)用免疫组化方法检测移植的EGFP小鼠骨髓来源的Flk-1 bMSC归巢及损伤肾组织中增殖细胞的比例,用Masson染色检测长期损伤后肾纤维化形成情况。结果:与模型组比较,急性期治疗组的肾组织病理损伤及炎症程度明显减轻,后期恢复良好。慢性期治疗组bMSC移植后未见明显的修复作用。PCNA染色结果显示,急性期治疗组第3 d时PCNA阳性细胞数量最多,而对照组在第10 d时PCNA阳性细胞数开始升高,提示bMSC移植后促进内源性修复提前出现。EGFP免疫组化染色显示移植的bMSC大量分布于肾间质区域,少量分布于肾小管部位。结论:Flk-1 bMSC能有效地治疗损伤性疾病,其主要机制包括减轻急性期的炎症反应及促进内源性肾小管上皮细胞增殖修复。而bMSC直接分化参与的修复并非其移植治疗有效的主要机制。     

Ferumoxide标记Flk1＋＋CD31＋-CD34-人骨髓间充质干细胞及其在食蟹猴脑内移植示踪观察

目的探讨Ferumoxide-PLL标记Flk1 CD31-CD34-人骨髓间充质干细胞(hBMSC)的方法及其在食蟹猴脑实质内移植活体示踪的可行性。方法采用Ferumoxide-PLL标记hBMSC,台盼蓝染色、普鲁士蓝染色和透射电镜扫描鉴定标记效率及细胞活力。体外磁共振成像(MRI)分别扫描标记和未标记细胞,计算T2*的弛豫时间和弛豫率(R2*)变化。通过立体定向手术将标记的hBMSC移植入食蟹猴右侧基底节区,采用MRI扫描活体示踪细胞。采用免疫组织化学、普鲁士蓝和HE染色对脑组织切片进行干细胞存活、分化及病理学研究。结果Ferumoxide-PLL标记hBMSC效率为96%,普鲁士蓝染色、电镜可显示标记hBMSC细胞质内铁颗粒。1×106和5×105两组Ferumoxide-PLL标记细胞的T2*的弛豫时间分别为68.86和79.88ms,而未标记细胞分别为12.71和15.24ms。标记细胞的R2*分别为78.68和65.61/s,分别是未标记细胞(14.52和12.52/s)的5.4和5.2倍。移植后3周MRI扫描T2WI仍可发现hBMSC呈明显的低信号。病理及免疫荧光结果显示hBMSCs在移植区大量存活,移植区有大量新生血管,但未见hBMSC向神经细胞分化。结论Ferumoxide-PLL可高效标记hBMSC,能显著增加其MRI图像对比度。MRI可活体示踪干细胞。移植入食蟹猴脑内的hBMSC可大量存活并促进新生血管形成。     

异基因脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞小鼠移植后嵌合体形成及免疫耐受检测

目的:探讨器官移植中脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞诱导免疫耐受的可能性.方法:20只C57BL/6小鼠经致死量射线照射后随机等分为2组,实验组移植C57BL/6小鼠骨髓细胞和BALB/c小鼠脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞,对照组仅移植C57BL/6小鼠骨髓细胞,以CM-DiI荧光染料示踪脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞的体内分布情况,并以PCR方法检测Y染色体的存在以进一步鉴定.以皮肤移植实验观察脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞移植小鼠对供体来源组织器官移植物的反应性,以未移植Flk1 CD31-CD34-细胞小鼠为对照.结果:脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞可进入并较长期(30 d)存在于异基因小鼠免疫器官内;在细胞移植组小鼠脾脏组织中可检测到供体来源T细胞占受体脾细胞的6.68%;脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞移植组小鼠供体来源皮肤移植物存活＞90 d,未处理组为8～9 d.结论:异基因脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞移植后可形成稳定嵌和体,并诱导特异性免疫耐受的产生.     

子宫内膜间质肉瘤与特殊类型良性平滑肌瘤MR影像学特征差异的探索

目的 探讨子宫内膜间质肉瘤(endometrial stromal sarcoma, ESS)与特殊类型良性平滑肌瘤[包括富于细胞性平滑肌瘤(cellular leiomyoma, CL)、奇异核平滑肌瘤(leiomyoma with bizarre nuclei, LBN)以及静脉内平滑肌瘤病(intravenous leiomyomatosis, IVL)]的MR影像学特征差异。方法 回顾性分析2010年1月～2022年10月我院手术病理资料，纳入ESS 10例和特殊类型良性平滑肌瘤24例(非IVL和IVL各12例，其中非IVL组包括8例CL和4例LBN)。由2位放射科医生评估术前MR图像，包括肿瘤中心位置、径线大小、边缘模糊范围、“蠕虫样延伸”征、弥散加权成像(diffusion weighted imaging, DWI)明显弥散受限区占比，测量肿瘤DWI信号强度和表观弥散系数(apparent diffusion coeffecient, ADC)值，以肿瘤测值比正常组织相应测值计算标化值。结果 与非IVL和IVL相比，ESS肿瘤中心较多位于宫腔(3/10 vs. 0/12和...     

寻常型银屑病患者AMSCs的分离培养和免疫调控功能鉴定

目的对比寻常型银屑病患者和健康人来源的脂肪间充质干细胞(AMSCs)的表型、周期、成脂和成骨分化能力及免疫调控功能差异,探索患者AMSCs在银屑病发病机制中的作用。方法体外分离培养AMSCs,用流式细胞计量术检测AMSCs的细胞表型和周期;用油红O和碱性磷酶染色鉴定AMSCs的成脂和成骨分化能力;用PCR和ELISA检测AMSCs表达抑炎或促炎因子;通过基因表达谱芯片筛选两组AMSCs的免疫差异表达基因。结果健康人和银屑病患者AMSCs均高表达CD29、CD44及CD73和低表达CD45、CD31及HLADR。而且,都可分化成骨细胞和成脂细胞,但银屑病组AMSCs增殖趋缓(P0.05),成脂分化能力较强。银屑病组较对照组AMSCs表达或分泌的抑炎因子IL-10、IDO及TGF-β等下降(P0.05),而TNF-α及IFN-γ等促炎细胞因子增强(P0.05)。银屑病组AMSCs的JAK-STAT通路与对照组比明显下调(P0.05)。结论寻常型银屑病患者AMSCs较正常人的增殖和成脂分化能力出现异常,免疫抑炎调控能力减弱,推测可能与JAK-STAT免疫相关通路下调有关。     

骨髓间充质干细胞移植治疗难治型原发性胆汁性肝硬化初探

目的 评价骨髓间充质干细胞(BM-MSC)移植治疗难治型原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的有效性和安全性.方法 入组10例对熊去氧胆酸(UDCA)生化应答不良的难治型PBC患者,自愿提供健康一级亲属作为供者,在之前治疗基础上,进行BM-MSC移植治疗1次.观察治疗时不良反应及治疗后第1、3、6、12个月的临床表现、生化指标、肝脏病理等方面变化.计量资料的比较采用配对t检验.结果 ①异基因BM-MSC移植安全性好,未出现移植相关不良事件;②难治型PBC患者在BM-MSC移植后,在“瘙痒”、“社会功能”及“情绪”等生活质量方面有所改善;③异基因BM-MSC移植治疗可降低PBC患者的丙氨酸转氨酶[(106±31) U/L与(72±18) U/L,t=2.785,P=0.021]和天冬氨酸转氨酶[(81±15) U/L与(64±12) U/L,t=2.343,P-0.047],差异有统计学意义;④经BM-MSC移植治疗,PBC患者肝脏病理无明显变化;⑤该治疗方法在6～12个月时疗效最佳.结论 异基因BM-MSC移植的安全性好,可改善难治型PBC患者生活质量,降低转氨酶等生化指标,但可能并不改善肝脏病理.