成体干细胞

在胎儿、儿童和成人组织中存在的多潜能干细胞统称成体干细胞.成体干细胞具有自我更新的能力,并且可以分化成与其来源不同的其他组织类型的细胞.一种组织来源的干细胞可分化成各种类型的细胞,即干细胞可塑性.成体干细胞可塑性是成体干细胞应用于临床的基础,但对干细胞可塑性机制的认识学术界仍存在较大的争议,先后有学者提出脱分化、异质细胞群体和细胞融合等学说,但都不能完全解释成体干细胞的可塑性.近年来的研究提示,成体组织中存在多潜能干细胞,我们发现在胚胎发育后的多种组织中都存在一类原始干细胞群体,在体内、外的特殊环境下,这类原始干细胞可分化为不同胚层的组织细胞,我们称其为亚全能干细胞.亚全能干细胞是存在于人体多种组织中的分化潜能介于从人体胚胎干细胞逐渐形成组织多能干细胞的发育过程中的一种原始干细胞亚群.     

胎儿骨髓源性亚全能干细胞分离培养及诱导肝细胞分化研究

目的研究分离胎儿骨髓源性亚全能干细胞及体内、外向肝细胞分化的潜能。方法利用密度梯度离心结合免疫磁珠方法分离胎儿骨髓源性亚全能干细胞，体外培养鉴定，诱导分化。制备肝功能衰竭重度联合免疫缺陷小鼠（severe combined immunodeficiency，SCID）模型。肝原位输注106左右CD105^＋细胞，对照组分别输注106左右的CD105^-细胞或同等体积的培养液。移植细胞后2d、7d、1个月、3个月时分别取3只鼠的血清及组织标本行肝功能和病理学、免疫组织化学检测。结果免疫磁珠筛选后的免疫细胞化学检测CD105呈弱阳性表达；细胞在对数生长期的倍增时间为30h左右；约传10代后进入衰退期；SCID鼠移植细胞3个月后用鼠抗人白蛋白抗体检测小鼠肝脏中的人白蛋白，可见有点状或小灶状表达。结论来源于胎儿骨髓的亚全能干细胞可以在体外及肝脏微环境下转化为肝细胞样细胞。因此进一步深入研究组织微环境在细胞转化中的机制有十分重要的意义，将为开发诱导胎儿骨髓亚全能干细胞的多向分化潜能提供理论依据。     

CD146阳性亚群有作为软骨组织工程种子细胞的应用潜力

文题释义：CD146：也称为MUC18,MCAM,Mel-CAM或S-Endo1,是一种跨膜糖蛋白,同时属于免疫球蛋白超级家族的一员。在人体组织中,CD146阳性细胞被认为是微血管的壁细胞,其具有较强的增殖、迁移及自我更新能力。 组织工程种子细胞：组织工程包括3个关键要素——种子细胞、支架和活性因子,其中种子细胞应具有良好的细胞活性、增殖能力、分化及合成基质等生物功能。 背景：再生医学的发展、组织工程技术的出现为软骨缺损重建提供了新的解决思路。在组织工程中,间充质干细胞是应用广泛的种子细胞,然而干细胞作为一个异质性的细胞群体其不同亚群发挥着不同的功能。因此,应用间充质干细胞关键功能亚群进行软骨修复具有广泛应用前景。 目的：从人脂肪间充质干细胞中分离出CD146阳性亚群细胞,验证其生物学特性及其作为软骨组织工程种子细胞的潜力。 方法：人脂肪间充质干细胞由浙江金时代生物技术有限公司提供,通过流式细胞术对人脂肪间充质干细胞表面标志物进行鉴定,应用免疫磁珠分选方法从人脂肪间充质干细胞中分选出CD146阳性表达的细胞亚群。通过基因芯片检测技术及生物信息学分析技术揭示2种细胞的分子特性;体外诱导2种细胞成软骨分化并进行鉴定;冻存复苏前后检测2种细胞的细胞活性及凋亡情况。 结果与结论：①人脂肪间充质干细胞表达高水平干细胞相关标志物CD73、CD90,不表达造血干细胞相关标志物CD34、CD45、HLA-DR;②生物信息分析结果表明CD146阳性亚群细胞与脂肪间充质干细胞相比在炎症通路及骨骼肌肉系统疾病有不同功能;③CD146阳性亚群细胞能够成球软骨分化,并且其成软骨分化能力要优于人脂肪间充质干细胞;④CD146阳性亚群细胞复苏后凋亡情况和活性均要优于人脂肪间充质干细胞;⑤结果表明,CD146阳性亚群细胞具有良好的成软骨分化潜力,是一种具有前景的软骨组织工程种子细胞。 ORCID: 0000-0003-4210-4708(眭翔) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

干细胞技术与组织器官修复再造

干细胞 (stemcells)对于大多数人来说还是一个陌生的名词 ,由于干细胞功能的阐明及其应用技术的进展使科学家和医生开始真正认识到 ,许多危及生命健康的难治性疾病的治疗需要从生命的源头—干细胞直接入手。1　什么是干细胞 ?干细胞是具有自我复制和多项分化潜能的原始细胞 ,是机体的起源细胞 ,是形成人体各种组织器官的祖宗细胞。从干细胞发育分化过程可以看出 ,精子与卵细胞结合先分化增殖形成若干个子代细胞 ,又称全能细胞 ,后者继续分化增殖形成囊胚。全能胚胎细胞和囊胚内细胞群的细胞统称胚胎干细胞 ,具有形成人体各种组织的全能性。…     

酶消化法分离和培养人源原代跟腱干细胞

目的建立人胎儿来源跟腱干细胞的分离方法,并对人源跟腱干细胞的生物学特性进行鉴定。方法采用酶消化法从胎儿跟腱组织中分离培养跟腱干细胞;通过光学显微镜观察细胞形态;CCK-8法测定细胞增殖能力;流式细胞术检测表面抗原的表达情况;分别用成骨、成脂和成软骨诱导培养液诱导其分化,RT-qPCR鉴定分化标记基因表达;同时对跟腱干细胞蛋白表达进行检测,探究其生物学特性。结果从胎儿来源的跟腱组织中提取的跟腱干细胞具有特征性的细胞形态;在P3代以内,细胞增殖差异无统计学意义;细胞高表达CD44、CD90,不表达CD34、CD45;细胞通过诱导分化后成功向骨、脂肪及软骨细胞分化,相关性基因表达升高;人源跟腱干细胞表达CollagenⅠ、CollagenⅢ、Tenascin-C、Scleraxis。结论酶消化法是分离、培养跟腱干细胞的有效办法,跟腱干细胞表达与跟腱损伤修复有关的蛋白,为跟腱干细胞的鉴定及临床应用提供理论依据。     

采用组织贴壁法从整根脐带分离培养间充质干细胞及其生物学特性的研究

 为了建立从整根脐带中分离培养间充质干细胞(UC-MSCs)的技术,并对其生物学特性进行研究。采用组织贴壁法分离UC-MSCs, 并通过传代进行纯化和扩增培养, 绘制生长曲线：用流式细胞仪检测UC-MSCs表面抗原及细胞周期; 在特定诱导体系中,检测UC-MSCs向脂肪、成骨及软骨分化的能力;采用RT-PCR检测多能干细胞标志多能干细胞标志Oct4, Sox-2, Nanog mRNA水平。结果表明,　成功建立了UC-MSCs分离培养的方法;流式细胞仪检测结果显示, 贴壁细胞均表达CD73 、CD90 、CD105, 不表达造血细胞表型CD34、CD45 和HLA-DR ;细胞倍增时间为(24.04±0.49)h , 细胞周期分析表明,G0～G1 期和S+ G2 + M 期所占比例分别为81.56 %和18.44%;UC-MSCs能够向脂肪、成骨和软骨分化;表达Oct4, Sox-2, Nanog基因。结论：组织贴壁法是一种较好的分离培养UC-MSCs的方法,培养的细胞为具有增殖能力强和更原始间充质干细胞,为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据。     

3种诱导法诱导CD73+脂肪间充质干细胞成心肌细胞效果的比较

目的 从脂肪来源的间充质干细胞（ADMSCs）的混合细胞群中分离纯化出CD73阳性的细胞亚群,证明几种不同诱导法诱导CD73细胞的
成心肌分化潜能。方法 体外分离培养1~3 月龄小鼠的ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73⁺和CD73^-两个细胞亚群。分别培养两组细
胞,利用5-氮杂胞苷（5-aza）、心肌组织裂解液和5-aza+心肌组织裂解液对两组分选出的细胞分别进行成心肌的诱导。利用免疫细胞化学技术
检测3种诱导法的成心肌效果。结果 未分选的ADMSCs可分化为成脂和成骨细胞,分选的CD73⁺细胞具备分化为心肌细胞的良好潜能。3种诱导法
均能诱导CD73⁺ADMSCs向心肌方向分化,5-aza诱导CD73⁺ADMSCs分化为心肌细胞率为（22.99±6.72）%,心肌组织裂解液组心肌细胞率（14.12±5.42）%,5-aza+心肌组织裂解液组心肌细胞率（26.94±6.11）%。3种方法比较,5-aza+心肌组织裂解液的诱导效果最佳（P<0.05）。结论 CD73+比CD73-
的ADMSCs更易于分化为心肌细胞。化学诱导因素和体外模拟心肌微环境,可高效诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌细胞。     

自体外周血造血干细胞移植后造血重建中CD226分子在NK细胞上表达的变化

本文应用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察自体外周血造血干细胞移植患者造血重建中,CD226分子在CD56bright和CD56dimNK细胞亚群表达的变化.结果显示,在自体外周血造血干细胞移植造血重建中,于干细胞回输第12天,CD56 NK细胞占外周血淋巴细胞百分率为26.6%,其中CD56bright亚群,占CD56 NK细胞87.3%;CD56 CD226 细胞占CD56 NK细胞92.1%,CD56brightCD226 细胞占CD56 CD226 细胞89.9%.在自体外周血造血干细胞移植造血重建中,CD56bright亚群是NK细胞造血重建最早出现并占优势的一个亚群, CD226分子可能作为一种分化标记主要表达在CD56bright亚群上.     

磁珠分选U251细胞系中的CD133+细胞及其生物学特性

背景：脑肿瘤干细胞理论认为,脑肿瘤干细胞是脑肿瘤细胞中“种子”细胞,是脑肿瘤发生、浸润和复发的关键细胞。 目的：观察人多形性胶质母细胞瘤U251细胞系中CD133⁺细胞的增殖、分化及体内致瘤性等生物学特性。 方法：运用磁珠分选技术分选U251细胞系中的CD133⁺和CD133^-细胞亚群;MTT法绘制两个亚群细胞的生长曲线;单克隆形成率实验检测2个亚群细胞的增殖能力;免疫荧光检测CD133⁺细胞亚群的多向分化能力;裸鼠移植实验检测2个亚群细胞在裸鼠体内致瘤性的差异。 结果与结论：U251细胞系中只有约4.5%的CD133⁺细胞;分选后的CD133⁺细胞能增殖形成典型的脑肿瘤干细胞球,生长曲线显示CD133⁺细胞增殖能力明显强于CD133^-细胞;单克隆形成率实验显示CD133⁺细胞能形成脑肿瘤干细胞球的细胞比率达到78.5%~92.4%,而CD133^-细胞仅有0.8%~2.4%;CD133⁺细胞能分化为具有GFAP和NeuN成熟表型的肿瘤细胞;CD133⁺的致瘤率为71.42%,而CD133^-细胞无致瘤性。提示U251细胞系中存在少量具有增殖、多向分化与体内致瘤能力的CD133⁺细胞,CD133⁺细胞是符合肿瘤干细胞定义的细胞亚群。     

胃癌单克隆细胞球和CD44＋及CD133＋亚群成瘤能力的比较

目的研究胃癌干细胞亚群的筛选方法,探讨建立胃癌干细胞稳定亚群的可行性。方法利用流式细胞仪从MKN45、MKN25、SGC7901细胞株和人胃癌组织中分选出不同CD44和CD133表型的亚群,比较不同亚群和无血清培养基培养的单克隆细胞球细胞在裸鼠移植瘤模型中的成瘤能力。结果不同细胞的CD44＋和CD133＋亚群在低数量级时几乎不具有裸鼠皮下成瘤能力,在高数量级接种时成瘤能力与母系细胞差异无统计学意义;单克隆细胞球细胞在各数量级下的成瘤能力、瘤体积和生瘤速度均显著高于母系细胞。结论与CD44和CD133等细胞表面标志物筛选法相比,单克隆细胞球细胞可更好的作为胃癌干细胞研究的细胞学基础。     

K562细胞株侧群细胞中部分白细胞分化抗原的表达

背景：白血病侧群细胞表型的研究对于理解肿瘤细胞的异质性和起源、分子标记和靶向治疗等都有积极意义。 目的：鉴定人慢性粒细胞白血病细胞株K562中是否存在侧群细胞,并观察侧群细胞亚群与非侧群细胞亚群中部分白细胞分化抗原的表达差异。 方法：采用流式细胞术检测K562细胞株中是否存在侧群细胞;并进一步分析K562侧群细胞和非侧群细胞两亚群间CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38+、HLA-DR+细胞的表达情况。 结果与结论：经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析结果显示在K562中存在侧群细胞,这部分细胞比例少,为(2.7±0.5)%;统计学分析侧群细胞和非侧群细胞亚群中CD34⁺、CD34⁺CD38^-细胞表达率差异有显著性意义,而CD34⁺CD38⁺细胞表达率和HLA-DR+细胞表达率差异均无显著性意义;侧群细胞和非侧群细胞相比在分化抗原表达上有异质性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

不同代次人胎盘间充质干细胞的生物活性比较研究

目的旨在观察不同代次人胎盘间充质干细胞(PMSCs)体外培养的生物学特性和体外诱导分化潜能,为间充质干细胞临床应用安全性及有效性提供实验依据。方法无菌条件下获取人足月胎儿胎盘组织,通过II型胶原酶消化法分离PMSCs,在常规培养条件下培养至第9代,倒置相差显微镜观察P0、P3、P6、P9代次的间充质干细胞细胞形态;MTT活细胞计数法检测细胞生长增殖能力;流式细胞术分析细胞周期及表面标志物的阳性表达率。同时进行成脂、成骨、成软骨诱导分化,诱导14 d后分别进行油红O染色、茜素红S染色、Masson染色鉴定,观察并比较不同代次PMSCs的多向诱导分化能力。结果 PMSCs具有很强的贴壁能力,主要呈纺锤梭形,不同代次的PMSCs有不同的体外增殖能力,以P0、P3代较强;均高表达CD73、CD90、CD105,低表达CD14、CD34、CD45和CD20。细胞周期中G0/G1期细胞所占比例P0为90.95%、P3为88.97%、P6为85.93%、P9为67.89%,诱导分化实验显示,P6、P9代细胞多向诱导分化能力逐渐降低。结论提示在选择胎盘间充质干细胞作为种子细胞时,应注意选择适宜的扩增代数,以便既能保证足够的细胞数目又能保留细胞最佳的分化能力。     

胚胎肝脏原始细胞表型及生物学特性

背景:目前肝干细胞尚无特异性标志物,从胚胎中建立具有干细胞样特性的肝脏原始细胞群是鉴定及研究肝干细胞的一个可行方法。目的:观察胚胎肝原始细胞表型及生物学特性,寻找肝原始/干细胞候选细胞群。方法:酶消化法分离、培养孕13.5d的BALB/C小鼠胚胎肝原始细胞,免疫细胞化学染色及免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR法测定AFP/Albumin/CK19/c-Met/E-cadherin等肝干细胞表面标记,以及CD45、CD14、SMA等非肝干细胞标记的表达;相差显微镜及透射电镜观察细胞形态结构;流式细胞仪测定细胞周期分布时相;表皮生长因子加二甲基亚砜诱导分化成熟后行PAS糖原染色。结果与结论:实验成功分离得到纯度较高的干细胞,原代细胞多呈集落样生长,小圆形。细胞周期测定提示细胞多数处于静止期,符合干细胞特点。透射电镜观察细胞核浆比例大,细胞器不成熟,呈现原始细胞特点。流式细胞周期测定结果S期占10.8%,G2/M期占10.6%,无异常DNA含量。PAS染色后阳性对照组肝癌细胞的糖原主要表达在靠近一侧的核周边胞质内,呈强阳性;而胚胎肝前体细胞诱导组,核浆比例大,部分细胞胞质内可见较弱的糖原表达,充满胞质。提示实验初步建立表达AFP+Albumin+CK19+c-Met+E-cadherin+标志的集落样生长的肝原始细胞群,其表达多种干细胞表型,具有未成熟肝干细胞特点,可能作为肝干细胞候选细胞。     

人胎儿脑室区神经前体细胞的分离纯化、培养及鉴定

目的建立有效的人胎儿神经前体细胞分离及纯化系统。方法取人自然流产胎儿脑室区(VZ)并制备单细胞悬液,采用免疫磁珠法分离CD133阳性及CD133阴性细胞群,体外培养并比较两者增殖能力。用免疫荧光化学方法检测CD133阳性细胞群中神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达及诱导分化后的多向分化潜能。结果纯化后CD133阳性细胞群体外扩增能力强,在无血清培养体系中能形成神经球并可连续传代,免疫荧光化学法检测表明其nestin抗原阳性,诱导分化后可分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。而CD133阴性细胞在培养体系中多呈单个分散状态,神经球形成数目与CD133阳性细胞有显著性差异(P<0.05)。结论免疫磁珠法可有效分离人胎儿脑内CD133阳性细胞,且该细胞在体外培养体系中具有神经前体细胞的特征。     

人脐带间充质干细胞的分离鉴定及多向诱导分化

背景：脐带间充质干细胞取材方便、无创,不受伦理学限制,比一般干细胞原始,免疫原性小,其应用前景广阔,是一种理想的种子细胞。 目的：分离鉴定脐带间充质干细胞,并诱导其向成骨细胞和成脂细胞分化。 方法：组织块贴壁法分离纯化脐带间充质干细胞,取对数生长期的第3代细胞,观察细胞形态、生长方式;流式细胞仪检测干细胞表型CD90、CD105、CD34和CD45的表达情况,并在体外检测能否将其诱导分化为成脂细胞及成骨细胞。 结果与结论：用组织块法成功分离培养出脐带间充质干细胞,流式细胞学鉴定显示细胞强表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45;能在体外将其成功诱导为脂肪细胞和成骨细胞。结果显示组织块贴壁法能够从人脐带中分离出间充质干细胞,该细胞可向成脂细胞及成骨细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

体外诱导人胚胎干细胞向神经细胞分化的研究进展

<正>胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)是从着床前胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)中分离出来的能在体外培养的一种全能干细胞。它具有在体外可以大量增殖并保持未分化状态和在一定条件下能向内、中、外三个胚层组织和细胞分化的生物学特性。胚胎干细胞也易于进行基因改造操作和制造嵌合体动物,从而成为细胞与个体之间的桥梁以及临床移植治疗新的细胞来源。1998年Thomoson等与shanablott等分别建立了来源于人类胚细胞群和原始生殖细胞的人胚胎干细胞系,科学家们看到了在体外培育所需的组织细胞以取代患者体内的病损组织细胞来治疗多种疑难病的曙光。     

人脐带源间充质干细胞分离培养方法的改进

背景：脐带来源的间充质干细胞因其具有高度的自我更新和多向分化潜能,以及取材方便等优点而日益受到关注。 目的：建立一种改进的人脐带间充质干细胞分离、培养方法,并对其生物学特性进行分析。 方法：无菌条件下获取足月妊娠分娩胎儿脐带,利用改良的组织块贴壁法分离培养脐带间充质干细胞,即将传统组织贴壁法中本应丢弃的组织转移到新的培养瓶中进行二次贴壁培养,取第3代脐带间充质干细胞进行生物学特性分析。 结果与结论：组织贴壁后第5-7天可见有梭形细胞从组织块边缘爬出,第10天左右可形成明显的细胞克隆。将组织块转移到新培养瓶中继续培养,2 d后即可见有细胞爬出,细胞生长速度较快,5 d即可形成细胞克隆。传代后的细胞形态均一,呈成纤维细胞样的长梭形。流式细胞仪检测细胞高表达CD90、CD105,不表达CD34、CD45、HLA-DR。细胞增殖能力旺盛,平均倍增时间为50 h左右,41.24%的细胞处于G₂/S期。体外可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。上述实验结果证明二次贴壁培养出的细胞也具有间充质干细胞的生物学特性,而且通过这种培养方法获得的原代间充质干细胞数是传统方式培养的2倍。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

干细胞移植与消化系统疾病治疗的进展

干细胞是具有自我更新、高度增殖和特异或多向分化潜能的细胞群体[1],即这些细胞既可通过细胞分裂维持自身细胞群的大小,又可进一步分化成为各种不同的组织细胞,从而构成机体各种复杂的组织器官。按照作用不同干细胞分为3类:全能干细胞、多能干细胞及专能干细胞;按照细胞起源的阶段,大致又划分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞具有分化的“全能性”,即能分化成为任何类型的组织和器官,而成体干细胞则是某一类组织或某一胚层组织器官的定向分化细胞,如骨髓造血干细胞、骨髓基质干细胞及内皮祖细胞等。干细胞用于人类疾病的治疗是一个全…     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞来源于着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞，具有全能分化和无限增殖的潜力。在适当条件下，胚胎干细胞可被诱导分化为各种细胞组织，这一特性使其在基础研究、移植治疗和基因治疗中具有诱人的应用前景。     

牙胚组织中可分离得到大量间充质干细胞

背景：已经有研究从牙髓、牙囊和牙周组织中分离得到间充质干细胞。牙胚是牙的前体,能否从中直接分离间充质干细胞,目前未知。 目的：从人流产胎儿牙胚中分离间充质干细胞,检测其生物学特征。 方法：无菌条件下挖出水囊流产胎儿牙床中的整个牙胚,剪碎后分别用胶原酶Ⅱ和胰酶消化,过滤除去颗粒物后,细胞悬液用培养液洗涤,培养、扩增得到贴壁细胞,进行细胞形态学观察、免疫表型测定和多向分化功能鉴定。 结果与结论：经过3次传代后,从单个胎儿牙胚中即可获得超过10⁷形态均匀的、梭形贴壁细胞,其表达CD105、CD73、CD90和CD44等表面标志,不表达CD34、CD45标志;在体外向成骨、成脂分化,在体内可以分化为软骨细胞。提示用贴壁法可从人胎儿牙胚中分离得到大量的间充质干细胞。