人肠癌RKO细胞周期依赖性激抑制因子基因启动子区甲基化状态的研究

目的 探讨人结肠癌RKO细胞周期依赖性激酶抑制因子(CKIs)家族启动子区CpG岛甲基化状态及其甲基化可逆性特征.方法 应用特异性DNA甲基转移酶(DNMTs)抑制剂5-Aza-2]-deoxycytidine(5-Aza-CdR)处理肠癌细胞,甲基特异性聚合酶链反应(Methylation-Specific PCR,MSP)、T-A克隆及DNA测序法分析RKO细胞CKIs家族抑癌基因p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip、p27/kip启动子CpG岛甲基化状态.结果 未经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2基因组DNA胞嘧啶(C)保持不变,这提示在其单链DNA中胞嘧啶呈甲基化状态;而经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip和p27/kip基因组DNA胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,表明在DNA单链中胞嘧啶已呈去甲基化状态.结论 肠癌RKO细胞周期INK4家族(p15ink4b和p16ink4a/CDKN2)基因的启动子区处于异常的高甲基化状态,而KIP/CIP家族(p21/cip和p27/kip)基因未处于高甲基化状态;5-Aza-CdR能较好地逆转肿瘤细胞INK4家族基因DNA高甲基化状态.     

内皮型、诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中的表达

目的 :研究内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在乳癌中表达及与淋巴结转移的关系。方法 :采用免疫组化S P法检测 60例乳癌中eNOS和iNOS的表达。结果 :eNOS和iNOS阳性在乳癌中表达率分别为 75 0 %和71 7%。在淋巴结转移组和无淋巴结转移组中eNOS阳性表达率分别为 66 7%和 83 3 % ,两组间差异无统计学意义 (χ2 =2 2 2 ,P >0 0 5) ,而iNOS在淋巴结转移和无转移组中阳性表达率分别为 53 3 %和 90 0 % ,两组间差异有统计学意义 (χ2 =9 93 ,P <0 0 1 )。结论 :内皮型、诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中高表达 ;iNOS的表达与乳腺癌的淋巴转移相关     

人组织中大肠癌负相关基因ST13的蛋白表达研究

目的原核表达大肠癌负相关基因ST13，制备ST13蛋白单克隆抗体，研究人大肠等组织中表达的ST13蛋白的生物学特性。方法将ST13 ORF克隆至GST融合蛋白表达质粒，原核表达并以Glutathione纯化GST—ST13蛋白，以凝血酶切得到ST13蛋白。以GST-ST13融合蛋白免疫小鼠，以ST13蛋白筛选杂交瘤细胞株，按杂交瘤技术制备ST13蛋白单克隆抗体，并以ST13蛋白亲和层析纯化单抗。以该单抗作Western—blot及免疫组化检测临床标本。结果蛋白表达和纯化以SDS-PAGE证实。融合蛋白表达量占大肠杆菌总蛋白20％，每升培养物回收融合蛋白2．5mg，纯度为91．3％。建立了3个ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株，腹水中单抗的ELISA效价达10^4-10^5，并具有对ST13蛋白的高度特异性。Western—blot证实组织细胞中天然ST13蛋白的SDS—PAGE表观分子量约50KD，比其计算分子量大约10KD，但无糖基化修饰。免疫组化表明该蛋白均匀分布于SW480细胞及大肠上皮细胞浆，计算机分析系亲水性分子。免疫组化还表明该蛋白可表达于大肠、胃及肝等多种组织上皮，但在各种正常组织和肿瘤组织之间，正常组织之间，以及肿瘤组织之间的的着色强度不一。结论原核表达了ST13蛋白，制备了相应的单抗，建立了检测组织标本中ST13蛋白的方法。研究表明人组织ST13蛋白系表观分子量50KD的细胞浆可溶性分子，可表达于大肠等多种上皮组织。ST13蛋白在大肠癌组织呈低表达，在多种正常和肿瘤组织中的表达程度不一。cDNA同源性及蛋白质特性比较表明ST13与Hip(hsp70-interacting protein)为同一蛋白质，提示ST13／Hip经Hsp70等分子伴侣途径而在大肠癌发生发展中起作用。     

大肠癌相关免疫球蛋白新基因SNC73结构与表达研究

目的 研究由减式杂交方法获得的人大肠癌相关基因SNC734 结构和功能。方法 对SNC73的cDNA进行了核苷酸序列测定,分析得到全长序列,并对其编码的蛋白进行了分析及预测;采用In situ-Max荧光原位杂交方法结合荧光R带技术对SNC73在人染色体上的定位作了研究;利用Northern杂交、逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测了SNC73在多种肿瘤细胞系中的表达,及在大肠癌组织与这粘中膜中的表达情况;应用原位杂交／原位PCR技术检测SNC73 mRNA在肠上皮中的表达情况。结果 对SNC73序列及开放阅读框9ORF）进行分析,发现其与免疫球蛋白IgA高度同源,为一免疫球蛋白样基因。该基因定位于人染色体14q3 2。SNC73在大肠癌组织也 肠粘膜的表达有差异（P＜0.05）。SNC73在肠上皮表达阳性。结论 SNC73在大肠癌中低表达,可能为一新的肿瘤标记物,并提示上皮细胞、非淋巴细胞存在IgA类的蛋白。     

比较基因组杂交检测散发性结直肠癌染色体变异的临床意义

目的了解散发性结直肠癌（SCRC）的染色体变异及其与SCRC临床病理特征的关系。方法采用比较基因组杂交（CGH）技术检测40例SCRC的染色体变异情况,分析其与临床病理特征的关系。结果40例SCRC患者CGH检测结果显示．所有病例均有不同程度的染色体臂发生扩增或丢失,平均每例变异数为7．55,扩增数为4．73,丢失数为2．83。染色体扩增区域有20q、12q、13q、7P、7q和16q;缺失区域有18q、5q、4q、8P和17P。结直肠癌TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期患者的染色体总变异数和扩增数、缺失数均高于Ⅰ、Ⅱ期患者。本组患者染色体总变异数、扩增数和丢失数在不同的肿瘤部位、组织学类型和分化程度间比较．差异均无统计学意义。20q的扩增与TNM分期有关。结论染色体变异在SCRC中普遍存在,SCRC的染色体变异数及20q的扩增与TNM分期有关。     

散发性结直肠癌的染色体不稳定研究及其临床病理意义

目的 探讨散发性结直肠癌（sporadic colorectal cancer,SCRC）的DNA倍体异常和染色体畸变的数目、部位及其与临床病理特征之间的关系.方法 将40例SCRC肿瘤标本制备成单细胞悬液,经染色后进行流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测,分析肿瘤细胞DNA倍体;采用比较基因组杂交技术（comparative genomic hybridization,CGH）在全基因组水平对40例SCRC进行染色体畸变检测.结果 40例SCRC患者标本中,二倍体的比例为42.5%,异倍体为57.5%,DNA倍体与TNM分期有密切关系,分期越高,异倍体的比例越高,差异有统计学意义（P＜0.05）.CGH检测的所有病例均有不同程度的染色体畸变,平均每例畸变数为7.55,常见的染色体扩增区域有：20q、12q、13q、7p等,常见缺失区域有18q、5q、4q、8p等.TNM分期中Ⅲ～Ⅳ期SCRC的染色体畸变数高于Ⅰ～Ⅱ期（6.00±2.76 vs 8.70±2.84,P＜0.05）.不同肿瘤部位、分化程度、组织学类型SCRC的DNA倍体差异无统计学意义（P ＞0.05）.二倍体肿瘤的染色体畸变数明显少于异倍体肿瘤（6.35±3.35 vs 8.43±2.59,P＜0.05）.结论 染色体不稳定在SCRC中普遍存在,是SCRC病情进展的基础,染色体畸变比DNA倍体异常更为常见.     

血清蛋白质指纹图谱诊断模型在早期胰腺癌中的应用研究

[目的]利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术和生物信息学方法筛选胰腺癌的血清肿瘤标志物。[方法]用弱阳离子交换芯片（CM10）结合并用SELDI-TOF-MS检测54例胰腺癌样本（22例早期胰腺癌,32例晚期胰腺癌）。用支持向量机（SVM）方法建立辨别模型。[结果]利用筛选出的5个蛋白峰（m/z6667.68、8572.38、2958.76、6441.59、5913.36Da）用于建立区分早、晚期胰腺癌的SVM模型,模型的灵敏度和特异性分别为90.9%和78.1%。[结论]SELDI-TOF-MS技术结合生物信息学方法可找到辨别早期胰腺癌和晚期胰腺癌的标志物,并建立区分模型。     

乳腺癌患者ST13、Hsp70、pS2、雌激素受体和孕激素受体表达及其与生存的关系

目的 研究乳腺癌患者ST13、Hsp70、pS2、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）表达及其与生存关系。方法 选择1993至1994年间有完整随访资料和蜡块的乳腺癌患者45例，以免疫组织化学法检测ER、PR、pS2、Flsp70和ST13在乳腺癌组织中的表达及相关性分析；并进行Ka-plan-Meier生存率分析和COX生存分析。结果（1）本组乳腺癌组织中ER、pS2、PR、ST13和HspT0表达的阳性率依次分别为77．8％、68．9％、66．7％、64．4％和62．2％。其中ST13分别与ER、PR和pS2三者呈显著正相关性（分别为P＜0．01、P＜0．05和P＜0．05）。而ER与PR也呈非常显著的正相关性（P＜0．01）。（2）Kaplan-Meier生存率曲线及LogRank显著性检验发现，仅ST13和HspT0阳性者明显提高乳腺癌患者的5年生存率（P＜0．05）。COX生存分析也发现ST13和Flsp70阳性提高乳腺癌患者5年生存（P＜0．05）。结论 （1）ER、PR、pS2、ST13和Hsp70在乳腺癌组织中均高表达，其中ER与PR及ST13与ER、PR和pS2呈非常显著的正相关性。（2）Kaplan-Meier生存率分析和COX生存分析均提示ST13和Hsp70阳性者明显提高乳腺癌患者的5年生存率（P＜0．05）。     

蛋白质指纹图结合支持向量机生物信息学分析在早期胰腺癌检测中的应用

目的建立早期胰腺癌的血清蛋白质质谱模型,探讨蛋白质指纹图结合支持向量机生物信息学分析在早期胰腺癌诊断中的应用价值.方法选取用22例胰腺癌患者及20例健康者,采用表面增强激光解吸/电离时间飞行质谱(SELDI-TOF-MS)结合弱阳离子交换芯片(CM10)检测分析样本.采用支持向量机方法建立早期胰腺癌和健康者辨别模型.结果共筛选出11个蛋白质峰建立了早期胰腺癌和健康者辨别模型,辨别的敏感性为100%,特异性为95%.结论 SELDI-TOF-MS 技术结合生物信息学方法检测早期胰腺癌具有较高的敏感性和特异性.     

胆管癌染色体DNA拷贝数的变化研究

目的探讨胆管癌全基因组DNA拷贝数的变化特征,寻找与胆管癌相关的癌基因和抑癌基因的染色体候选区域。方法采用比较基因组杂交方法分析18例胆管癌组织基因组的不平衡,即DNA拷贝数的扩增和丢失。结果胆管癌常见的染色体DNA扩增区域是8q、20q、5p、17q;染色体DNA缺失区域为3p、18q、17p、8p、9p。结论胆管癌中存在多条染色体拷贝数的改变,3p、5p、8p、8q、9p、17p、17q、18q、20q等部位可能分别存在与胆管癌密切相关的癌基因和抑癌基因。