原位杂交检测人肿瘤组织中大肠癌相关新基因SNC66的表达

目的：探讨大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌，胃癌，肝癌，肺癌和乳腺癌中的表达以及该基因与肿瘤发生的相互关系。方法：采用cRNA/mRNA原位杂交的方法，用体外转录制备的地高辛标记的cRNA探针对上述3种肿瘤组织及同一患者的相应正常组织作表面情况的配对研究。结果：SNC66基因只在上皮细胞及淋巴细胞表达，且在胃肠道上皮细胞中呈现从隐窝到绒毛顶端的梯度降低表达，淋巴小结内淋巴细胞的表达高于间质离散的淋巴细胞。SNC66基因在不同的肿瘤组织中表达差异很大，其中在大肠癌和胃癌组织中存在明显的表达缺陷。结论：SNC66基因不仅结构上同源于IgAl基因，而且表达行为亦类似于IgAl基因，它在不同肿瘤组织以及肿瘤组织与正常组织之间的表达有差异，且在消化道肿瘤中低表达，可能为一新的肿瘤标记物。     

用原位RT—PCR技术检测大肠癌组织中相关新基因SNC66的表达

目的：探讨在肿瘤组织石蜡切片标本中原位检测内源性基因表达产物的灵敏方法，研究大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌组织中的表达情况以及与大肠癌的相关性。方法：经原位逆转录后进行原位PCR扩增，在扩增过程中掺入地高辛标记的核苷酸（Dig-UTP)并加以检测。比较SNC66在大肠粘膜和大肠癌组织中的表达情况。结果：25个循环时，37例大肠癌组织标本有10例阴性不表达，27例强阳性表达。10个循环时，则14例呈阴性，18例弱阳性，5例强阳性。配对的37例大肠粘膜标本则都呈强阳性表达。结论：原位RT－PCR是一种检测内源性基因低拷贝转录产物mRNA的较灵敏的方法。SNC66基因在大肠癌组织中存在明显的表达降低或缺陷，可作为侯选的抑癌基因加以进一步研究。     

原位杂交检测人肿瘤组织中大肠癌相关新基因SNC66的表达△

目的探讨大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌、胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌中的表达以及该基因与肿瘤发生的相互关系.方法采用cRNA/mRNA原位杂交的方法,用体外转录制备的地高辛标记的cRNA探针对上述5种肿瘤组织及同一患者的相应正常组织作表达情况的配对研究.结果 SNC66基因只在上皮细胞及淋巴细胞表达,且在胃肠道上皮细胞中呈现从隐窝到绒毛顶端的梯度降低表达,淋巴小结内淋巴细胞的表达高于间质离散的淋巴细胞.SNC66基因在不同的肿瘤组织中表达差异很大,其中在大肠癌和胃癌组织中存在明显的表达缺陷.结论 SNC66基因不仅结构上同源于IgAl基因,而且表达行为亦类似于IgAl基因.它在不同肿瘤组织以及肿瘤组织与正常组织之间的表达有差异,且在消化道肿瘤中低表达,可能为一新的肿瘤标记物.     

SNC73基因在结肠癌细胞中的表达及重组的研究

目的 观察上皮来源的肿瘤细胞SNC73（IgHα1）基因的表达,探讨其在上皮细胞中的重组机理。方法 采用逆转录聚合酶链分反（RT-PCR）和Western印迹杂交方法,分析经无血清培养基培养的大肠癌细胞系SW480中SNC73和重组激活基因（RAG1和RAG2）的表达,并对RT-PCR产物进行序列分析;利用免疫组织化学方法检测IgHα1、Igλ和Igκ在SW480中的表达。结果 SNC73、序列进行分析,发现SW480中表达的SNC73基因的恒定区序列与免疫球蛋白A1完全一致。对RAG1和RAG2RT-PCR产物的序列进行分析仪以及Western印迹杂交检测,表明其与前B淋巴细胞表达的完全相同。结论 上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白A1,且轻链为κ：RAG1和RAG2在上皮来源的肿瘤细胞中的表达,提示上皮细胞中的免疫球蛋白A1的重组方式可能与淋巴细胞相同或相似。     

人胃癌组织p73基因mRNA表达的研究

为了解该基因在胃癌发生发展中的作用 ,我们应用反转录多聚酶链反应技术 (ＲＴ ＰＣＲ)对胃癌及正常组织标本中ｐ73ｍＲＮＡ表达水平进行了分析。1　材料与方法1.1　研究对象　　共收集 1999年 10月至 2 0 0 0年 3月天津 2 5 4医院和西南医院手术切除标本 3 6例 ,均未经过放疗和化疗。每例包括原发癌肿和手术切缘的正常胃粘膜。经病理学检查证实肿瘤组织中癌细胞占 80 %以上 ,正常组织无癌细胞。标本放入 -80℃冰箱待检。1.2　引物　　参照文献 [1]合成 1对ｐ73基因的引物扩增其第 1～ 3外显子 ,扩增片段 166ｂｐ ,引物序列 :上游 5′ ＣＧ…     

P73在大肠癌组织中的表达及其意义

目的：研究P73在大肠正常粘膜-腺瘤-癌序列中的表达规律及其与结肠癌发生、发展和转移的关系。方法：采用免疫组化SP法,检测P73在不同大肠粘膜组织中的表达。结果：P73在大肠正常粘膜-腺瘤-癌序列中的表达率呈逐步递增趋势（10%、60%、73.3%）,P73在大肠癌中的阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、组织学类型无统计学意义（P〉0.05）,与肿瘤侵袭深度、有无淋巴结转移及分化程度相关（P〈0.05）。结论：P73在大肠癌组织中高表达,参与了大肠癌的形成、发展,与大肠癌的转移密切相关。检测P73对大肠癌的诊断、分期及预后判断有一定参考意义。     

p73基因在肺腺癌组织中的表达

目的：p73基因在肺腺癌与癌旁正常组织中表达情况及突变的研究。方法：采用竞争性定量RT－PCR和PCR－SSCP方法检测62例肺腺癌及其癌旁非癌组织中p73基因突变情况。结果：（1）通过定量PCR分析，肺腺癌组织中p73的表达量与正常对照组表达量存在显差异（P＜0．01）。（2）在21例中高分化标本中检出9例呈中高表达，在41例低分化标本中检出32例呈中高表达，两之间存在显差异（P＜0．01）；（3）p73基因表达程度在29例Ⅰ-Ⅱ期标本中检出14例呈中高表达，33例Ⅲ-Ⅳ期标本中检出18例呈中高表达，两之间无显差异（P＞0．05）。（4）PCR－SSCP未检测出基因突变。结论：p73基因mRNA的表达可能与肺腺癌发生，发展和分化程度有关，与临床分期无关。     

免疫球蛋白基因的结构,重组与突变

免疫球蛋白基因的结构、重组与突变童竞亚，夏金华（免疫学教研室赣州４１０００）免疫球蛋白（Ｉｇ）由Ｂ淋巴细胞产生，它靠Ｆａｂ部分识别抗原，靠Ｆｃ部分发挥多种免疫效应。Ｉｇ种类繁多，其Ｆａｂ部位因超变区的无穷变化而构成众多特异性体，能与各种相应抗原决定簇...     

SNC19/ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨SNC19／ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响。方法 定向克隆法构建SNC19／ST14基因全长阅读开放框(ORF)的真核表达载体;脂质体转染RKO结肠癌细胞株,筛选阳性克隆;用实时荧光定量聚合酶链反应、Western印迹和免疫组织化学法检测SNC19／ST14蛋白的表达;MTT法测定细胞的群体倍增时间(TD);流式细胞仪测定细胞周期;罗丹明-鬼笔环肽标记细胞的骨架蛋白F-肌动蛋白,用激光共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白的变化;并测定细胞对细胞外基质(ECM)的黏附能力。结果 成功构建了真核细胞表达载体pSecTag2a-SNC19／ST14(ORF),并筛选到稳定表达SNC19／ST14蛋白的RKO-SNC19／ST14细胞;观察到SNC19／ST14使细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的排列发生改变,并使细胞对细胞外基质的黏附能力下降,但SNC19／ST14的表达对细胞增殖、凋亡和细胞周期影响不明显。结论 成功地使SNC19／ST14基因在真核细胞中稳定表达,并发现SNC19／ST14可能与细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的聚集和极化有关,并可能通过此种作用影响到细胞对细胞外基质的黏附能力,但对细胞的增殖、凋亡及细胞周期影响不大。     

减式杂交筛检大肠癌负相关基因的研究

目的在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素。方法采用减式杂交技术筛选大肠癌下调基因。结果共获得４６个在正常肠粘膜中表达、而在大肠癌中低表达或不表达的克隆。其中２个（ＳＮＣ６和ＳＮＣ１９）已被ＮＣＢＩ作为新基因录入，编号分别为Ｕ１７７１４（ＳＮＣ６）和Ｕ２０４２８（ＳＮＣ１９）。其中ＳＮＣ６已完成全序列测定，为２９３２ｂｐ，推测其为编码２７１个氨基酸的蛋白，分子量为３００００。与蛋白数据库比较，最高同源性仅３０％，染色体定位于２２ｑ１３。ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ显示：ＳＮＣ６的表达在大肠癌中低于在相应的正常肠粘膜中，在乳癌中亦有此现象。ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ发现其在肝、肺、前列腺、睾丸、卵巢及Ｋ５６２细胞中的表达高于其它组织。结论ＳＮＣ６可作为新的大肠癌负相关基因加以研究、利用。     

结直肠癌患者P^53基因表达的研究

目的探讨结直肠癌患者与P53基因表达改变的相关性.方法用半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测P53蛋白mRNA的表达水平,比较各组的差异.结果结直肠癌患者P53蛋白mRNA的表达水平从正常粘膜、癌旁组织、腺癌有逐渐降低的趋势,且正常粘膜组与腺癌组比较,差异具有显著性(P<0.05);结论结直肠癌患者与P53蛋白mRNA表达的降低有一定的相关性.     

大肠癌组织与癌旁正常组织基因差异表达图谱及信号通路研究

目的筛查人大肠癌肿瘤组织与相应癌旁正常组织差异表达基因。方法应用NimbleGen基因芯片检测4例大肠癌肿瘤组织及相应癌旁正常组织基因表达谱,并以RT-PCR技术对部分基因芯片检测结果进行验证,利用生物信息学方法对检测结果进行分析。结果大肠癌肿瘤组织和癌旁正常组织差异表达基因共5042条,其中表达水平上调3399条,下调1643条,这些基因涉及多个信号通路。结论本研究结果可为寻找大肠癌分子标记物和探索大肠癌发生的分子机制提供实验依据。     

肺癌中细胞凋亡水平和p73基因的转录表达的研究

目的：通过观察肺癌癌组织,对应癌旁组织和远癌肺组织中细胞凋亡及p73基因转录表达水平的变化,探讨细胞凋亡及P73基因转录表达水平与肺癌发生,发展的关系。方法：采用TUNEL及RT－PCR技术检测32例非小细胞肺癌癌组织,癌旁组织和7例肺良性病变组织,以及对应正常肺组织细胞凋亡和P73 mRNA的表达水平,并结合临床病理学资料进行统计学分析,结果：（1）肺癌组织中的凋亡指数明显高于癌旁肺组织和远癌肺组织（P＜0．01）,细胞凋亡水平与肺癌组织学类型,分化程度和P－TNM分期无明显关系（P＞0．05）;（2）肺癌组织中p73 mRNA表达水平和表达率明显高于癌旁肺组织,远癌肺组织和肺良性病变组织（P＜0．01）;（3）组织中凋亡指数的升高和P73基因转录表达水平的增加呈显著的正相关（P＜0．01）。结论：肺癌组织中存在细胞凋亡水平的升高和P73基因的过度转录表达。     

p73基因甲基化和CEA联合检测在结直肠癌诊断中的意义

目的探讨p73基因甲基化和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)检测在结直肠癌诊断中的临床意义。方法受检者分为三组,即结直肠癌组(A组)64例,结直肠瘤组(B组)78例,健康对照组(C组)142例。另将A、B组患者病灶组织以外5 cm以上,病理组织学诊断为正常粘膜组织的97例标本纳入组织对照组(D组)。采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)行组织、血浆p73基因甲基化测定,并检测血清CEA,比较单独和联合检测对结直肠癌诊断的敏感性和特异性,以及联合检测对结直肠癌诊断接受者的工作特征曲线(receiver operatingcharacteristics,ROC)分析。结果组织与血浆p73基因甲基化阳性率的差异在A、B两组中均无统计学意义(P0.05);三种检测方法的阳性率在对照组-瘤-癌序列中均逐渐升高(P0.01);联合三种检测方法对结直肠癌诊断的灵敏性高于两两方法的联合检测(P0.05),但特异性的下降无统计学意义(P0.05);联合三种检测方法诊断结直肠癌的ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.896,高于三种检测方法中任意两两联合的AUC(0.828,0.837,0.850)。结论联合组织、血浆p73基因甲基化测定及血清CEA对结直肠癌的诊断有重要的临床意义。     

乳癌组织p73基因的分析

目的 :研究p73基因与乳癌的关系。方法 :应用免疫组化、RT PCR等技术检测乳癌组织p73基因的表达情况。结果 :45例乳癌组织p73基因表达阳性者 2 1例 ,明显高于良性乳腺肿瘤 (P <0 .0 5) ;淋巴结转移阳性者p73基因表达明显高于阴性者 (P <0 .0 5)。结论 :p73基因表达增多可能与乳腺癌发病有关     

A novel serine protease SNC19 associated with human colorectal cancer

Objective To study the structure and function of a novel serine protease gene associated w ith human colorectal cancer SNC19.Methods The cDNA sequence was determined by both manual and automatic sequencing techniq ues. The full length cDNA sequence was obtained by the 5’-Rapid Amplification of cDNA Ends technique and web-based analysis. Open reading frame analysis and protein function prediction were also performed. Northern blot was used to det ect the expression of SNC19 in various human normal tissues and tumor cell lines . Fluorescent in situ hybridization combined with fluorescent R-banding techni que was employed to map the SNC19 gene on human chromosome.Results Full length SNC19 cDNA, size 3152 bp, encodes a protein highly homologous to a m ouse serine protease epithin. In normal human tissues, high SNC19 expression le vels were observed in the kidney, pancreas, prostate, small intestine and colon; moderate SNC19 expression levels were observed in the placenta, lung, liver, sp leen thymus, testis and peripheral blood lymphocytes; and extremely low expressi on levels were observed in the heart, brain, skeletal muscle and ovary. In tumo r cell lines, colorectal cancer cells SW480, SW620, SW1116 and Colo205, breast c ancer cell Bcap37 and gastric cancer cells MKN28 and SGC7901 showed high levels of SNC19 expression; cervical cancer cell HeLa-S3, lung cancer PAA, oral epithe lial cancer cell KB and lymphoma cell Raji showed moderate levels of SNC19 expre ssion; and tongue squamous cancer cell Tca8113, leukemia cells HL-60, K562, MOL T-4, lung cancer cell A549 and melanoma cell G361 showed very low levels of SNC 19 expression. SNC19 was mapped to human chromosome 11q24-25. Conclusion SNC19 encodes a novel human serine protease with 855 amino acid residues. As a novel serine protease associated with human colorectal cancer, the expression of SNC19 in various tissues and cell lines may have very important impact on their phenotypes and biological behaviors.