COX-2表达与铝过负荷致小鼠脑损伤关系的初步研究

目的初步研究Cyclooxygenase-2表达与铝过负荷致小鼠脑损伤的关系。方法侧脑室注射铝盐，一天一次．连续5天，建立铝过负荷致小鼠脑损伤模型。美乐昔康．在每次给予铝盐前30min腹腔注射给予，连续5天，并在停止给予铝盐后继续给予10天。以行为学、病理形态学、脑组织MDA含量、脑组织ChAT、APP、Aβ、COX-2蛋白和COX-2 mRNA表达等的改变为观察指标。结果铝过负荷诱导了小鼠明显的学习记忆能力损害、海马神经元损伤、脑组织MDA含量显增加，脑组织APP、A8、COX-2蛋白和COX-2 mRNA表达明显增加，而ChAT蛋白明显降低；美乐昔康给予能以剂量依赖性的方式改善铝过负荷诱导的小鼠学习记忆能力损害、     

中性粒细胞弹性蛋白酶的过表达促进K562细胞增殖并抑制其凋亡

目的利用Ad Easy系统构建携带人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)基因的重组腺病毒表达质粒,并感染K562细胞,观察其对K562细胞增殖和凋亡的影响。方法以急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60的RNA为模板,经反转录PCR得到NE基因的编码区并克隆入穿梭载体p Ad Track-CMV,得到p Ad-NE,经HindⅢ、EcoRⅤ酶切鉴定和测序正确后,将其转化入p Ad Easy-1-BJ5183进行同源重组,得到重组子Ad-NE,经PacⅠ酶切线性化后转染AD293细胞进行包装。14 d之后收获原代病毒,经5轮扩增后,测定病毒滴度,进行PCR鉴定。感染K562细胞后,荧光显微镜初步观察感染效率,同时用流式细胞术检测感染效率;Western blot法进一步鉴定NE是否表达上调;CCK-8法测定细胞增殖情况;流式细胞术测定细胞凋亡和细胞周期变化。结果酶切鉴定及测序结果表明重组穿梭质粒p Ad-NE构建成功;酶切鉴定显示同源重组成功,得到重组子Ad-NE;荧光显微镜表明病毒包装成功;经过5轮扩增后,病毒滴度达到1.64×1012pfu/m L;感染K562细胞后,荧光显微镜观察感染效率达80%左右;Western blot法检测到NE表达上调;CCK-8实验显示NE表达上调后K562细胞增殖能力增强;流式细胞术显示S期细胞明显增多并且细胞凋亡减少。结论过表达NE可促进K562细胞增殖并抑制其凋亡。     

地塞米松衍生物对K562细胞增殖的抑制作用及机制

目的：研究地塞米松衍生物对K562细胞的增殖抑制作用，并对其作用机制进行初步的探讨。方法：以地塞米松为原料合成并纯化得到新的衍生物。用不同浓度的地塞米松衍生物对K562细胞进行处理，通过MTT比色法检测细胞增殖抑制率，电镜法观察细胞凋亡的形态学变化，免疫细胞化学法测定细胞Bcl-2，Fas表达，比色法检测Caspase-3的活性变化。结果：地基米松衍生物能抑制K562细胞的增殖，使Bcl-2表达降低，Fas表达上调，Caspase-3活性增强，诱导K562细胞凋亡。结论：地塞米松衍生物可能通过诱导K562细胞凋亡而抑制细胞增殖。其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制Bcl-2蛋白的表达，上调Fas受体，进而激活细胞内的Caspase-3有关。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

酵母双杂交系统的发展与细胞信号转导研究

酵母双杂交系统是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法,主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与已知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中,通过酵母双杂交系统能较全面真实地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。     

大黄素诱导白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用.方法:采用MTT法检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过Wight-Giemsa染色(W-G染色),在普通光镜下观察细胞的形态学变化;运用Annexin V/PI双标记法检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3、8、9的相对活性,分析大黄素诱导K562细胞凋亡的信号途径.结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24、48、72 h后的半数抑制率浓度分别为80、50、40 μmol/L;处理组细胞在普通光镜下可见典型的凋亡形态学改变;Annexin V/PI双标记法检测到K562细胞在大黄索的诱导下出现早期凋亡并呈剂量依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发caspase-3、8、9的活性增高(P<0.01).结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制和Caspase信号途径的活化有关.     

测定K562细胞培养液中苦参碱浓度变化的反相离子对HPLC研究

本文建立了一种用于测定苦参碱含量的反相离子对高效液相色谱法（ｉｏｎ－ｐａｉｒＨＰＬＣ）。该法比较准确、可靠，分离效果好，灵敏度高。可用于细胞培养液中苦参碱的分离测定及鉴定。结合样品前处理，作者运用此法对苦参碱在Ｋ５６２细胞培养液中的浓度变化情况进行了初步分析。发现在我们研究的实验条件下，Ｋ５６２细胞培养液中苦参碱的浓度先呈线性下降趋势，以后１－３天则浓度维持不变。     

苦参碱对K562细胞培养液中PGE_2含量的影响

目的 :研究苦参碱诱导 K5 62细胞分化的胞外信号。方法 :运用酶联免疫法 ,动态检测苦参碱作用于 K5 62细胞后 ,培养液中 PGE2 含量的变化。结果 :培养液中 PGE2 含量在苦参碱作用于K5 62细胞 2天后有增高 ,并与苦参碱浓度有关。结论 :在苦参碱诱导 K5 62细胞分化的过程中 ,PGE2 含量的增高可能涉及到 PLA2 的激活 ,并且 PGE2 可能作为胞外信号影响 K5 62细胞的增殖与分化。     

酵母双杂交系统在细胞信号转导中的应用

酵母双杂交技术是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法，主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与巳知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中，通过酵母双杂交技术能较全面地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。