苦参碱对K562细胞培养液中PGE2含量的影响

目的：研究苦参碱诱导K562细胞分化的胞外信号：方法：运用酶联免疫法，动态检测苦参碱作用于K562细胞后，培养液中PGE2含量的变化。结果：培养液中PGE2含量在苦参碱作用于K562细胞2天后有增高，并与苦参碱浓度有关。结论：在苦参碱诱导K562细胞分化的过程中，PGE2含量的增高可能涉及到PLA2的激活，并且PGE2可能作为胞外信号影响K562细胞的增殖与分化。     

苦参碱作用K562细胞表面分化抗原表型的改变

近年来 ,肿瘤诱导分化剂的研究日渐增多 ,从中药和天然药物中寻找和提取诱导分化剂是一种新途径。苦参碱是传统中药苦参的有效成分 ,文献报道具有抗癌活性[1] ,对白血病细胞有抑制生长和诱导分化作用 [2 ]。本课题组在前期研究的基础上 [3,4 ]通过流式细胞仪检测进一步表明 :一定浓度的苦参碱可诱导 K5 62细胞向成熟方向分化 ,并具有多向诱导分化作用。1　材料与方法1 .1　苦参碱 :纯度 99% ,由实验室自备。1 .2　细胞培养 :K5 62细胞在含 1 0 %新生小牛血清的 RMPI- 1 640培养液中传代培养。1 .3　苦参碱对 K5 62细胞的作用 :收集对数生…     

前列腺素E2对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2活性的影响及其信号通路研究

目的:观察前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)活性的影响及其信号通路的研究,从而探讨PGE2对前交叉韧带(Anterior cruciate ligament,ACL)的损伤或修复可能的影响。方法:用不同浓度的PGE2处理体外培养的滑膜细胞,处理后12、24、48 h和72 h明胶酶谱法检测培养液中MMP-2的活性;再用合适浓度的PGE2单独或分别与7种信号通路特异性抑制剂同时处理滑膜细胞,明胶酶谱法检测MMP-2的活性,并对其进行相对定量。结果:PGE2呈浓度和时间依赖性地增高滑膜细胞MMP-2的活性。p38、ERK、PKA通路抑制剂SB203850、PD98059、KT5720对PGE2诱导滑膜细胞MMP-2活性的增高无明显抑制作用;而JNK、AP-1和核因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)通路抑制剂SP600125、姜黄素(Curcumin)和Bay11-7082/7085显著抑制了PGE2诱导MMP-2活性的增高,分别使72 h时MMP-2的活性降至43%、25%和16%、11%(P<0.01)。结论:PGE2诱导滑膜细胞MMP-2活性的增加可能是ACL损伤后难以自行修复的原因之一。JNK、AP-1和NF-κB通路可能参与调控PGE2对MMP-2活性的诱导;其中以NF-κB作用最显著,可能为ACL损伤的治疗提供一种新思路。     

苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡

目的 体外研究苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随的细胞凋亡改变.方法 体外培养K562细胞,采用不同浓度的苦参碱诱导K562细胞4 d.分别采用倒置显微镜、透射电子显微镜观察诱导前后细胞的形态学和超微结构改变,进一步采用免疫细胞化学方法检测细胞周期调控蛋白p27kipl表达变化.结果 与阴性对照组K562细胞相比,0.10/gL浓度的苦参碱诱导后K562细胞形态学和超微结构均显示有凋亡特征,同时细胞内p27kipl蛋向表达明显增加.结论 苦参碱在体外诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡.可能与p27kipl蛋白表达增加相关.     

重组人TLR4胞外段对诱导分化成熟的U937细胞TNF-α分泌的影响

目的 观察重组人TLR4胞外段对诱导分化成熟的U937细胞TNF-α分泌的影响.方法 通过G418筛选稳定表达TLR4胞外段的HEK293细胞,用培养液上清作用于诱导分化成熟的U937细胞,通过ELISA观察该细胞TNF-α的分泌变化.结果 稳定表达TLR4胞外段的HEK293细胞培养液上清能减少诱导分化成熟的U937细胞TNF-α的分泌量(P＜0.01),并随剂量增加而降低.结论 表达的重组人TLR4胞外段能与诱导分化成熟的U937细胞表面的TLR4胞外段竞争性结合LPS,干扰LPS所引起的炎症信号转导,引起TNF-α分泌量降低.     

前列腺素E2对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2活性的影响及其信号通路研究

目的：观察前列腺素E2（Prostaglandin E2,PGE2）对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2（Matrix metalloproteinase-2,MMP-2）活性的影响及其信号通路的研究,从而探讨PGE2对前交叉韧带（Anterior cruciate ligament,ACL）的损伤或修复可能的影响。方法：用不同浓度的PGE2处理体外培养的滑膜细胞,处理后12、24、48 h和72 h明胶酶谱法检测培养液中MMP-2的活性;再用合适浓度的PGE2单独或分别与7种信号通路特异性抑制剂同时处理滑膜细胞,明胶酶谱法检测MMP-2的活性,并对其进行相对定量。结果：PGE2呈浓度和时间依赖性地增高滑膜细胞MMP-2的活性。p38、ERK、PKA通路抑制剂SB203850、PD98059、KT5720对PGE2诱导滑膜细胞MMP-2活性的增高无明显抑制作用;而JNK、AP-1和核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）通路抑制剂SP600125、姜黄素（Curcumin）和Bay11-7082/7085显著抑制了PGE2诱导MMP-2活性的增高,分别使72 h时 MMP-2的活性降至43%、25%和16%、11%（P<0.01）。结论：PGE2诱导滑膜细胞MMP-2活性的增加可能是ACL损伤后难以自行修复的原因之一。JNK、AP-1和NF-κB通路可能参与调控PGE2对MMP-2活性的诱导;其中以NF-κB作用最显著,可能为ACL损伤的治疗提供一种新思路。     

苦参碱诱导 K562 细胞合成 γ珠蛋白

目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.     

N-乙酰氨基葡萄糖诱导白血病细胞K562向巨噬细胞分化

目的 :研究N 乙酰氨基葡萄糖对白血病细胞K5 6 2的诱导分化效果 .方法 :利用hexamethylenebisacetamide(HMBA)和N 乙酰氨基葡萄糖 ,分别用不同浓度对白血病K5 6 2细胞进行诱导分化实验 ,通过联苯胺、萘酚AS D氯醋酸酯酶及吉姆萨 瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪证实其分化方向 .结果 :化学诱导剂N 乙酰氨基葡萄糖对K5 6 2细胞在0 .5mmol·L-1浓度作用 2d后有良好的诱导分化效果 ,诱导K5 6 2向巨噬细胞分化 .与HMBA相比 ,N 乙酰氨基葡萄糖在作用浓度和作用时间上都有明显优势 .结论 :N 乙酰氨基葡萄糖可能诱导K5 6 2细胞向巨噬细胞方向分化     

苦参碱对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：观察苦参碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：以K562细胞为实验对象,采用体外培养技术,通过细胞生长曲线、细胞形态、乳酸脱氢酶（LDH）活性测定方法观察苦参碱的作用。结果：浓度为0．2－0．3mg/ml的苦参碱对K562细胞有明显的增殖抑制与诱导分化作用,实验组细胞的数量,形态和生化代谢都发生了变化。结论：这一结果将对白血病的诱导分化治疗提供有力的实验依据。     

天麻素对氯化钾诱导的培养神经细胞释放谷氨酸的影响

目的　考察天麻素对由氯化钾诱导的神经细胞释放谷氨酸的影响。方法　通过高效液相 (HPLC)测定人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞系培养液中谷氨酸的含量。结果　当细胞外液中有钙离子时 ,随着氯化钾浓度的增加 (10～ 30mmol/L) ,释放到培养液中的谷氨酸的含量也相应增加 ;当培养液中去除钙离子时 ,细胞外液中谷氨酸的浓度不随氯化钾浓度的变化而改变。在含钙培养液中加入 4mg/ml的天麻素 ,再加入 10～ 5 0mmol/L氯化钾 ,未见细胞外液中的谷氨酸含量增高。结论　氯化钾诱导的SH SY5Y细胞谷氨酸的释放增多与细胞外液钙离子内流有关 ;天麻素可以颉颃由氯化钾诱导的神经细胞谷氨酸释放增加的作用。     

尿多酸肽诱导慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药细胞生长抑制及分化的体外观察

目的观察尿多酸肽（CDA-2）在体外对慢性粒细胞性白血病（CML）伊马替尼（IM）耐药细胞株K562R生长抑制及诱导分化的作用。方法MTT和集落形成实验观察CDA-2对CML细胞株K562、IM耐药细胞株K562R、IM耐药和非耐药CML患者骨髓细胞生长抑制作用。吉姆萨染色观察细胞形态,膜联蛋白-V（Annexin-V）／碘化丙啶（PI）染色分析细胞凋亡,流式细胞术分析细胞分化抗原CD11b、CD14的表达,反转录PCR（RT-PCR）检测细胞分化相关基因、细胞周期调节基因及DNA甲基化转移酶基因的表达。结果CDA-2均可抑制K562、K562R、IM耐药和非耐药CML患者骨髓细胞的生长,且对K562R细胞和IM耐药CML患者骨髓细胞的生长抑制更明显;CDA-2改变了K562和K562R细胞形态,诱导细胞向成熟分化,并引起细胞周期在G1期的停滞;这种停滞可能与CDA-2抑制DNA甲基转移酶活性,逆转细胞周期调节基因的甲基化状态有关。结论CDA-2在体外对K562R细胞株有很强的生长抑制和诱导分化的作用,提示CDA-2可能成为治疗IM耐药的CML患者的一种新药。     

人参皂甙对K562细胞表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响

目的：进一步探讨人参皂甙(TSPG)诱导K562细胞分化的作用机制及了解K562细胞的生物学特点，为开发TSPG临床应用提供理论与实验依据。方法：采用形态学观察和流式细胞术等方法，研究TSPG在诱导K562细胞向较为成熟细胞分化过程中，对其表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响。结果：TSPG可诱导K562细胞向较成熟的红系、粒系细胞分化，作用后细胞表CDl5、HIR2、EPO-R和GM—CSF—R的阳性细胞率均有所升高。结论：K562细胞为分化受阻滞的异常造血祖细胞，其生物学特点与正常人多向造血祖细胞(CFU—Mix)相似；TSPG诱导K562细胞成熟分化的作用机理可能与TSPG促进K562细胞EPO-R、GM—CSF—R表达升高有关。     

Bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡

目的:研究bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应. 方法:合成bcl-2反义核酸(ASON)导入K562细胞,应用Western blot法检测bcl-2蛋白的表达,TUNEL技术、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡. 结果:bcl-2反义核酸(ASON)能明显抑制bcl-2蛋白的表达. 青蒿琥酯在1～7 mg/L浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性, 7 mg/L青蒿琥酯作用72 h的K562细胞株A值最低. 原位细胞凋亡检测可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞株对青蒿琥酯的诱导凋亡作用更加明显;FCM法出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡主要发生在G1/S期,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞凋亡率显著增加. 结论:青蒿琥酯在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,bcl-2反义核酸可增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的作用.     

P-170糖蛋白在多药耐药(MDR)K562/ADM细胞中的定位研究

目的：确定P-170糖蛋白在多药耐药（MDR）K562/ADM细胞中表达的位置，方法：通过免疫反应并利用流式细胞仪（FCM）检测表达P-170糖蛋白细胞的百分含量；用免疫电镜技术检测P-170糖蛋白在细胞中的位置及其表达水平。结果：敏感株K562细胞与耐药株K562/ADM细胞对P-170糖蛋白的表达有非常明显的差异；不同的K562/ADM细胞表达P-170糖蛋白的量差别较大；少量的K562细胞也有极少的P-170糖蛋白的表达，细胞表达的P-170糖蛋白位于细胞膜上，结论：多药耐药K562/ADM细胞表达的P-170糖蛋白最终被镶嵌在细胞膜上；在该蛋白质从被表达，修饰和转运到细胞膜上的过程中，该蛋白质不具有成熟P-170糖蛋白的特异构象。     

核苷类似物对K562细胞的抗增殖和诱导分化作用

目的：探讨核苷类似物阿昔洛韦（ACV）,更昔洛韦（GCV）对人白血病细胞的抗增殖和诱导分化作用。方法：将ACV、GCV分别加入K562细胞培养4d,测定其活细胞数目,克隆形成率,联苯胺染色阳性率,观察光镜形态,组织化学染色,并进行流式细胞分析,端粒酶检测。结果：在ACV,GCV的作用下,K562细胞的增受抑,生长分数降低,并且向具有合成血红蛋白能力的细胞分化,结论：核苷类似物ACV,GCV对K562细胞具有抑制增殖和诱导分化作用,该结果为慢性粒细胞白血病的治疗提示了新的途径。     

人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 将人红白血病细胞株K562细胞传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的人参皂甙单体Rg3,并设置空白对照组.用MTT比色法观察Rg3对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度人参皂甙单体Rg3对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR);硝基四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力测定试验检测分化指标;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱.结果 MTT比色法测定显示,人参皂甙单体Rg3作用于K562细胞后可以抑制其增殖并诱导其凋亡,且呈剂量依赖性.结论 人参皂甙单体Rg3能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

Dopamine inhibits proliferation, induces differentiation and apoptosis of K562 leukaemia cells

Background Dopamine exerts its effects mainly in nervous system through D1, D2 or D3 receptors. There are few reports dealing with the effects of dopamine on leukaemia cells. However, some dopamine agonists or antagonists do show biological effects on some types of leukaemia cells. Here, we report the effects of dopamine on the proliferation, differentiation and apoptosis of K562 leukaemia cells.Methods Proliferation was determined by MTT assay and cell counting both in liquid and semisolid cultures. Differentiation was verified by morphology, benzidine staining and flow cytometry. Apoptosis was checked by Hoechst 33258 staining and flow cytometry. The two groups were untreated group and treated group (dopamine 10(-9) mol/L―10(-4) mol/L).Results In liquid culture, MTT assay and colony assay, dopamine inhibited proliferation of K562 cells. Inhibition rate was 29.28% at 10(-6) mol/L and 36.10% at 10(-5) mol/L after culture for 5 days in MTT assay. In benzidine staining and CD71 expression, dopamine induced K562 cells toward erythroid differentiation by increased 155% at 10(-6) mol/L and by 171% at 10(-5) mol/L after culture for 5 days in benzidine staining. In Hoechst 33258 staining and flow cytometry, dopamine induced K562 cells toward apoptosis. The sub G1 peak stained by PI was 14.23% at 10(-4) mol/L dopamine after culture for 3 days compared with the control (0.81%) in flow cytometry.Conclusion Dopamine inhibites proliferation and induces both differentiation and apoptosis of K562 leukaemia cells.     

全反式维甲酸诱导K562细胞分化过程中线粒体铁蛋白表达的研究

目的 研究K562白血病细胞在全反式维甲酸(ATRA)诱导分化过程中线粒体铁蛋白(MtF)、运铁蛋白受体1(TfR1)和铁蛋白(Fn)mRNA表达水平的变化情况,探讨MtF在白血病细胞增殖和铁代谢方面的作用.方法 K562细胞加入ATRA(终浓度1 μmol/L)中诱导培养,分别于第1、3、5 d收集细胞,分别进行:①瑞士染色观察各时间点的细胞形态;流式细胞学检测细胞表面分化抗原CD13的表达;②Trizol法提取各时间点细胞的RNA,通过半定量RT-PCR方法 检测各时点MtF、TfR1和Fn基因的表达水平.同时设未用ATRA诱导培养的K562细胞为对照组.结果 1 μmol/L的ATRA可诱导K562细胞向粒系细胞分化,诱导培养第5 d,细胞表面CD13的表达水平增加,诱导分化率为21.2%,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).诱导分化前K562细胞即有MtF mRNA表达,但随细胞诱导时间的延长,MtF和TfR1 mRNA表达呈下降趋势,诱导分化第5 d的表达水平分别为诱导分化前的86.5%和79.2%;而Fn mRNA的表达呈上调趋势,诱导分化第5 d表达水平为诱导分化前的1.21倍.结论 ATRA诱导K562细胞向粒系细胞分化过程中,MtF和TfR1 mRNA表达下调,而Fn mRNA表达上调,这种协调变化有助于降低细胞通过TfR1介导的铁摄取,从而抑制或影响细胞增殖潜能.     

反义BCR/ABL寡核苷酸体外抑制K562细胞的研究

目的：探讨反义ＢＣＲ和ＡＢＬ融合基因（ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因）寡核苷酸体外抑制Ｋ５６２细胞的作用及机制。方法：采用Ｋ５６２细胞培养,观察反义ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸体外对Ｋ５６２细胞数、台盼蓝拒染率及克隆形成等的影响。结果：经反义ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸ｂ３ａ２（ＡＳｂ３ａ２）处理后培养８ｄ的Ｋ５６２克隆抑制率达６０６９％,液体培养中细胞数从２４ｈ开始较对照组减少,细胞存活率从８ｈ开始即较对照组明显下降,ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸ｂ２ａ２（ＡＳｂ２ａ２）及无义寡核苷酸对Ｋ５６２细胞数和存活率无明显影响;３种寡核苷酸对ＨＬ６０细胞数和存活率也无影响。结论：ＡＳｂ３ａ２对Ｋ５６２细胞有序列特异性的抑制作用。ＡＳｂ３ａ２的这种抑制作用可能在于它诱导Ｋ５６２细胞的凋亡。     

Effect and Comparison of Sodium Butyrate and Trichostatin A on the Proliferation/Differentiation of K562

Thereisampleevidence ,bothinvitroandinvivo,thatHDACinhibitorsblocktheenzymaticac tivityofdeacetylasesandinducehyperacetylationofhistones[1] Furthermore ,aplethoraofculturedtu morcellshasbeentestedforsusceptibilitytoHDACinhibition UpontreatmentwithHDACinhibitors ,thesecellsshowsignsofapoptosis ,growtharrest,differentiationandaltered geneexpression HDACinhibitorsare potentially promisingcandidatedrugsfordifferentiationtherapyofcancer ButyratewasthefirstHDACinhibitortobei dentified[2 ] a…