未知基因KS1的发现

生物多样性是由遗传物质决定的，这些遗传物质的总和称为基因组。人类基因组和后基因组计划是跨世纪生命科学发展的标志。此计划现已完成庞大基因组序列测定的大部分工作，但对于每个基因在基因组序列结构中的定位及表达调控与表达产物的生物学功能的研究才刚刚起步。目前分离克隆基因的方法较多。我们在对苦参碱诱导白血病Ｋ５６２细胞分化系统研究基础上，应用ＤＤ－ＰＣＲ技术分离并克隆了苦参碱作用Ｋ５６２细胞早期的４３个差异显示ｃＤＮＡ片段。经序列测定并利用网络技术和基因组数据库等相关生物信息分析，得到一个与已知基因无明显…     

人红白血病细胞株c-myc/N-ras/P_(53)mRNA的表达及其与细胞生物学特性的关系

本实验用一定浓度的苦参碱作用Ｋ５６２细胞１６ｈ, ２４ｈ,４８ｈ,采用分子生物学Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ杂交技术分析ｃ－ｍｙｃ,Ｎ－ｒａｓ及Ｐ５３ ｍＲＮＡ在Ｋ５６２细胞诱导分化过程中表达水平改变,以探讨其表达水平与细胞生物学特性的关系。结果显示苦参碱作用Ｋ５６２细胞２４ｈ时,Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ表达活化;Ｐ５３－基因表达增强：作用４８ｈ时,ｃ－ｍｙｃ　ｍＲＮＡ水平表达明显受抑。说明苦参碱在诱导Ｋ５６２细胞分化启动时,能明显改变早期相关癌基因的表达。提示ｃ－ｍｙｃ,Ｎ－ｒａｓ和Ｐ５３等癌基因是一类重要的细胞增殖、分化调控因素。     

邻苯二甲酸正丁酯对白血病细胞增殖与凋亡的影响

应用细胞培养、形态学观察、ＤＮＡ断裂百分率测定及ＤＮＡ片段凝胶电泳，观察了邻苯二甲酸正丁酯对ＨＬ－６０与Ｋ５６２细胞增殖与凋亡的影响。结果表明，邻苯二甲酸正丁酯在抑制白血病细胞增殖的同时，也诱导其凋亡，但对Ｋ５６２细胞作用相对较弱     

红白血病细胞株c-mYc/N-ras/P53 mRNA的表达及其与细胞生物学特性的关系

本实验用一定浓度的苦参碱作用Ｋ５６２细胞１６ｈ,２４ｈ,４８ｈ,采用分子生物学Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ杂交技术分析ｃ－ｍｙｃ,Ｎ－ｒａｓ及Ｐ５３ ｍＲＮＡ在Ｋ５６２细胞诱导分化过程中表达水平改变,以探讨其表达水平与细胞生物学特性的关系。结果显示苦参碱作用Ｋ５６２细胞２４ｈ时,Ｎ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ表达活化;Ｐ５３基因表达增强;作用４８ｈ时,ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ水平表达明显受抑。     

邻苯二甲酸正丁酯对白血病细胞增殖与凋亡的影响

应用细胞培养、形态学观察、ＤＮＡ断裂百分率测定及ＤＮＡ片段凝胶电泳，观察了邻苯二甲酸正丁酯对ＨＬ－６０与Ｋ５６２细胞增殖与凋亡的影响。结果表明，邻苯二甲酸正丁酯在抑制白血病细胞增殖的同时，也诱导其凋亡，但对Ｋ５６２细胞作用相对较弱。     

T—AK细胞上清液抑瘤活性的研究

本文应用ＭＴＴ比色法检测了ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗共同诱导激活的Ｔ－ＡＫ细胞培养上清液对Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制效应，并观察了Ｔ－ＡＫ上清液抑瘤活性与Ｔ－ＡＫ细胞杀伤活性的相关性，结果表明：（１）Ｔ－ＡＫ细胞能够自发分泌一些抑制Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制因子，但活性很低；（２）Ｔ－ＡＫ细胞在杀伤Ｋ５６２细胞过程中释放的抑制肿瘤细胞生长的物质，抑瘤活性比较高，共     

苦参碱诱导 K562 细胞分化相关 cDNA 的克隆

目的 克隆苦参碱诱导人白血病Ｋ５６２细胞分化的相关基因,以求了解白血病分化及苦参碱的作用机制。 以人白血病细胞Ｋ５６２为研究对象,在苦参碱诱导其分化的基础上,利用ｍＲＮＡ差异显示技术对Ｋ５６２细胞在苦参碱诱导前及诱导后４８小时的基因表达情况进行分析。结果 在苦参碱诱导前后Ｋ５６２细胞之间存在明显的基因表达差异。一些基因在诱导后表达增强,而一些基因经苦参碱作用后表达减弱甚至完全抑制。经克隆和筛选获得     

抗辐射口服液抗癌活性初探

应用体外细胞培养技术，观察了抗辐射口服液组方提取物对Ｋ５６２细胞系集落形成的影响。实验结果表明，抗辐射口服液提取物对Ｋ５６２细胞系有明显的抑制作用，其集落形成与药物浓度呈显著性负相关。初步证实了抗辐射口服液的抗癌效果。本文还对中药抗癌的可能机理进行了讨论。     

黄花夹竹桃甙对K562细胞的杀伤作用

目的：选用黄花夹竹桃甙（ＴＳ）作为Ｎａ~＋－Ｋ~＋－ＡＴＰ酶的抑制剂，观察其对体外培养的Ｋ５６２细胞的杀伤作用，初步探讨其作用机制。方法：台盼蓝排染法测定ＴＳ对Ｋ５６２细胞的杀伤作用；８６Ｒｂ示踪法测定ＴＳ对Ｋ５６２细胞Ｎａ~＋－Ｋ~＋－ＡＴＰ酶活性的抑制作用；透射电镜观察ＴＳ对Ｋ５６２细胞形态学的改变。结果：低剂量的ＴＳ（０．００１～０．ｌμｇ／ｍｌ）在体外能够显著杀伤Ｋ５６２细胞，并有剂量依赖性。此种作用需经ＴＳ持续作用８ｈ以上才表现出来，并迅速增强。经０．１μｇ／ｍｌＴＳ处理１２ｈ的Ｋ５６２细胞，其生长受到显著的抑制。体外杀伤细胞浓度的ＴＳ作用１ｈ，对Ｋ５６２细胞的Ｎａ~＋Ｋ~＋－ＡＴＰ酶有明显的抑制作用。电镜观察发现，ＴＳ作用２４ｈ后，Ｋ５６２细胞出现非特异性的形态学改变，并发生溶解性坏死。结论：ＴＳ对Ｋ５６２细胞表现出很强的杀伤作用，其机制可能是抑制膜上Ｎａ~＋－Ｋ~＋－ＡＴＰ酶的活性，引起水盐代谢紊乱和营养物质摄取障碍。     

录芝复方剂对K562白血病细胞增殖,分化的影响

用细胞培养、细胞形态学及联苯胺染色法观察中药灵芝复方对Ｋ５６２白血病细胞的增殖抑制及分化诱导作用。结果显示：灵芝复方在一定浓度范围内对正常人骨髓ＣＦＵ－ＭＧ生长有促进作用（Ｐ〈０．０５）,而对白血病细胞系Ｋ５６２细胞才殖表现出剂量和时间依赖性抑制（Ｐ〈０．０５）;在诱导分化剂量下,灵芝复方可促进Ｋ５６２细胞向红系分化。可见,灵芝复方有望成为一种抗白血病中药。     

氧化苦参碱对四氯化碳损伤大鼠肝细胞的保护作用

目的 :研究氧化苦参碱对肝细胞的保护作用。方法 :采用原代肝细胞培养的方法 ,选用CCl430mmol/L制备肝损伤模型 ,同时加以不同浓度的氧化苦参碱以保护肝细胞 ,培养 12h后以MTT法测细胞存活率 ,并测定培养基中AST、ALT、LDH。结果 :氧化苦参碱对肝细胞的保护呈剂量依赖性 ,氧化苦参碱组细胞存活率明显高于CCl4损伤组 (98.3% /3.2 % ,P <0 .0 5 ) ;其AST、ALT、LDH较CCl4损伤组明显降低 (依次为 6 .13± 0 .4 4 /896 .87±13.2 3、2 1.5± 0 .76 /15 0 2 .13± 35 .80、19.5± 0 .6 8/2 87.38± 5 .79,均P <0 .0 5 )。结论 :氧化苦参碱对CCl4损伤的肝细胞具较好的保护作用 ,存在最佳剂量性关系。     

苦参碱及氧化苦参碱抑制A549细胞增殖及诱导细胞凋亡的比较研究

目的观察比较苦参碱及氧化苦参碱对A549细胞系增殖能力的影响及其对A549细胞凋亡的诱导效应.方法以不同剂量的苦参碱及氧化苦参碱分别作用A549细胞,观察细胞形态,MTT法检测细胞的增殖能力,TNUEL法原位检测DNA断裂,流式细胞仪检测凋亡.结果苦参碱在浓度为0.5g/L时即表现出明显的抑制A549增殖的作用,浓度在1.0g/L时TUNEL原位检测DNA断裂为强阳性,流式细胞仪检测出凋亡峰;相同浓度的氧化苦参碱没有明显的抑制A549增殖的作用,当其浓度增加到10倍出现对A549抑制增殖的作用,但是TUNEL原位检测DNA断裂为弱阳性,流式细胞仪不能检测出凋亡峰.结论苦参碱可抑制A549细胞系增殖并诱导其凋亡;相同浓度下氧化苦参碱不能抑制A549细胞系增殖,10倍剂量也未出现细胞凋亡.     

OXYMATRINE METABOLIC FATE

A method for the simultaneous determina- tion of matrine and oxymatrine in the same biologic material and the meta.bolic fate of the latter are described. There is wide variation between the distri- bution and excretion of oxymatrine administer- ed to rats by different routes. After IM oxyma- trine injection, the parent drug concentration is high in the tissues, bile and urine However, when oxymatrine is given orally, matrine con- centration is higher than that of oxymatrine. This indicates that oxymatrine may be con- verted to matrine in the GI tract. After absorp- tion, matrine is dist.ributed to the tissues and excreted in the urine. After IV injection, oxymatrine rapidly disappears from plasma It can be suited to a 2-compartment open modeL Experimental results show that matrine is probably the pharmacologically active substance in the treatment of asthma.     

苦参碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外抗菌作用的实验研究

目的:研究苦参碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性。方法:采用液体稀释法测定苦参碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)的最小抑菌浓度(MIC)。结果:苦参碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为31.6g/L,对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为22.5g/L。结论:苦参碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌均具有一定的抑菌作用,且敏感性无差异。     

高效液相色谱法测定家兔血浆中苦参碱的浓度

目的:建立高效液相色谱法测定家兔血浆中苦参碱浓度。方法:采用AICHROM-SiO2柱(250×4.6mm,5μm);流动相为甲醇:三乙胺(每100mL甲醇加3μL三乙胺);流速1.0mL/min;柱温30℃;检测波长220nm。结果:家兔血浆中苦参碱在0.1~50.0μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9998),最低检测浓度为0.1μg/mL。低、中、高三种浓度相对回收率分别为90.0%、97.3%、97.4%,低、中、高浓度检测的日内、日间RSD分别为9.74%、6.77%、0.60%和11.5%、8.10%、0.70%。结论:该法具有操作简便可靠、准确、稳定性高等特点,可应用于血浆中苦参碱浓度的测定以及药动学研究。     

三种生物碱体外抑菌活性的测定

目的：研究甜菜碱、苦参碱、氧化苦参碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌的体外抑菌活性。方法：采用试管二倍稀释法进行体外抑菌试验,测定苦参碱和氧化苦参碱对上述4种病原菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果：体外实验结果表明,对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌四种病原菌标准菌株的MIC：甜菜碱分别是6.25、3.125、6.252、5 mg/mL;苦参碱分别是12.5、25、252、5 mg/mL;氧化苦参碱均大于50 mg/mL。结论：三种生物碱在体外对受试菌具有不同程度的抑菌作用,其中甜菜碱对上述四种病原菌的体外抑菌效果较苦参碱和氧化苦参碱要好。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡及其作用机制。方法将浓度为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml的苦参碱作用于卵巢癌细胞株A21-2和骨肉瘤细胞株MG63,利用倒置相差显微镜观察不同浓度苦参碱作用后细胞的形态变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡周期、Caspase-3蛋白的表达。结果倒置相差显微镜观察表明,苦参碱能抑制MG63细胞和A21-2细胞的增殖;FCM分析发现,苦参碱与细胞作用72h后,C_0/G_1期前出现凋亡峰,与对照组比较,观察组不同浓度下凋亡率升高(P<0.01),且随浓度升高,凋亡率亦增高,差异有统计学意义(P<0.05),FCM分析显示,与对照组比较,观察组不同浓度下Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),且随浓度升高,Caspase-3蛋白表达亦升高,差异有统计学意义(P<005)。结论苦参碱能明显抑制A21-2细胞和MG63细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与促进Caspase-3蛋白的表达有关。     

苦参碱眼液调控TLR4/NF-κB通路影响实验性葡萄膜炎家兔相关细胞因子的表达

目的 探究苦参碱眼液调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)通路对家兔实验性葡萄膜炎相关细胞因子水平的影响。 方法 建立实验性葡萄膜炎家兔模型,采用随机数字表的方法分为模型组、妥布霉素地塞米松滴眼液组、苦参碱眼液低(0.50 g/L)、中(0.75 g/L)、高(1.00 g/L)剂量组,每组8只,另取8只设为对照组。造模后妥布霉素地塞米松滴眼液组、苦参碱眼液低、中、高剂量组分别以妥布霉素地塞米松滴眼液、苦参碱眼液滴眼治疗,对照组、模型组家兔以相同剂量生理盐水滴眼,持续7 d。裂隙灯观察各组家兔眼前节炎症反应并对其进行临床评分,苏木精-伊红染色(HE)观察各组家兔视网膜组织病理形态并对其进行病理评分,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组家兔血清及房水中细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)]水平,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测视网膜组织中TLR4/NF-κB通路蛋白TLR4、MyD88、NF-κB p65的表达。 结果 与对照组相比,模型组家兔临床评分、病理评分,血清和房水中IL-6、IL-1、TNF-α水平,视网膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65表达均显著升高(均P<0.05);与模型组相比,苦参碱眼液各剂量组和妥布霉素地塞米松滴眼液组家兔临床评分、病理评分,血清和房水中IL-6、IL-1、TNF-α水平,视网膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65表达均降低且苦参碱眼液各剂量组之间呈剂量依赖性(均P<0.05);苦参碱眼液高剂量组和妥布霉素地塞米松滴眼液组各指标相比,差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 苦参碱眼液可降低血清及房水中细胞炎症因子水平,减轻炎症反应,改善家兔葡萄膜炎症状,可能是通过下调TLR4/NF-κB通路实现。