表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

Objective To investigate the antitumor effect of oncolytic adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene for renal cancer therapy. Methods Nude mice were divid-ed randomly into 4 groups (8 mice/group),and were treated by intratumoral injections of ZD55-hTERT ( an oncolytic adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene) ,ZD55-EGFP ( an on-colytic adenovirus) and Ad-hTERT (replication-defective adenovirus armed with small interference RNA targeting hTERT gene) with three consecutive daily at 7 × 108 pfu/day or treated with PBS as a control. The expression of E1A and hTERT, and apoptosis of tumor xenografts were assessed by immunohistochemi-cal technique at the 7th day after injections. The tumor volume was measured at the 50th day after injec-tions. Results The tumor volume in ZD55-hTERT treatment group ( 124.1±27.5) was significantly less than that in ZD-EGFP (499.8±77.1 ) and Ad-hTERT ( 609.0±102.5 ) treatment groups. The E 1A pos-itive expression in ZD55-hTERT treatment group was significantly higher than that in Ad-hTERT treatment group. The hTERT positive expression in ZD55-hTERT treatment group was significantly lower than that in Ad-hTERT treatment group. ZD55-hTERT treatment of tumor xenografts resulted in an increased apoptotie cell death as compared with ZD55-EGFP and Ad-hTERT treatment. Conclusion The antitumor effect of ZD55-hTERT was more potent than oneolytie adenovirus ZD55-EGFP and Ad-hTERT.     

(125)~I标记Ki67反义多肽核酸对裸鼠人肾癌移植瘤的抑制作用

放射性核素反义治疗是近年来提出的一种新的肿瘤治疗策略,它将反义技术阻抑癌基因表达与放射性核素基因靶向照射有机结合,从而提高治疗效果。我们既往研究发现125I标记肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(125I-PNAs)具有较强的体外抑制肾癌细胞增殖、促进凋亡作用。本研究通过建立裸鼠人肾癌移植瘤模型,进一步观察其在体内对靶基因表     

共刺激分子B7-H1在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨共刺激分子B7-H1在人透明细胞癌组织中的表达及其意义。方法运用免疫组织化学ABC法检测B7-H1在45例肾透明细胞癌组织中的表达,并对其表达水平与临床病理参数之间的关系进行相关性分析。结果B7-H1分子在肾透明细胞癌组织中的阳性表达显著高于癌旁正常肾组织（P〈0.05）;B7-H1在肾透明细胞癌组织中阳性表达率为68.9%,与患者性别、年龄无关（P〉0.05）,而与病理分级、临床分期及是否转移显著相关（P〈0.05）。结论B7-H1在肾透明癌组织中高表达,可能在肿瘤的发生、发展中起到一定作用,有望成为肾透明细胞癌免疫治疗的一个新靶点。     

巨大淋巴结增生43例临床资料分析

目的 总结巨大淋巴结增生的临床特点、治疗方法 及预后.方法 回顾性分析我院自1999至2006年43例巨大淋巴结增生患者临床资料,单中心型肿瘤分布:颈部10例,胸部20例,腹部9例;多中心型4例.结果 皆通过手术或手术配合放化疗,术后病理证实为巨大淋巴结增生,其中浆细胞型16例,占37.2%,透明血管型26例,占60.5%,混合型1例,占2.3%;单中心39例,占90.7%,多中心4例,占9.3%.单中心39例经手术切除后38例无复发,皆存活,1例失随访;多中心4例经手术+放或化疗后,3例复发,其中2例死亡,1例带瘤存活至今,1例无瘤存活.结论 巨大淋巴结增生病较为罕见,术前易误诊为其他疾病,诊断主要依靠术后病理;单中心患者手术切除为最彻底治疗,术后无复发,预后好;多中心患者手术切除后常有复发,疾病呈进行性发展,预后差,尚无较好治疗手段.     

Multi-parameter prediction of HLA class Ⅰ restricted cytotoxic T lymphocyte epitopes for human proliferating cell nuclear antigen

Objective To predict the HLA class Ⅰ restricted cytotoxic T lymphocyte epitopes for human proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Methods By using 3 epitope prediction databases which including MHC binder ( BIMAS and SYFPEITHI databases) and proteasome cutting site ( PAProC databases), the epitopes of PCNA were predicted by analyzing several parameters and methods. Results After comprehensive analysis,we have obtained two possible HLA-A0201 restricted CTL epitopes SMSAD-VPLV (228-236, score 447 633. 595 ) and LINEACWDI ( 22-28, score 127 966.779);two HLA-A24 re-stricted CTL epitopos DYEMKLMDL ( 113-121, score 563 994.9 ) and EFARICRDL ( 143-151, score 40 540.7);two HLA-A1101 restricted CTL epitopes LTSMSKILK (72-80, score 1334. 2680 ) and DVPLV-VEYK (232-240,score 736.9236). Conclusion The multi-parameter epitope prediction method is feasi-ble for cytotoxic T lymphocyte epitope prediction.     

含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽的白细胞介素-24突变体真核表达载体的构建及其体外抗肝癌作用

目的 构建含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽的白细胞介素(IL)-24突变体(RGD-IL-24)真核表达质粒,观察其对肝癌细胞的抑制作用.方法 利用重叠PCR技术在IL-24cDNA中插入GGT三个碱基,获得RGD-IL-24 cDNA.将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1/RGD-IL-24.将pcDNA3-1/RGD-IL-24及作为对照的pcDNA3.1/IL-24转染肝癌细胞HepG2,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-24 mRNA表达;Western blot检测IL-24蛋白表达;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;FITC-Annexin V染色检测细胞凋亡;Western blot检测bax、bcl-2表达.结果 测序证明pcDNA3.1/RGD-IL-24构建成功.RT-PCR、Western blot证实转染pcDNA3.1/RGD-IL-24的肝癌HepG2细胞表达IL-24.pcDNA3.1/RGD-IL-24、pcDNA3.1/IL-24处理组HepG2细胞存活率分别为(0.382±0.064、0.563±0.038),凋亡细胞阳性率分别为(0.346±0.049、0.163±0.087),两组差异均有统计学意义.Western blot证实pcDNA3.1/RGD-IL-24促进bax表达、抑制bcl-2表达作用强于pcDNA3.1/IL-24.结论 RGD-IL-24真核表达质粒不仅不影响IL-24表达,且能显著增强IL-24诱导肝癌细胞凋亡及抑制肿瘤生长作用.     

人肿瘤增殖细胞核抗原HLA-Ⅰ类分子限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的多参数预测

目的 预测人增殖细胞核抗原(PCNA)的HLA-Ⅰ类分子限制性细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位.方法 使用基于矩阵法预测表位的BIMAS和SYFPEITHI数据库,以及基于蛋白体酶切割位点预测表位的PAProC数据库,对人肿瘤PCNA抗原的CTL表位综合评分.结果 得到针对HLA-A0201的位于PCNA氨基酸序列228～236(SMSADVPLV,分值为447 633.595)和22～30(LINEACWDI,分值为127 966.779)位置的两个可能表位;针对HLA-A24的位于113～121(DYEMKLMDL,分值为563 994.9)和143.151(EFARICRDL,分值为40540.7)的两个可能表位;针对HLA-A1101的位于72～80(LTSMSKILK,分值为1334.2680)和232～240(DVPLVVEYK,分值为736.9236)的两个可能表位.结论 实验提供了肿瘤抗原表位的多参数预测方法,为应用PCNA肽表位制备肿瘤疫苗奠定了基础.     

后腹腔镜下肾盂输尿管切开取石术（附52例报告）

目的探讨后腹腔镜下肾盂输尿管切开取石术治疗肾盂、输尿管结石的临床疗效。方法经腹膜后腹腔镜下行肾盂输尿管切开取石术,同时切除合并的息肉。术中均放置输尿管支架管并缝合输尿管。结果52例手术均成功,取净结石,无一例中转开放手术。手术时间50～200min,平均110min。住院时间5～14d,平均7.5d。术后8周拔出支架管。52例随访6个月：术后3个月超声检查,21例肾积水消失;术后6个月超声示共32例肾积水消失,结石无复发;ECT示8例重度积水肾脏的肾小球滤过率由术前平均16ml/min升高到平均25ml/min。结论后腹腔镜下肾盂输尿管切开取石术效果确切,创伤小,术后恢复快,是治疗肾盂及输尿管上段结石的有效术式之一。     

恒河猴肝移植模型急性排斥反应中白细胞介素6的表达

背景：白细胞介素6是免疫炎症反应中一种重要的细胞因子,它与移植排斥反应具有密切的关系,在移植排斥反应诊断和抗排斥疗效评价中发挥着重要作用。目的：检测白细胞介素6在恒河猴肝移植后急性排斥反应中的表达水平,以评价其作为肝移植后急性排斥反应早期诊断指标的价值。方法：以16只恒河猴为研究对象,将其随机分为实验组（围手术期不给予免疫抑制治疗）和对照组（围手术期给予免疫抑制治疗）,然后建立恒河猴同种异体原位肝移植模型;分别在移植后6,12,24,72h时间点收集血清及肝脏组织,通过检测肝功指标和移植肝组织苏木精-伊红染色Banff评分反映其移植排斥反应情况,并应用酶联免疫吸附法、免疫组织化学技术分别检测白细胞介素6的表达水平。结果与结论：肝移植后12,24,72h实验组均有急性排斥反应发生,其中实验组丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素在24h和72h表达水平明显高于对照组（P〈0.05）;实验组72h组织学表现重于对照组,Banff评分高于对照组（P〈0.05）;实验组中血清、肝组织的白细胞介素6水平在肝移植后12,24,72h明显高于对照组（P〈0.05）,并以72h最为明显。结果表明白细胞介素6可能参与肝移植后排斥反应的发生,其表达可能在恒河猴原位肝移植后急性排斥反应的早期诊断中有一定意义。     

表达抗G250人源性抗体增殖缺陷型腺病毒的构建

目的构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。方法通过重叠延伸PCR、常规PCR方法,分别获得G250重链的可变区和恒定区（GH）eDNA序列及G250轻链（GL）eDNA序列,并克隆至pCLON12-IRES载体上,构建质粒pCLON12-GL-IRES—GH。酶切质粒pCLON12-GL—IRES—GH回收GL—IRES—GH片段,克隆至腺病毒载体pDC315,构建pDC315-GL—IRES—GH（pDC315-G250）。将pDC315-G250与腺病毒包装骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,重组包装表达G250抗体的增殖缺陷型腺病毒AdDC315一G250。纯化病毒表达的G250抗体,免疫印迹实验检测该抗体能否与细胞表面抗原特异性结合。结果PCR及测序结果表明成功构建质粒pCLON12-GL—IRES—GH及腺病毒穿梭质粒pDC315-G250。PCR鉴定表明重组腺病毒AdDC315-G250含有目的基因,病毒包装成功。免疫印迹实验结果显示,纯化的抗体在G250抗原阳性的细胞中能检测到目的条带。结论成功构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。