成釉细胞微环境对胚胎干细胞特性的影响

目的研究胚胎干细胞诱导后成牙分化的可行性。方法使用成釉细胞无血清条件培养液诱导胚胎干细胞分化,观察诱导后细胞形态学变化以及体外检测基因表达和免疫表型分析。结果成釉细胞无血清条件培养液诱导胚胎干细胞后,拟胚体的外周有鹅卵石样的细胞,类似于上皮样的细胞生成。同时,诱导组细胞中可检测CK14、AMBN及AMGN mRNA的表达,DMP1和DSPP表达阴性,进一步免疫表型分析显示,诱导组胚胎干细胞表达CK14、AMBN及AMGN阳性。结论利用成釉细胞无血清条件培养液分泌的信号分子在体外模拟上皮的微环境,使得胚胎干细胞实现了向牙源性上皮细胞方向的表型转化。     

Prognostic and proliferative evaluation of ameloblastoma based on radiographic boundary

Ameloblastoma is a benign odontogenic tumor with an aggressive biological behavior,and the surgical treatment frequently results in failure for the postoperative recurrence.The aim of this article was to investigate whether the proliferative ability and prognosis of ameloblastoma could be evaluated by the radiographic boundary.The ameloblastoma cases treated by the conservative therapy in our hospital between 1981 and 2001 were divided into three groups based on the nature of the radiographic borders of the lesions.The biologic behavior was evaluated by Ki-67 antibody immunohistochemically.Comparisons of prognosis and Ki-67 expression were carried out by statistic methods.There were 24 cases of well-defined edge with sclerosis(group I),41 cases of well-defined edge without sclerosis(group II) and 32 cases of ill-defined edge(group III).The recurrent rates were 29.2% in group I,43.9% in group II and 62.5% in group III(P,0.05).The cells in group III expressed the highest Ki-67 level(P,0.05).The radiographic boundary could be used as one of indicators in evaluating the proliferative ability of ameloblastoma and the patient’s prognosis,which was consistent with Ki-67 expression.     

不同时期成釉细胞氟损伤程度差异的动物实验研究

目的：GRP78和BCL-2在氟中毒大鼠不同时期成釉细胞中的表达和分布,探索氟牙症发病机制。方法：选择20只Wistra大鼠,饲喂氟浓度为75mg F-/L的自来水,8周后处死,通过HE染色和免疫组化技术观察大鼠成釉细胞形态和GRP78和BCL-2在氟中毒大鼠不同时期成釉细胞中的表达。结果：GRP78在成釉细胞分泌前期和分泌期表达高于转换期和成熟期,BCL-2在分泌期和转换期表达最高,在分泌前期和成熟期表达下降,各组间具有显著统计学差异（P<0.05）.结论：分泌早期和分泌期成釉细胞对氟诱导的内质网更加敏感,而在分泌期和转换期其抗凋亡能力更强。     

氟对体外培养大鼠成釉细胞活性和细胞凋亡的影响

目的 观察氟对体外培养的大鼠成釉细胞活性的影响,为探讨氟斑牙的形成机制提供依据。方法 取对数生长期的大鼠成釉细胞,在培养液中加入浓度为0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L的 NaF溶液,培养24、48、72 h后,采用CCK-8检测各组细胞的活性。荧光显微镜下观察成釉细胞核形态的变化,流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果 ①NaF浓度为0.4、0.8 mmol/L时,对成釉细胞有促增殖作用;NaF浓度为1.6、3.2、6.4 mmol/L时,对成釉细胞的活性有抑制作用,随着NaF浓度的增加,对细胞的抑制作用也逐渐增强,并且这种双向调节作用呈时间依赖性。②NaF浓度为0.4、0.8 mmol/L时,鲜见核破碎;NaF浓度为1.6、3.2 mmol/L时,存在核破碎,并且随着浓度的提高,核破碎的数量随之增加,即1.6 mmol/L浓度的NaF可引起成釉细胞凋亡,随着浓度的增加,细胞凋亡的数量随之增加。结论 ①氟对体外培养成釉细胞的增殖具有双向调节作用,即低浓度促进,高浓度抑制。②浓度超过1.6 mmol/L时,NaF诱导成釉细胞凋亡。     

细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达

目的：研究细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育中的可能作用。方法：取13.5、14.5、16.5和18.5d（E13.5、E14.5、E16.5和E18.5）的小鼠胚胎以及出生后1和5d（PN1和PN5）的小鼠,分离头部,固定、脱钙、脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察牙胚的组织形态表现,采用免疫组织化学染色方法观察CDC42及PAR3在牙胚发育过程中的表达。结果：HE染色观察,E13.5~E18.5分别为小鼠牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状晚期,PN1小鼠的牙胚中可见分化成熟的成牙本质细胞和成釉细胞,PN5小鼠牙胚可见牙冠部发育完成。免疫组织化学染色,CDC42在E13.5、E14.5和E16.5小鼠牙胚中有广泛表达,在E18.5小鼠牙胚中表达较E13.5、E14.5和E16.5减少,在PN1和PN5小鼠牙胚中主要表达于成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端;PAR3弱表达于E13.5和E14.5小鼠牙胚,在E16.5和E18.5小鼠牙胚上皮处表达明显增强,在PN1和PN5小鼠牙胚中表达较E18.5减弱。结论：CDC42和PAR3参与小鼠牙发育的过程,在牙胚发育早期可能参与小鼠牙胚的增殖及迁移,在牙胚发育晚期可能参与了成牙本质细胞和成釉细胞的分化,尤其在成牙本质细胞和成釉细胞极性的形成与维持中可能具有重要作用。     

锌缺乏小鼠切牙硬组织发育缺陷的初步研究

目的 研究锌缺乏致小鼠牙硬组织发育的异常与成釉细胞凋亡的关系.方法 采用HE染色和免疫组化技术,观察纯系CD-1小鼠缺锌后,牙体组织的形态学改变以及成釉细胞中凋亡酶caspase-9的表达情况.结果 实验组(A组)与对照组(B组)相比,小鼠体质量明显偏轻,且毛发枯黄、缺乏光泽,牙体呈淡黄色、磨耗较严重;实验组小鼠牙髓腔内前期牙本质宽于对照组,并出现较多的空泡,细胞数量明显减少,成牙本质细胞排列紊乱,无极性;实验组小鼠成釉细胞中观察到caspase-9呈明显的阳性表达.结论 锌缺乏可以促使成釉细胞中casbase-9表达增高,从而介导小鼠切牙成釉细胞凋亡,并可引起包括牙本质在内的牙硬组织发育缺陷.     

中间层在成釉细胞分泌期的矿化相关因子表达研究

目的 探讨牙胚中间层细胞在釉质分泌与矿化过程中的矿化相关因子的表达.方法 取出生后1、3、5、7、9、11、13、15 d的BALB/c小鼠,HE染色法进行中间层发育情况的组织学观察,选择出生后7 d和13 d标本免疫组化检测TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、FM、BGN、DCN在中间层和成釉细胞的表达.结果 在釉质形成的阶段,TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞中有阳性表达,TNSALP、E-cad在中间层的阳性表达先于成釉细胞,随分泌过程阳性表达由中间层转移到成釉细胞;BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞阳性表达仅见于成釉细胞分泌的后期,分泌早期未见阳性表达.结论 中间层对成釉细胞的分泌功能发挥起支持或诱导作用,中间层细胞与成釉细胞的上皮间矿化相关分子的表达对成釉细胞的分泌具有重要的调控作用.     

釉原蛋白在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的 研究大鼠切牙牙胚形态分化的不同阶段,釉原蛋白(AmelogeninAm)的表达,探讨釉器细胞的形态分化与功能状态的关系,为探明牙釉质与牙本质在发育、矿化过程中的相互诱导关系及牙釉质蛋白硬组织诱导能力的有无提供实验依据。方法 将标本进行GMA树脂包埋,制作半薄切片后,进行免疫组织化学染色。结果 大鼠牙胚基底部釉器无Am的表达,分化末期内釉上皮细胞呈弱阳性染色,釉基质形成期成釉细胞及釉基质内呈强阳性染色。达到釉基质移行期后阳性反应逐渐减弱,直到釉质成熟期后期阳性反应消失。同时在对应的牙本质和牙本质小管内可以见到釉原蛋白的阳性染色。结论 在釉质形成过程中,成釉细胞分泌的釉原蛋白大部分存留在釉基质内形成釉质,也有一部分向牙本质内扩散到牙本质、牙本质小管、以及成牙本质细胞层内。釉原蛋白向牙本质层扩散和渗透功能上的意义,可能是起到促进成牙本质细胞的分化和诱导牙本质钙化的作用。     

高氟对人成釉细胞的凋亡作用及相关基因表达的影响

目的观察高氟区和非高氟区人牙胚成釉细胞形态变化及凋亡相关基因bc l-2及bax的表达。方法经知情同意在高氟区及非高氟区分别取引产胎儿牙胚设为试验组与对照组,组织学观察,免疫组化技术检测成釉细胞中bc l-2及bax的表达,测定母体尿氟。结果试验组母体尿氟含量高于正常范围(P<0.01),成釉细胞排列不规则,高度变矮,少量细胞发生扭曲,并在细胞质内有空泡产生,TUNEL检测显示有较多凋亡细胞,与对照组相比bc l-2表达减弱,bax表达增强。结论高氟导致人牙胚成釉细胞损伤及凋亡。高氟对成釉细胞的凋亡作用可能是通过调节Bc l-2和Bax表达机制诱导细胞凋亡发生。     

成釉细胞的分化与调控

成釉细胞的分化经历了形态和功能的改变,表现为前成釉细胞、分泌期成釉细胞和成熟期成釉细胞三个阶段,产生成釉蛋白和非成釉蛋白特异性蛋白质。牙胚外间充质的存在是成釉细胞分化的必要条件。TGF和EGF是成釉细胞分化的始动因子,在TGF-β2,EGF,FGF,PDGF和BMP等细胞因子和细胞外基质的作用下完成终末分化。