釉成熟蛋白和釉原蛋白基因在小鼠牙胚发育过程中的时空表达研究

目的：观察、比较小鼠釉成熟蛋白（amelotin）和釉原蛋白（amelogenin）基因在牙齿发育过程中的表达。方法：利用Digoxigenin标记的cRNA探针，采用原位杂交技术对amelotin和amelogenin基因表达进行组织学定位；然后从小鼠下颌中提取总RNA，采用RT—PCR技术观察小鼠amelotin和amelogenin基因在小鼠下颌组织中的表达。结果：在出生后1d的小鼠下颌第一磨牙，随着前期牙本质形成，amelogenin在成釉细胞层开始表达，并逐渐增强，但未检测到amelotin基因表达；在出生后5d的小鼠，成釉细胞处于分泌期，amelotin和amelogenin基因在成釉细胞中显著表达；在出生后10d小鼠下颌第一磨牙，amelotin和amelogenin基因在牙尖周围成熟期成釉细胞中的表达信号明显降低。利用RT—PCR技术，在新生小鼠下颌中未检测到amelotin基因表达，但amelogenin已开始表达；从出生1—7d小鼠下颌中均检测到amelotin和amelogenin基因表达；在出生后7d小鼠，amelogenin表达显著下降。结论：amelotin和amelogenin均参与了釉质发育过程；amelotin基因表达迟于amelogenin基因，提示两种釉质基质蛋白在釉质发育过程中可能发挥不同生物学作用。     

枸杞多糖对氟诱导小鼠成釉细胞DNA损伤影响

目的 研究枸杞多糖(LBP)对氟化钠(NaF)致小鼠成釉细胞DNA损伤的影响.方法 离体培养小鼠成釉细胞,2个处理因素为NaF染毒(含浓度为0.00、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L 6个水平)和LBP预处理(含质量浓度为0.00、100.00、200.00、400.00 mg/L 4个水平),6×4析因设计,2因素各水平全面组合共分24组,以浓度为0.00mmol/L NaF+质量浓度为0.00 mg/L LBP组为对照组.小鼠成釉细胞经LBP预处理24 h后,再给予NaF染毒,24 h后收获细胞,采用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况.结果 分别以0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L NaF单独染毒的小鼠成釉细胞尾长、Olive尾距、尾部DNA％、尾长/头长值均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).析因设计方差分析结果显示,LBP和NaF存在交互作用,差异均有统计学意义(P ＜0.001).经质量浓度分别为100.00、200.00、400.00mg/L的LBP预处理后,在不同NaF染毒剂量的条件下,多数尾长、Olive尾距、尾部DNA％、尾长/头长值等DNA损伤指标值均低于相应剂量NaF单独染毒时的指标值(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).结论 一定剂量NaF可致小鼠成釉细胞DNA损伤,LBP对氟诱导的小鼠成釉细胞DNA损伤起到一定的保护作用.     

硒和锌对小鼠成釉细胞DNA损伤的作用研究

目的 探讨硒和锌对小鼠成釉细胞DNA损伤的保护作用.方法 以2.50、5.00、10.00 μmol/L亚硒酸钠用于小鼠成釉细胞为硒作用组,以5.00、10.00、20.00 μmol/L硫酸锌作用于小鼠成釉细胞为锌作用组.细胞作用24h后,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA单链断裂情况.结果 与对照组比较,2.50和5.00 μmol/L亚硒酸钠作用组小鼠成釉细胞DNA损伤的指标尾长、Olive尾矩、尾DNA％和尾长/头长值均明显下降(P＜0.05);10.00 μmol/L亚硒酸钠作用组小鼠成釉细胞的尾长、尾/头长比值较对照组均显著性降低(P＜0.05).与对照组比较,5.00、10.00和20.00 μmol/L硫酸锌作用组可使小鼠成釉细胞尾长和Olive尾距明显下降,差异均有统计学意义(P ＜0.05);5.00和10.00 μmol/L硫酸锌作用组尾长/头长值明显下降(P＜0.05).以Olive尾矩为观察指标,2.50和5.00 μmol/L亚硒酸钠的保护作用要优于10.00μmo1/L亚硒酸钠,以2.50 μmol/L亚硒酸钠保护作用相对较好;10.00和20.00 μmol/L硫酸锌的保护作用要优于5.00μmol/L硫酸锌,以10.00 μmol/L硫酸锌保护作用相对较好.结论 2.50～10.0 μmol/L的亚硒酸钠和5.00～20.00 μmol/L硫酸锌均对成釉细胞DNA损伤具有一定的保护作用,其中2.50 μmol/L亚硒酸钠和10.00 μmol/L硫酸锌的相对保护作用较好.     

RhoA对小鼠成釉细胞黏附连接的影响

Objective： To investigate the regulation mechanism of RhoA signaling pathway during the enamel formation by using the EGFP RhoA Dominant Negative （EGFP RhoADN）transgenic mice model, from the aspect of adherens junctions, and to provide a theory basis for mechanism of enamel development defects. Methods: The enamel thickness of mandibular first molars of EGFP RhoADN transgenic mice and wild type (WT) mice were observed by scanning electronic microscopy at 20 kV, and the enamel thickness of the distal face of the central cusp was measured at 10 locations via analysis by ImageJ (Rasband, 1997-2009). The enamel organs from mandibular first molars from postnatal 4 day (P4) EGFP RhoADN mice and wild type mice were isolated, and the total RNA and protein were extracted from the epithelium of the enamel organs. The expression level of the adherens junctions components in ameloblasts layer of the postnatal 4 day EGFP RhoADN transgenic mice and wild type mice mandibular first molars were detected by real time PCR and Western blot assay. Results: The EGFP RhoADN transgenic mice had decreased enamel thickness in their bilateral mandibular first molars versus those of control group (n=20), and enamel thickness was (84.60±0.20) μm vs. (106.24±0.24) μm, P＜0.05 .The protein expressions of E cadherin, α E catenin and pan cadherin in ameloblasts layer of postnatal 4 day EGFP RhoADN transgenic mice molars were down regulated, and the protein level of β catenin in ameloblasts layer of P4 EGFP RhoADN transgenic mice molars was up regulated. The mRNA level of E cadherin in ameloblasts layer of P4 EGFP RhoADN transgenic mice molars was down regulated versus that of WT mice, and the gene expression of E cadherin was 0.93±0.01 vs. 1.00±0.02, P＜0.05. The mRNA level of β catenin in ameloblasts layer of P4 EGFP RhoADN transgenic mice molars was up regulated versus that of WT mice, and the gene expression of β catenin was 1.23±0.03 vs. 1.00±0.05, P＜0.05. Conclusion: In the mandibular first molars of EGFP RhoADN transgenic mice, the enamel formation was disrupted and the adherens junctions of EGFP RhoADN transgenic mice ameloblasts were implicated during amelogenesis. RhoA signaling pathway may play a critical role in enamel development by altering the adherens junctions in ameloblasts.     

氟牙症发病机制的研究现状

发育中的牙胚接触过量的氟可引起釉质矿化劂，表现为氟牙症。国内外学者应用多种方法对氟牙症发病机理进行了研究，但是目前尚不能定论。本文对氟牙症发病机制研究现状进行综述。     

氟牙症发病机制的研究现状

发育中的牙胚接触过量的氟可引起釉质矿化障碍,表现为氟牙症。国内外学者应用多种方法对氟牙症发病机理进行了研究,但是目前尚不能定论,本文对氟牙症发病机制研究现状进行综述。     

不同浓度氟对大鼠切牙成釉细胞Smad2/3表达的影响

目的:研究不同浓度氟对大鼠切牙生长过程中成釉细胞内信号转导分子Smad2/3表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法:40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。用HE染色和免疫组化方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞形态及Smad2/3表达的影响,采用MetaMorph显微图像分析系统和SPSS12.0软件包分别进行图像和数据分析。结果:给氟组大鼠切牙出现典型氟斑牙症状。给氟组Smad2/3的表达显著低于对照组(P<0.01),但低氟组和高氟组间未见显著差异(P>0.05)。结论:过量氟可能通过抑制Smad2/3的表达来影响釉质的分化和发育,导致氟牙症的发生。     

大鼠釉原蛋白抗血清的制备及其特异性研究

目的：制备抗大鼠釉原蛋白的抗血清，并研究其在组织学上的特异性。方法：采用弗氏完全／不完全佐剂，经皮下多点注射免疫；将所得抗血清用ＤＥ－３２纤维素纯化其ＩｇＧ抗体；用微量免疫电泳法测试抗体与釉质基质蛋白之间的免疫反应；用免疫组织化学法测试抗体与大鼠切牙及人牙胚中的组织特异反应。结果：所制备的抗血清与釉原蛋白三种组份Ａ１、Ａ２、Ａ３之间都发生沉淀反应，但沉淀弧形及位置不同，不与釉蛋白Ｅ１发生反应。抗角蛋白单克隆抗体与成釉细胞发生强阳性反应，但不与釉质基质发生反应。抗釉原蛋白抗体与成釉细胞发生阳性反应，但在童氏突与釉质浅层区反应最强，不与牙本质细胞发生交叉反应。结论：抗大鼠釉原蛋白抗体能特异地与成釉细胞外基质———釉原蛋白发生免疫反应。     

锌对氟诱导小鼠成釉细胞DNA损伤的影响

目的研究锌与氟联合作用对小鼠成釉细胞DNA损伤的影响。方法体外培养小鼠成釉细胞,分别设立对照组和0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠单独染毒组及5.00、10.00、20.00μmol/L硫酸锌单独染毒组以及0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L氟化钠+5.00、10.00、20.00μmol/L硫酸锌联合染毒组。小鼠成釉细胞经硫酸锌预处理24 h后,再与氟化钠联合作用。染毒24 h后收获细胞,采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测DNA损伤情况。结果与对照组比较,氟化钠单独染毒小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值均明显升高(P<0.05),而硫酸锌单独染毒组以上指标均明显下降(P<0.05)。硫酸锌+氟化钠联合作用小鼠成釉细胞的尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长值低于对照组与相同剂量氟化钠单独染毒组(P<0.05)。与相同剂量氟化钠+10μmol/L硫酸锌联合染毒组比较,5.00和20.00μmol/L硫酸锌+氟化钠联合染毒组Olive尾矩均较高(P<0.05)。结论适量的锌对氟致小鼠成釉细胞DNA损伤有拮抗作用。     

大鼠切牙生长发育的组织学和免疫组织化学研究

目的：探讨釉质发育中釉器细胞的形态分化与其功能分化的关系,研究成熟期成釉细胞的SA部与RA部的形态在功能上的意义。方法：采用大鼠进行心脏灌流固定、Epon、GMA树脂包埋,半薄切片技术,后进行甲苯氨蓝和组织化学染色,观察大鼠切牙发育组织形态学变化以及牙釉质蛋白的分布规律。结果：大鼠的牙胚发育分为增殖期、分化期、成熟期。在成熟期成釉细胞呈特异的周期性变化,即SA部和RA部交替出现。组织化学研究结果显示在釉质形成期,釉质蛋白大部分留在釉基质层,也有一部分向牙本质内扩散到牙本质、牙本质小管以及造牙本质细胞层内。结论：①大鼠切牙釉器发育的增殖期、分化期、成熟期分别与人牙的蕾状期、帽状期、钟状期相似。成熟期成釉细胞的RA部与无机质的注入有关系,SA部与水和蛋白质的脱去有关系。②关于牙釉质蛋白向牙本质侧的扩散,可能是起到促进成牙本质细胞的分化和诱导牙本质的钙化的作用。