单纯性马蹄内翻足易感基因位点筛查

目的将人类单纯性马蹄内翻足(ICTEV)易感基因初步定位,为进一步对其克隆提供基础依据。方法选取与肢体发育、关节翻转及与软骨发育相关的基因作为候选基因,在基因内或其附近选取微卫星标记,应用PCR-短串联重复序列(STR)方法扩增微卫星片段,对84个ICTEV核心家系的252名成员进行基因型分析,并进行遗传连锁不平衡检验(TDT)。结果IX型胶原COL9A1基因(6q12-13区域)内及其附近的2个位点-D6S348及509-8B2经TDT检验表明,此2个位点与ICTEV有相关性(分别χ2=42.15,χ2=31.18,P0.05);其他位点经TDT检验,不存在连锁不平衡(均P0.05)。结论COL9A1基因可能是ICTEV的候选基因,从而将ICTEV易感基因初步定位于COL9A1基因所在的染色体区域6q12-13。     

HOXD13调控SOX9基因可能参与先天足部软组织畸形的发生

目的　研究HOXD13与SOX9基因在单纯性马蹄内翻足（idiopathic congenital talipes equinovarus,ICTEV）足部软组织畸形发生中的分子机制。 方法　软件预测SOX9基因5′上游3个HOXD13结合位点,构建SOX9基因上游不同长度片段以及结合位点野生和突变序列载体,并测定其荧光素酶活性。在体内用ChIP验证HOXD13与SOX9基因启动子区3位点结合作用。干扰HOXD13基因表达,qRT-PCR检测HOXD13和SOX9表达水平的改变。 结果　荧光素酶检测发现在SOX9基因5′上游-1158至-770 bp（位点1）和-512至-368 bp之间（位点3）为负调控区;-770至-512 bp之间（位点2）是正调控区。ChIP检测显示HOXD13蛋白可与SOX9基因位点3结合。干扰HOXD13表达,SOX9基因mRNA表达上调。 结论　HOXD13结合SOX9基因5′上游负调控区可上调SOX9基因表达。干扰HOXD13会上调SOX9基因表达,高表达SOX9基因可能与足踝部软组织的挛缩发生相关。     

先天性马蹄内翻足与HoxA基因传递不平衡研究

目的 探讨先天性马蹄内翻足(CCF)与HoxA基因是否存在相关性.方法 在胚胎发育调控相关的HoxA基因染色体区域7p14-15内选择微卫星DNA标记D7S516和D7S1808,应用聚合酶链反应及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对54个CCF核心家系的162名成员进行基因型分析,并进行传递不平衡检验(TDT).结果 在D7S516位点上共检测到7个等位基因,TDT结果显示CCF与D7S516位点存在传递不平衡(χ2=20.3864,P＜0.01).D7S1808位点上共检测到7个等位基因,但TDT结果显示CCF与D7S1808位点不存在传递不平衡(χ2=11.3196,P＞0.05).结论 人类CCF与HoxA基因有相关性,HoxA基因可能是CCF的另一个易感基因.     

GLI3基因在单纯性马蹄内翻足发病机制中的作用

目的 探讨GLI3基因与单纯性马蹄内翻足(idiopathic congenital talipes equinovarus,ICTEV)的相关性.方法 应用变性梯度凝胶电泳技术检测GLI3基因编码区的突变.用逆转录-PCR方法研究GLI3基因在1CTEV患者下肢的表达情况.构建ICTEV大鼠模型,应用实时定量PCR、免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹(Western blotting)方法研究Gli3基因在ICTEV模型鼠下肢肌肉组织中的表达.结果 在84例ICTEV患者外周静脉血中未发现GLI3基因第1～8外显子以及第13外显子存在突变.在ICTEV患者及正常人下肢拇长屈肌中均未检测到GLI3基因的表达.不论在mRNA水平还是在蛋白质水平,Gli3基因在ICTEV模型胎鼠下肢组织中的表达均明显高于正常对照胎鼠.结论 GLI3基因的编码区突变可能不是ICTEV发病的主要原因,但GLI3基因的表达异常与马蹄内翻足的发病可能有关.     

99.反义

基因DNA可转录成与之互补的硷基序列的RNA,并剪接形成mRNA,mRNA通过核糖体翻译为蛋白质.其中DNA为有腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)四种脱氧核糖核苷酸连接的,而RNA分子则是由A、C、G、尿嘧啶(U)四种脱氧核糖核苷酸连接的.因此,DNA和RNA具有与各自的硷基和互补的硷基序列的DNA乃至RNA相结合的性质[A与T(RNA时为U)、C与G].     

F8基因倒位检测及其在甲型血友病基因诊断中的应用

目的建立F8基因第22内含子倒位突变检测新方法,应用于甲型血友病(hemophilia A)基因诊断。方法应用长距离PCR(long distance-polymerase chain reaction,LD-PCR)、倒位PCR(inversion-PCR,IPCR)技术检测31例甲型血友病患者F8基因22内含子倒位;对于倒位突变阳性患者的母亲应用上述两种方法进行携带者诊断;而对倒位携带者孕妇于孕中期抽取羊水,进行产前基因诊断。结果31例甲型血友病患者中查出7例存在倒位突变;4例倒位突变阳性患者的母亲有3例为倒位携带者;对1例倒位携带者孕妇进行了产前诊断,确定其胎儿无倒位突变。结论LD-PCR、I-PCR技术可快速检测F8基因22内含子倒位突变,可应用于患者及携带者基因诊断;I-PCR可用于F8基因22内含子倒位的产前基因诊断。     

本科实习护生健康教育与临床实践一体化教学模式研究

护理学形成于西方近代科学机械决定论盛行时期,因而在相当长的时期内,侧重于自然科学和技术操作。21世纪,护士承担着对人类的健康提供教育和指导的任务,通过健康教育指导人们疾病自理的知识和技术,是对护理人员的新要求[1]。基于社会对护理人员健康教育能力的需求,在临床实习带     

大鼠先天性马蹄内翻足患肢及脊髓的病理观察

目的 在建立先天性马蹄内翻足(CCF)的动物模型基础上，探讨其病因、发病机制及病变特点。方法 应用83只雌性Wistar大白鼠从孕第10天起，将维甲酸(120mg／kg体重)石蜡油混悬液(0．04g／L)经胃管单次注入，建立胎鼠CCF动物模型。结果 动物模型的CCF发病率为53．7％，单足为79．4％，双足为20．6％。距骨持续停滞在胚胎阶段，距骨、跟骨间重叠不良和跟骨内翻，踝角随胎鼠发育而逐渐增大。脊髓前角细胞有凋亡现象。结论 CCF在胚胎期即有足的马蹄内翻且畸形随生长发育而加重，其病因可能与脊髓病变相关。     

脊髓性肌萎缩症的基因诊断及其应用研究

目的 对脊髓性肌萎缩症患者及携带者进行基因诊断和产前基因诊断.方法 对26例脊髓性肌萎缩症患者应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-restiction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术检测SMN1基因第7外显子是否缺失;对于患者的父母应用多重PCR结合变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的方法进行携带者诊断;而既往生产过患儿的孕妇于孕中期抽取羊水,进行产前基因诊断.结果 26例脊髓性肌萎缩症患者中查出25例存在SMN1基因第7外显子纯合缺失;患者的父母全部为SMN1基因第7外显子杂合缺失携带者;对20名既往生产过患儿的孕妇进行了产前诊断,8名存在SMN1基因第7外显子纯合缺失.结论 PCR-RFLP、多重PCR结合DHPLC技术可应用于患者及携带者基因诊断;PCR-RFLP可用于脊髓性肌萎缩症的产前基因诊断.     

散发性血友病A家系的分子遗传学研究

本文应有用Southern印迹杂交和PCR技术对6个散发性血友病A家系进行了限制性片段长度多态性分析,并结合凝血资料,确定了其中两个家系中的母亲和1名姐姐为女性携带者,另外4个家系亦与遗传具有相关性,这一结果为遗传咨询提供了信息。