胃癌癌前和发展阶段中E-cadhherin基因的突变

目的细胞粘附分子E-cadherin作为转移抑制因子在肿瘤发展过程中起者重要的作用,在弥漫型家族性胃癌中有E-cadherin基因胚系突变的报道,并且在弥漫型散发性胃癌中也有关于该基因失活性突变的报道.异型增生是一种常见的胃癌癌前病变,为了认识E-cadherin基因在散发性胃癌发展过程中的分子改变,我们对不同地区不同阶段的胃组织标本进行了E-cadherin基因突变的检测. 方法采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)和测序的方法对130例癌前、早癌及进展期胃癌组织进行了第6、7、8、9外显子的突变检测,其中高发区早癌40例,非高发区早癌30例,异型增生40例,进展期胃癌20例. 结果在一例进展期胃癌中检测到第9外显子的错义突变,该突变是文献未报道过的新突变,在早期胃癌和异型增生中都未发现突变. 结论E-cadherin基因突变在散发胃癌为少发事件,不是胃癌发生早期阶段的主要事件,在胃癌发生的早期阶段可能有其他更重要的机制.     

MYCT1-TV对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响

目的探讨MYCT1-TV(Myc target 1)基因过表达对肝癌Bel7402细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法将构建的MYCT1-TV-GFP真核表达载体瞬时转染Bel7402细胞,通过RT-PCR和荧光显微镜检测转染效率,分别通过MTT、流式细胞术和Transwell实验检测转染后MYCT1-TV对Bel7402细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果转染MYCT1-TV-GFP后,Bel7402细胞活细胞数显著减少,凋亡细胞数显著增加,穿膜细胞数显著减少。结论 MYCT1-TV过表达能抑制Bel7402细胞生长和侵袭,促进Bel7402细胞凋亡。     

DNA甲基化与基因表达调控

DNA甲基化是一种遗传外修饰 ,它参与了胚胎发育、基因印记和 X染色体失活等过程 ,在基因表达的调控中具有重要的作用 ,异常的甲基化可导致肿瘤的形成。 DNA甲基化与组蛋白去乙酰化协同调节基因的表达     

B-RAF基因和肿瘤

B-RAF基因在肿瘤细胞增殖、分化和凋亡等方面发挥重要作用。本文就B-RAF基因作为RAF-MEK-ERK信号转导通路中的重要成员在肿瘤中的作用进行阐述。     

喉癌原代培养细胞及Hep-2细胞系染色体畸变研究

目的探索原发性喉鳞状细胞癌及喉癌Hep-2细胞系的特征性染色体异常，认识喉癌的细胞遗传学改变与其发病机理的相关性。方法对喉癌手术新鲜标本进行改良的原代细胞培养，G显带后核型分析；应用高分辨染色体分析法对喉癌Hep-2细胞系进行核型分析；应用6号染色体涂染探针对原发性喉癌及喉癌细胞系进行分子细胞遗传学研究。结果4例原发性喉癌原代培养细胞中，1例是四倍体范围，3例是三倍体范围。Hep-2细胞系染色体众数为68～75条，出现15条可识别的标记染色体。原发性喉癌及喉癌细胞系中染色体结构异常多为末端缺失、等臂染色体和不平衡易位，而且均存在复杂的6号染色体畸变。结论6q-，i（5p），17p-，5q-可能是人类喉鳞状细胞癌特征性染色体改变；荧光原位杂交法（fluorescence in situ hybridization，FISH）可以探求常规显带方法难以确认的复杂易位和标记染色体来源，为进一步确定喉癌特征性染色体畸变提供有价值的依据。     

肝癌和大肠癌中染色体1p35─p36的杂合性丢失

通过聚合酶链反应检查肿瘤基因组ＤＮＡ中染色体１ｐ３５－ｐ３６区域Ｄ１Ｓ８０座位的高度多态顺序，在早期肝癌、进展期肝癌和大肠癌中均发现杂合性丢失，检出率分别为２８％（２／７）、３３％（５／１５）和５２％（１２／２３）。结果表明，染色体１ｐ区域存在与肝癌和大肠癌有关的抑癌基因。为抑癌基因的精确定位、克隆或鉴定提供了有价值的参考资料。     

21号染色体特异性柯斯质粒DNA克隆区域定位

为提高检测２１号染色体数目和结构异常的精确性，应用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ通过缺口平移法标记Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１和６个柯斯质粒（Ｃｏｓｍｉｄ）ＤＮＡ克隆，将标记后的Ｄ１３Ｚ１／Ｄ２１Ｚ１和６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆双探针与正常二倍体细胞系染色体进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），结合Ｑ显带方法将６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆定位于２１ｑ２２；用柯斯质粒ＤＮＡ克隆探针与两个已知的平衡易位细胞系ＧＭ９５４２和８３２７Ｌ的染色体进行荧光原位杂交，检测并分析杂交信号在两个平衡易位细胞系染色体上的分布，结果表明柯斯质粒ＤＮＡ克隆精确定位于２１ｑ２２．２，６个柯斯质粒ＤＮＡ克隆定位结果一致。     

先天性马蹄内翻足胎鼠脊髓组织的蛋白质组学分析

目的 在构建动物模型的基础上，运用蛋白质组学实验方法，寻找马蹄内翻足畸形相关蛋白。方法 提取单纯性马蹄内翻足畸形胎鼠及正常对照胎鼠脊髓总蛋白,进行双向电泳；经PDQuest软件分析,选择差异点进行质谱鉴定，采用生物信息学方法分析结果。结果 经双向电泳分离后，畸形胎鼠与正常对照相比，脊髓组织的烯醇化酶没有表达,微管蛋白表达下调,载脂蛋白表达上调，ATP合酶F1复合体组装因子2(ATP12P)额外表达。结论 畸形胎鼠脊髓组织与正常对照比较，存在蛋白质组差异,畸形胎鼠微管蛋白、ATP12P表达改变,可能与马蹄内翻足畸形相关。     

6q25区域内一个新基因MTLC的克隆及特性分析

目的：克隆6q25区域内喉癌相关新基因。方法：以表达序列标签为电子探针，在人类基因组数据库中进行电子杂交，钓出相就基因组DNA克隆后进行基因预测。根据获得的基因序列设计引物，逆转录－聚合酶链反应扩增新基因cDNA。结果：克隆了1个6q25区域内的新基因。该基因全长约21kb，含两个外显子，其cDNA序列长1006bp，编码蛋白包括235个氨基酸。其5’侧翼序列存在癌蛋白c-Myc的结合位点，将其命名为MTLC（c-Myc target from laryngeal cancer cells）基因。同源性分析表明该基因编码蛋白与小鼠MT－MC1蛋白同源性达78％。MTLC蛋白一级结构含有一个核定位信号结构域，亚细胞定位实验证实该基因主要在细胞核表达，Northern印迹分析表明MTLC基因在心肌、肝、肾、脑等多个组织有表达。结论：成功克隆了1个新基因MTLC，该基因可能作为c-Myc的靶基因以转录因子形式参与维持细胞正常生理功能。