基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制

目的 观察氧化苦参碱（OM）联合贝伐珠单抗（BV）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的作用,并基于分泌型糖蛋白（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对OM调控BV引起的上皮间质转化（EMT）的机制进行探讨。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验观察OM（0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）及BV（0,0.25×10^-4,0.50×10^-4,1.00×10^-4,2.00×10^-4,4.00×10^-4,8.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖的影响;通过侵袭小室法（transwell）和划痕损伤修复实验观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞侵袭与迁移能力的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖相关蛋白的影响,并对Wnt/β-catenin信号通路及EMT相关蛋白的表达水平进行检测。结果 与空白组比较,OM（2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）可呈浓度依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）,而BV未表现出抑制MCF-7细胞增殖的作用,两药联合对MCF-7细胞增殖的抑制作用与OM比较差异无统计学意义。与空白组比较,OM可显著减少MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.01）,BV可明显增加MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.05,P<0.01）。与BV比较,联合后OM可显著抑制BV引起的MCF-7细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。与空白组比较,OM及两药联用可明显抑制MCF-7细胞中与细胞增殖相关蛋白激酶B（Akt）和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化（P<0.01）;OM及两药联用后显著降低Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,原癌基因（c-Myc）,CD44,G₁/S-特异性周期蛋白-D₁（cyclin D₁）蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;OM及两药联用可显著降低EMT中钙离子依赖的细胞N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）蛋白表达,增加钙离子依赖的细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平（P<0.01）,BV组上述相关蛋白的表达相反（P<0.05,P<0.01）。结论 OM与BV联合后OM可通过有效抑制BV引起的Wnt/β-catenin通路激活逆转EMT机制发挥抗乳腺癌的作用。     

白皮杉醇对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468抗肿瘤作用及机制

目的:考察白皮杉醇(PIC)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖、凋亡及细胞周期的作用,并对其作用机制进行探讨。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法考察PIC(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞成活率的影响,并计算半抑制率(IC50);采用碘化丙啶(PI)染色观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞周期的影响;采用细胞凋亡检测(Annexin V-FITC/PI)双染法观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的诱导凋亡作用;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)观察不同浓度PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞增殖、凋亡蛋白的影响,并用Western blot对分泌型糖蛋白Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路相关蛋白进行检测。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,PIC(5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L^-1)可呈浓度依赖性地抑制MDA-MB-468细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),IC50为(39.4±4.6)μmol·L^-1;作用48 h,PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)呈浓度依赖性地升高MDA-MB-468细胞处于细胞周期G0/G1期细胞(P<0.01);呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-468细胞凋亡(P<0.01),其中,PIC(20.0μmol·L^-1)诱导细胞凋亡率为49.87%;PIC(10.0,20.0μmol·L^-1)可明显降低MDA-MB-468细胞中β-catenin及原癌基因(C-myc),黏附因子(CD44)蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01);PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)可显著抑制蛋白激酶B(Akt)磷酸化,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白的磷酸化,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达水平(P<0.01);增强半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和磷酸化β-catenin的蛋白表达(P<0.01)。结论:PIC可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制MDA-MB-468细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而诱导其凋亡。     

基于计算机模拟技术以埃博拉病毒跨膜糖蛋白为靶点挖掘中药抗病毒活性分子

目的基于埃博拉病毒跨膜糖蛋白(transmembrane glycoprotein of the Ebola virus,EBOV-GP)的三维空间结构,运用计算机虚拟筛选技术从中国台湾中医药数据库TCM@TAIWAN中寻找具有抗病毒作用的中药活性分子。方法以EBOV-GP为靶点,采用类药性评估、分子对接、分子动力学模拟以及吸收、分布、代谢和排泄(absorption、distribution、metabolism and excretion,ADME)预测等多尺度虚拟筛选策略,从TCM@TAIWAN数据库中挖掘候选药效分子,并分析候选分子与靶点的相互作用情况。结果以胺碘酮为阳性对照药物,筛选出4个类药性良好的中药单体ZINC85531496、ZINC85567560、ZINC85592968、ZINC33833122,与EBOV-GP亲和力及相互作用基团均优于胺碘酮。结论采用多种计算机虚拟筛选技术挖掘EBOV-GP抑制剂,可促进从天然产物化学结构数据库中提取、设计以及实验合成抗埃博拉病毒的药效分子。     

加味温胆汤联合耳穴压豆治疗痰湿壅盛型高血压的临床观察

【目的】 观察加味温胆汤联合耳穴压豆治疗痰湿壅盛型高血压患者的临床疗效。【方法】 将116例痰湿壅盛型高血压患者随机分为观察组和对照组,每组各58例,2组患者均给予常规检查与健康宣教,对照组给予硝苯地平控释片口服治疗,观察组在对照组治疗的基础上给予口服加味温胆汤联合耳穴压豆治疗。2组均连续治疗6周。治疗6周后,评价2组临床疗效,观察2组患者治疗前后血清人软骨糖蛋白-39（YKL-40）与人纤维胶凝蛋白3（ficolin-3）表达的变化情况,以及中医证候积分的变化情况。比较2组患者治疗前后动态血压及血压变异性的变化情况,包括24 h平均收缩压（24 h SBP）、24 h平均舒张压（24 hDBP）、24 h平均舒张压变异性（24 h DBPV）和24 h平均收缩压变异性（24 h SBPV）。并评价2组的安全性及并发症的发生情况。【结果】（1）治疗后,2 组患者的血清 YKL-40、ficolin-3 水平均明显改善（P＜0.05）,且观察组在改善血清 YKL-40、ficolin-3水平方面均明显优于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（2）治疗后,2组患者的中医证候积分均明显改善（P＜0.05）,且观察组在改善中医证候积分方面明显优于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）治疗后,2 组患者的 24 hSBP、24 h DBP、24 h DBPV 与 24 h SBPV 均明显改善（P＜0.05）,且观察组在改善 24 h SBP、24 h DBP、24 h DBPV 与 24 hSBPV 方面均明显优于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（4）观察组总有效率为 94.83%（55/58）,对照组为 82.76%（48/58）。观察组疗效优于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。（5）观察组并发症总发生率为8.62%（5/58）,对照组为6.90%（4/58）。观察组并发症总发生率稍高于对照组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。【结论】 加味温胆汤联合耳穴压豆治疗痰湿壅盛型高血压,能够明显地改善患者血压变异性,降低血清YKL-40、ficolin-3水平,改善患者的临床症状,临床疗效显著。     

外敷透骨血竭散对类风湿性关节炎活动期anti-CCP、DKK-1影响的研究

目的:研究外敷透骨血竭散对类风湿性关节炎活动期抗环瓜氨酸多肽抗体(anti-CCP)、糖蛋白(DKK-1)的影响。方法:选取2017年3月至2018年3月长沙市第三医院收治的类风湿性关节炎患者100例作为研究对象,按照随机数字表法随机分为对照组和观察组,每组50例。对照组使用来氟米特片治疗,观察组患者使用来氟米特片联合外敷透骨血竭散治疗。比较2组患者临床指标,评价治疗前后中医证候情况,检测患者治疗前后肠球菌表面蛋白(ESP)、类风湿因子(RF)、DKK-1、Anti-CCP、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)水平。结果:治疗后2组患者临床指标、中医证候评分、ESP、RF、DKK-1、Anti-CCP、IL-1、IL-6、TNF-α、Hs-CRP水平均低于治疗前(P0.05);且治疗后观察组临床指标、HAQ评分、中医证候评分、ESP、RF、DKK-1、Anti-CCP、IL-1、IL-6、TNF-α、Hs-CRP水平均低于对照组(P0.05)。结论:运用外敷透骨血竭散对类风湿性关节炎患者治疗可直接用于病灶处,能迅速缓解关节疼痛,减轻患者痛苦,改善症状。     

补肾活血方对慢性特发性血小板减少性紫癜小鼠血小板功能的影响

目的:观察补肾活血方对血小板活化和聚集相关糖蛋白表达的影响,探讨该方是否能够通过改善血小板功能进而治疗慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组、CITP模型组、醋酸泼尼松组和补肾活血方组。通过被动免疫造模法成功建立CITP小鼠模型,然后分别用0.9%生理盐水、醋酸泼尼松和补肾活血方干预14 d,采用全自动动物血液分析仪检测小鼠外周血血小板数量和凝血时间;采用流式细胞仪检测各组小鼠血小板活化和聚集相关糖蛋白(CD41、CD61、CD62p、PAC-1)的表达。结果:与正常对照组比较,CITP模型组血小板显著下降、凝血时间显著延长。醋酸泼尼松、补肾活血方干预14 d后,与CITP模型组比较,其血小板显著增加,凝血时间显著下降;其糖蛋白CD41、CD61、CD62p和PAC-1的荧光强度和阳性率显著下降。结论:补肾活血方能在一定程度上有效增加血小板数量和降低凝血时间,并且能够通过改变血小板糖蛋白的表达进而改善血小板的功能,减轻患者的出血。     

死亡相关蛋白激酶在结肠癌耐药中的作用

目的 探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK）在结肠癌耐药中的作用.方法 应用免疫组织化学（免疫组化）SP法检测61例结肠癌组织及32例癌旁组织中DAPK的表达.以氟尿嘧啶（5-FU）诱导建立的结肠癌耐药细胞系HCT116/5-FU为模型.通过转染DAPK-siRNA下调DAPK的表达（DAPK-siRNA组）,转染FAM-siRNA（FAM-siRNA组）作为对照;通过过表达载体上调DAPK的表达（DAPK过表达组）.采用实时定量荧光PCR及蛋白质印迹法检测3组的DAPK、多药耐药蛋白（MRP）和P-糖蛋白（P-gp）的mRNA及蛋白表达水平;MTT法及流式细胞法分别测定3组细胞在未经5-FU处理及浓度为8 μg/ml的5-FU处理下的细胞增殖和凋亡情况.结果 DAPK在结肠癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁组织[18.0％（11/61）比90.6％（29/32）,P＜0.05].与FAM-siRNA组比较,DAPK-siRNA组细胞中DAPK mRNA水平及蛋白表达水平均明显降低,DAPK过表达组则均显著升高（均P＜0.05）.在5-FU处理下,相比FAM-siRNA组,DAPK过表达组细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显升高（均P＜0.05）;DAPK-siRNA组细胞增殖和细胞凋亡率均无明显变化（均P＞0.05）.与FAM-siRNA组比较,DAPK过表达组两种耐药蛋白的mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P＜0.05）,而DAPK-siRNA组与FAM-siRNA组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 DAPK能够抑制结肠癌耐药细胞的增殖,促进其凋亡,并可能通过抑制MRP和P-gp的mRNA和蛋白表达,来增强结肠癌细胞对药物的敏感性。     

海藻糖对低温储存皮肤组织桥粒芯糖蛋白2表达及皮肤活力影响的实验研究

目的：比较海藻糖与传统低温保护剂丙二醇对皮肤低温保存后桥粒芯糖蛋白2（Dsg2）表达以及皮肤活力的影响,为寻求皮肤组织低温保护剂的优良配方提供实验依据。方法：经患者同意在烧伤后整形术中获取患者新鲜皮肤组织,分为对照组（新鲜皮肤,不作任何保护剂处理）、海藻糖/二甲基亚砜（T/D ）组（皮肤以0.5 mol/L T/D液浸泡）、二甲基亚砜/丙二醇（D/P）组（皮肤以 D/P 液浸泡）,液氮冻存21 d,复温,Dsg2单克隆抗体免疫组化染色并用 Image Pro5.0图像分析处理系统测定皮肤组织 Dsg2表达的光密度值;用皮肤内琥珀酸脱氢酶（SDH）比色法检测皮肤组织 SDH 活性,以此表示皮肤活力。结果：低温保存21 d时,D/P组Dsg2表达（0.247±0.006）显著低于T/D组（0.250±0.009,P＜0.05）与对照组（0.254±0.007,P＜0.05）;对照组 SDH 水平为18.1±0.6,T/D组为17.4±0.9,D/P组为15.7±0.9,D/P 组 SDH 明显低于 T/D组（P＜0.01）。结论：海藻糖对皮肤组织及细胞间桥粒连接的保护作用优于传统低温保护剂。     

血小板膜糖蛋白Ⅳ再分布的研究

血小板膜糖蛋白Ⅳ再分布的研究刘东旭沈迪魏文宁王爱莲刘仲萍杨锐邹萍为了探讨血小板膜糖蛋白（ＧＰ）Ⅳ再分布的变化及其与胞内α－颗粒凝血酶敏感蛋白（ＴＳＰ）释放的关系，我们对血小板膜ＧＰⅣ再分布进行初步研究。材料和方法１血标本的来源和血小板的分离健康自愿献...     

两种药物促排卵过程中PCOS患者AMH变化

目的：探讨来曲唑（LE）和尿促性腺激素（HMG）治疗多囊卵巢综合征（PCOS）患者在促排卵过程中抗苗勒氏管激素（AMH）的变化。方法：选择PCOS患者50例，随机分为2组，分别给予来曲唑2．5mg／d口服，共5d；或低剂量递增法肌注hMG；对照组50例；阴道超声计数小卵泡数和优势卵泡数，测定月经第3天、第8天以及hCG日（对照组LH峰日）血AMH、E2。结果：在促排卵过程中，hMG组AMH水平逐渐降低，与E2升高间成负相关（r＝0．65）；LE组AMH水平略有下降但无显著性；对照组AMH值无明显变化。结论：LE治疗过程中PCOS患者AMH变化及卵泡生长更接近自然月经周期。