基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制

目的 观察氧化苦参碱（OM）联合贝伐珠单抗（BV）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的作用，并基于分泌型糖蛋白（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对OM调控BV引起的上皮间质转化（EMT）的机制进行探讨。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验观察OM（0，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，16.0 mmol·L^-1）及BV（0，0.25×10^-4，0.50×10^-4，1.00×10^-4，2.00×10^-4，4.00×10^-4，8.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖的影响；通过侵袭小室法（transwell）和划痕损伤修复实验观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞侵袭与迁移能力的影响；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖相关蛋白的影响，并对Wnt/β-catenin信号通路及EMT相关蛋白的表达水平进行检测。结果 与空白组比较，OM（2.0，4.0，8.0，16.0 mmol·L^-1）可呈浓度依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05，P<0.01），而BV未表现出抑制MCF-7细胞增殖的作用，两药联合对MCF-7细胞增殖的抑制作用与OM比较差异无统计学意义。与空白组比较，OM可显著减少MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.01），BV可明显增加MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.05，P<0.01）。与BV比较，联合后OM可显著抑制BV引起的MCF-7细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。与空白组比较，OM及两药联用可明显抑制MCF-7细胞中与细胞增殖相关蛋白激酶B（Akt）和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化（P<0.01）；OM及两药联用后显著降低Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin，原癌基因（c-Myc），CD44，G₁/S-特异性周期蛋白-D₁（cyclin D₁）蛋白表达（P<0.05，P<0.01）；OM及两药联用可显著降低EMT中钙离子依赖的细胞N-钙黏蛋白（N-cadherin），波形蛋白（Vimentin）蛋白表达，增加钙离子依赖的细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平（P<0.01），BV组上述相关蛋白的表达相反（P<0.05，P<0.01）。结论 OM与BV联合后OM可通过有效抑制BV引起的Wnt/β-catenin通路激活逆转EMT机制发挥抗乳腺癌的作用。