微流控芯片技术分析细胞外酸性环境对肿瘤细胞P-糖蛋白表达、活性及其介导的道诺霉素细胞毒性的影响

目的采用微流控芯片技术分析细胞外酸性环境对肿瘤细胞P-糖蛋白(P-gp)表达、活性及其介导的道诺霉素细胞毒性的影响。方法在微流控芯片上将A549细胞分为实验组和对照组,实验组用p H为6.6酸性细胞培养液处理,对照组用p H为7.4中性培养液常规培养,芯片上进行细胞免疫荧光技术分析P-gp表达,罗丹明123外排实验评价P-gp活性,细胞存活/凋亡荧光染色法分析道诺霉素的细胞毒性。结果微流控芯片可为A549细胞生长提供适宜的微环境,细胞在72 h后融合度能达到90%以上。酸性细胞培养液处理对P-gp表达未产生显著影响,但可显著增强P-gp活性,处理时间6 h时A549细胞P-gp活性达到峰值。酸性细胞培养液处理6 h后道诺霉素细胞毒性效率显著降低,在P-gp抑制剂维拉帕米协同作用下道诺霉素细胞毒性得到逆转。结论微流控芯片技术可缩短分析时间,降低试剂耗量,为进一步认识肿瘤多药耐药机制和高效肿瘤耐药逆转剂筛选提供新的技术平台。     

微流控芯片技术分析细胞外酸性环境对肿瘤细胞P-糖蛋白表达、活性及其介导的道诺霉素细胞毒性的影响

目的 采用微流控芯片技术分析细胞外酸性环境对肿瘤细胞P-糖蛋白(P-gp)表达、活性及其介导的道诺霉素细胞毒性的影响。方法 在微流控芯片上将A549细胞分为实验组和对照组,实验组用pH为6.6酸性细胞培养液处理,对照组用pH为7.4中性培养液常规培养,芯片上进行细胞免疫荧光技术分析P-gp表达,罗丹明123外排实验评价P-gp活性,细胞存活/凋亡荧光染色法分析道诺霉素的细胞毒性。结果 微流控芯片可为A549细胞生长提供适宜的微环境,细胞在72 h后融合度能达到90%以上。酸性细胞培养液处理对P-gp表达未产生显著影响,但可显著增强P-gp活性,处理时间
6 h时A549细胞P-gp活性达到峰值。酸性细胞培养液处理6 h后道诺霉素细胞毒性效率显著降低,在P-gp抑制剂维拉帕米协同作用下道诺霉素细胞毒性得到逆转。结论 微流控芯片技术可缩短分析时间,降低试剂耗量,为进一步认识肿瘤多药耐药机制和高效肿瘤耐药逆转剂筛选提供新的技术平台。     

苦参碱触发的K562细胞胞内钙信号的动态变化

目的 研究苦参碱诱导K562细胞分化的信号转导机制。方法 以Fura 2-AM为荧光探针,定量分析苦参碱作用后K562细胞内钙离子浓度的动态变化。结果 经苦参碱处理后,在胞外有钙的情况下,K562细胞内钙离子浓度由129．02nmol／L升至207．50nmol／L,并维持较长时间;在无胞外钙的情况下,胞内钙离子浓度由129．02nmol／L迅速升至164．22nmol／L,并迅速恢复。两者的增高幅度均与苦参碱浓度呈正相关。结论 在苦参碱诱导K562细胞分化过程中,钙离子浓度的变化是一重要的与细胞的增殖抑制和分化相关的早期信号。     

综合医院全科医学科的定位与发展

随着医学模式的转变,全科医学已受到广泛关注和高度重视,必须大力发展全科医学得到共识。国内专家学者普遍的观点表明,综合医院设置全科医学科并进行规范化的学科建设,开展全科医学医、教、研工作,是全科医学发展的重要保障[1],也是21世纪医学发展的要求[2-3]。     

下调GINS2表达抑制HL60细胞周期调控因子

目的 观察下调GINS2的表达后对人白血病细胞系HL60周期调控因子的变化并探讨其机制.方法 脂质体介导并稳定转染干扰质粒的细胞为于扰组,转染阴性对照质粒的细胞为阴性对照组,只加入脂质体的细胞为空白对照组,未转染的HL60细胞为未处理组.集落形成实验测定细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期;3 H-TdR掺人实验检测细胞DNA合成;Western blot检测CDK1、cyclinB1等蛋白;RT-PCR检测ATM,CHK2,P53等mRNA水平;Western blot检测其蛋白水平.结果 和其他3组相比,干扰组细胞G2期细胞数明显增加、DNA合成受阻、增殖减慢.与G2期相关周期调控蛋白CDK1,cyclinB1的表达随时间变化而明显降低.和其他3组相比,干扰组细胞ATM,CHK2,P53转录水平和翻译水平显著上调.结论 下调GINS2表达后可抑制HL60细胞DNA复制并影响其G2期进程,机制可能与ATM,CHK2,P53等基因相关.     

NLS-RARα与ISCA1相互作用在哺乳动物细胞中的验证

目的：利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术验证铁硫簇组装蛋白1（ISCA1）与带核定位信号的维甲酸受体α（NLS—RARα）蛋白间的相互作用．方法：构建含融合蛋白的真核表达载体pCMV—HA—NLS—RARα和pCMV—Myc—ISCA1,酶切及测序鉴定正确后,转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术进一步证实二者之间的相互作用．结果：真核表达载体成功构建并经测序鉴定,转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA—NLS—RARer相互作用蛋白复合物后,用抗MycmAb进行蛋白印记检测,可以检测到Myc-ISCA1蛋白的表达．结论：分别成功构建了含HA—NLS—RARer与Myc—ISCA1融合蛋白的真核表达载体,并利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术在体外证实了NLS—RARα与ISCA1之间存在相互作用．     

带核定位信号的RARα与JTV1蛋白相互作用的验证实验

目的 通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用.方法 将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术在体外验证二者之间的相互作用.结果 NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹检测,可以检测到Myc-JTV1蛋白.结论 利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术验证了NLS-RARα与JTV1间存在相互作用.     

定向医学生自主－合作学习模式的构建与探讨

定向医学生的培养是我国为基层医疗卫生机构输送全科医学人才的重大举措。文章结合重庆市定向医学生的专业培养特点，分析并论述了构建自主—合作学习模式的缘由，就该模式的内涵及相关理论进行了探讨。并据此设计实施了自主-合作学习模式，从组织管理机制、竞争激励机制和评价机制方面总结了自主-合作学习的构建策略，探索适合定向医学生的教育实践模式。     

全科医师规范化培训的探索与实践

作为卫生部全科医师规范化培训试点基地,笔者通过多途径开展临床师资培训,如全科医学与社区卫生服务短期师资培训、院报宣传全科医学临床带教知识、全科医学教研室活动、社区卫生服务中心全科诊疗等,提高了临床师资的带教水平;通过改进临床培训方案及加强人文素质培养,如增加常见病的培训病例数、添加对肿瘤科和老年病科实践的具体要求,以及让学员参与党、团、工会组织的学习与活动、参与业务管理部门组织的医疗社会活动、参观人文景点、聆听知名医学专家的人文社会学讲座等,提高了全科医师规范化培训质量,对广泛开展全科医师规范化培训具有一定的借鉴意义。