~3H-Tdr掺入人造血细胞株诱导细胞死亡和细胞周期阻滞

目的 :研究 3H-胸苷 (3H- Tdr)掺入人造血细胞株对其细胞周期变化的影响及细胞死亡的机制。方法 :1采用 5种人白血病 HL - 6 0、Molt- 4、Jurkat、Raji和 SKW6 - CL 4细胞。 2将浓度分别为 7.4、74和 185 k Bq/ m l的 3H- Tdr与细胞共培养 1～ 4d。 3提取 DNA,2 %琼脂糖凝胶电泳分离 ,紫外灯下观察 DNA裂解率。 4台盼蓝染色 ,光镜下观察细胞存活和细胞增殖。 5 Western印迹分析与凋亡相关蛋白 (Bcl- 2、Bad和 Bax)、蛋白酶 caspase- 3前体蛋白及caspase- 3作用靶蛋白的降解产物 (DNA- PKcs和 PARP)。 6流式细胞术检测细胞周期…     

膀胱不同充盈状态下RapidArc与IMRT对早期宫颈癌靶区剂量的影响

  目的  比较不同放疗技术及膀胱充盈状态对宫颈癌术后放疗靶区剂量的分布及正常组织受照体积的影响,探讨宫颈癌术后放疗的理想模式。   方法  选择10例宫颈癌术后患者,分别进行膀胱充盈状态及排空状态下模拟CT扫描,处方剂量50 Gy,分别制定双弧快速旋转调强计划（RapidArc）及7野调强适形计划（IMRT）。计划的实施均为Varian公司的TrueBeam直线加速器。利用每个计划的剂量一体积直方图（DVH）进行数据分析。   结果  膀胱充盈状态下IMRT及RapidArc的靶区均匀性指数分别为1.05及1.04（P>0.05）,膀胱排空状态下IMRT及RapidArc的靶区均匀性指数均为1.04（P>0.05）。膀胱充盈状态下,IMRT及Rapi. dArc的靶区适形度指数分别为0.71及0.73（P>0.05）。膀胱排空状态下,IMRT及RapidArc的靶区适形度指数分别为0.71及0.73（P>0.05）。小肠及膀胱接受30 Gy及40 Gy剂量的体积,膀胱充盈状态下优于膀胱排空状态,两种技术间无显著性差异。直肠及膀胱接受30 Gy剂量的体积IMRT优于RapidArc。RapidArc在治疗时间及机器跳数上明显优于IMRT。   结论   7f-IMRT及双弧RapidArc在靶区适形度及均匀性方面无显著性差异;无论何种技术,膀胱充盈状态对小肠及膀胱的保护均优于膀胱排空状态;IMRT在直肠及膀胱的保护方面均优于RapidArc,RapidArc在机器跳数及治疗时间上优于IMRT。      

不同照射剂量对肝癌细胞生长抑制率的影响

目的探讨不同照射剂量对肝癌细胞生长抑制率的影响。方法对SMMC 7721肝癌细胞,应用国产X射线深部治疗机进行照射,肝癌细胞共分为7组,分别给予0Gy(假照组)、0.5Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy进行照射。通过进行细胞克隆形成实验计算细胞存活分数。采用AnnexinⅤ和PI双染,然后采用流式细胞术检测不同辐射剂量对肝癌细胞早期凋亡的影响。结果细胞克隆形成实验结果表明,在不同剂量0、0.5、1、2、4、6和8Gy的照射组中,细胞存活分数分别为89.12±1.43、84.17±1.58、80.45±2.35、73.21±2.56、70.23±3.05、67.48±2.72、61.38±1.79%。与假照组(0Gy照射组)比较,其他照射组的细胞存活分数均明显低于假照组(P<0.05)。与0.5Gy和1Gy组相比,2、4、6、8Gy照射组的细胞存活分数明显减低(P<0.05)。而0.5Gy和1Gy照射组之间无显著差异。2、4、6Gy组之间比较无显著差异。而8Gy照射组的细胞存活分数明显低于任何其他组(P<0.05)。在不同剂量0、0.5、1、4、6和8Gy照射组中,细胞凋亡率分别为5.13±0.24、6.34±0.43、8.16±0.41、10.47±0.53、14.38±0.26、18.57±0.44和22.39±0.36%。与对照组相比,各实验照射组中细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.05),各组间比较均存在显著差异(P<0.05)。结论随着照射剂量的增加细胞凋亡比率明显增加,细胞存活分数减少。因此照射剂量是影响细胞生存率的重要因素。     

抗抑郁药万拉法新的神经保护作用

目的：探讨万拉法新的神经保护作用及其机制。 方法：采用体外原代培养的大鼠海马神经元,复制谷氨酸损伤模型以模拟抑郁症时的病理改变,在体外通过MTT法检测万拉法新对神经元存活率的影响,并且测定万拉法新应用前后LDH的释放、GSH水平、MDA含量和SOD活性的改变情况。 结果：万拉法新抵抗了谷氨酸诱导的神经元损伤,提高了神经元存活率,减少了LDH的释放,维持细胞膜的完整性,提高了神经细胞内SOD活性和GSH水平,降低了MDA含量。 结论：万拉法新具有神经保护作用。     

妇科肿瘤伴腹主动脉旁淋巴节转移IMRT靶区勾画探讨

目的 初步探讨妇科肿瘤伴腹主动脉旁淋巴节转移患者IMRT的CTV勾画范围。方法 回顾分析2010—2016年收治的56例妇科肿瘤伴腹主动脉旁淋巴结转移患者。通过影像学方法判断腹主动脉旁转移淋巴结数目和分布情况。结果 56例妇科肿瘤患者腹主动脉旁淋巴结转移共计108个,平均每位患者转移淋巴结数目为2个(1~4个),腹主动脉旁转移淋巴结平均直径为2.3 cm (1.2~4.0 cm)。20个(19%)淋巴结位于L₄水平,38个(35%)转移淋巴结位于L₃水平,44个(41%)转移淋巴结位于L₂水平,6个(5%)位于L₁水平。腹主动脉旁左侧组转移淋巴结共71个(66%)。腹主动脉-腔静脉间组转移淋巴结共20个(19%)。下腔静脉旁右侧组转移淋巴结共17个(15%)。结论 妇科肿瘤腹主动脉旁淋巴结勾画不应以血管周围外扩固定范围方式勾画,腹主动脉旁左侧应充分勾画在靶区范围内,靶区上界应至肾动脉水平,对肾动静脉旁有淋巴结转移者靶区上界应适当扩展。     

电离辐射的信号传递与细胞反应

不同的细胞外刺激因素通过细胞内的信号传递途径作用到靶分子产生相应的细胞效应.电离辐射作为一种特殊的物理因子,它的信号传递有其特殊性.已经证实,哺乳动物细胞在很大剂量范围内的电离辐射作用下可激活细胞反应通路,其通路分别介导细胞存活和死亡的保护和毒性反应.细胞保护性反应涉及有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3-磷酸激酶(phosphatidyl inositol-3-phosphate kinase,PI3 kinase)级联反应的通路,可刺激辐射损伤后修复的细胞增殖.细胞毒性或应激反应的最直接后果涉及Jun N-末端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK,现称为MAPK8),产生细胞凋亡和(或)其他形式的死亡.一般认为,剂量超过5 Gy,照射的细胞存活是很低的,明显的死亡信号被激活.但是,在许多研究中这种认识是不够的,因为信号传递事件与细胞增殖和克隆存活或增殖死亡和凋亡的细胞反应终点无关.后者细胞死亡的形式也可能不同,主要取决于研究的细胞类型.目前的资料提示,造血细胞、成纤维细胞或其他正常细胞较癌细胞更倾向于辐射诱导的细胞凋亡.本文作者从下面4个方面内容简要阐述电离辐射的信号传递与细胞反应.     

人血管内皮细胞生长因子基因体外转染皮肤成纤维细胞后的表达效应

目的：观察外源性人血管内皮细胞生长因子基因导人正常真皮成纤维细胞后，能否表达及分泌血管内皮细胞生长因子，为进一步构建转VEGF165基因组织工程皮肤在创伤修复中的应用提供新移植物。 方法：实验于2001—06／2005—06在长春吉林大学完成。①真核表达载体pcDNA3．0-hVEGF165的扩增、纯化和鉴定过程为大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备→pcDNA3．0-hVEGF165质粒DNA细菌转化→pcDNA3．0-hVEGF165质粒大量制备（碱裂解法）-质粒纯化-质粒含量纯度测定。提取的质粒载体用EeoRⅠ和xbaⅠ双酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定。②选取清洁级新生日本大耳白兔2只，无菌条件下取新生兔皮肤，尽量去除皮下组织，切成宽0．3cm小条块，Ⅰ型胶原酶消化，进行真皮成纤维细胞的分离与培养。脂质体介导真核表达质粒pcDNA3．0-hVEGF165转染体外培养的兔皮肤成纤维细胞，经G418筛选，获得阳性转染细胞克隆，并进行传代扩增。③酶联免疫吸附法检测转染后不同时间段的血管内皮细胞生长因子蛋白表达水平；原位杂交显示转基因细胞内VEGF165 mRNA的表达情况；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况；透射电子显微镜观察转染后真皮成纤维细胞的超微结构。 结果：①质粒酶切鉴定结果：提取的质粒经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定后可得到5．4kb和0．57kb两个片段，与原质粒图谱符合，表明所提取的质粒为重组质粒pcDNA3．0-VEGF165。②pcDNA3-hVEGF165基因转染真皮成纤维细胞情况：共进行15次转染试验，35孔（皿）均有G418抗性集落形成，表明pcDNA3．0-hVEGF165经脂质体介导可有效转染正常皮肤成纤维细胞。③血管内皮细胞生长因子蛋白的表达：pcDNA3．0-hVEGF165转染成纤维细胞后，24h即有较高水平的血管内皮细胞生长因子蛋、白表达，高达（3280&;#177;2054）ng／L，并于48，72h呈下降趋势。④血管内皮细胞生长因子cDNA原位杂交检测结果：转染后成纤维细胞可见散在的阳性细胞表达hVEGF mRNA。G418应用2-4周后，可成功筛选出转基因成纤维细胞克隆，筛选后可见大量阳性的转染细胞表达hVEG FmRNA。⑤成纤维细胞的细胞周期分布及凋亡检测：转染后成纤维细胞S期细胞比例增加，G1和G2期细胞减少，表明细胞DNA的合成以及细胞的增殖活动加强。但细胞凋亡率逐渐升高。转染前为1．26％，转染后2d为2．64％，至12代时高达17135％。⑥转染后成纤维细胞超微结构观察：细胞表面有较多微绒毛，核呈不规则形，胞质内可见较多的粗面内质网、线粒体，沿膜可见一些膜包被颗粒。 结论：真核表达质粒pcDNA3．0-hVEGF165成功导人家兔皮肤成纤维细胞，在短时期内可高水平地表达分泌血管内皮细胞生长因子，在治疗缺血性疾病和促进创伤修复及以其作为种子细胞构建转基因组织工程皮肤治疗皮肤缺损等方面显示出较好的应用前景。     

大剂量奥施康定联合减症放疗等综合治疗晚期肺癌伴癌痛患者1例

1 资料与方法 1.1 临床资料 患者,男,46岁.因“确诊小细胞肺癌9个月、右肺腺癌、骨转移、腹壁转移1个月”于2015年03月21日入院. 患者于1年前无明显诱因出现咳嗽、咳痰,多为大量白色黏痰,伴痰中带血,无发热、盗汗.就诊于当地医院给予抗感染治疗(具体用药不详),症状未见明显缓解,行肺CT检查提示右上肺团块状高密度影.后就诊于我院行支气管镜取病理确诊为肺小细胞肺癌(局限期),于我院行EP方案联合化疗8周期及放疗,靶区剂量66Gy/33f.6个月前患者因肩胛区出现跳跃性疼痛,疼痛评分为6分,口服起始剂量奥施康定20mg,对症治疗.3个月前因伴发热、咳嗽、咳痰再次入院,行纤维支气管镜及PET-CT明确诊断为肺恶性肿瘤(腺癌)、肺恶性肿瘤(小细胞肺癌,广泛期)、骨继发恶性肿瘤、腹壁继发恶性肿瘤,给予培美曲塞二钠单药化疗2周期,肩胛部疼痛较前无明显好转,疼痛控制不佳,为求进一步诊治入我科.病程中无发热、无咳嗽、咳痰、近1个月体重减轻约5kg.既往史无特殊.体格检查:患者一般状态稍差,KPS评分70分,全身浅表淋巴结未触及明显肿大,右上肺呼吸音弱,左侧肩胛区见一约15cm×15cm隆起,皮肤发红,触之皮温稍高,质稍硬,无波动感,轻度压痛.     

5-氟尿嘧啶对Jurkat和EL-4细胞周期解偶联的影响

目的：研究5-氟尿嘧啶（5-FU）不同剂量和给药后不同时间Jurkat和EL-4细胞周期解偶联的变化规律。方法：采用不同剂量（0、0.001、0.010、0.100和1.000 mg•L^-1）5-FU处理Jurkat和EL-4细胞,给药0、4、8、16、24和48 h后分别收集细胞,应用碘化丙啶（PI）荧光标记及流式细胞术（FCM）检测分析细胞倍体变化的剂量-效应和时间-效应规 律。结果：不同剂量5-FU给药后16 h,Jurkat细胞八倍体细胞百分率在0.001、0.010、0.100和 1.000 mg•L^-1各个剂量组均显著低于0 mg•L^-1组（P<0.01） ,无剂量依赖性;EL-4细胞八倍体细胞百分率在0.010 和 0.100 mg•L^-1组显著高于0 mg•L^-1组（P<0.05）。0.100 mg•L^-15-FU 给药后,Jurkat细胞八倍体细胞百分率在8、16和24 h显著低于相应对照组（P<0.01）,48 h显著高于相应对照组（P<0.01）;EL-4细胞八倍体细胞百分率在4、8和16 h显著高于相应对照组（P<0.05）,48 h显著低于相应对照组（P<0.01）。结论：5-FU可以诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联,而不能诱导Jurkat细胞发生细胞周期解偶联。     

肛周横纹肌肉瘤根治性同步放化疗1例

正横纹肌肉瘤(RMS)是起源于间叶细胞的一种恶性肿瘤,是儿童最常见的软组织肉瘤,根据组织学和遗传学特点可分为较常见、预后较好的胚胎型、更具侵袭性的腺泡型和罕见的成人多形型。小儿横纹肌肉瘤以胚胎型居多,好发部位与组织学类型和年龄相关,以头颈部、泌尿生殖系统、四肢及腹膜后多见[1]。但肛周横纹肌肉瘤(PRMS)较为少见,仅占RMS的2%,并伴有高风险和低治愈率,预后极差[2]。肿瘤呈浸润生长,生长迅速,转移较早,多经