Effect of rhBMP-2m on c-Myb gene expression in bone marrow of irradiated mice

Bonemorphogeneticproteins(BMPs),membersofthetransforminggrowthfactor(TGF)-βsuperfami-lyareagroupofrelatedproteinsthatarecapableofinducingtheformationofcartilageandbone.BMPsarenowregardedasmultifunctionalcytokines.rhBMP-2mcanbeusedtotreattheinjuryofacuteir-radiationsicknessinmicewhichisprobablyrelatedtoitspromotingtherecoveryofhematopoiesiscellsinbonemarrowafterirradiation[1],butthemechanismre-mainsunknown.c-Mybismosthighlyexpressedinhematopoieticcellsanditsoncogenicactivationleadstotransf…     

Intratracheal administration of recombinant adenovirus containing IL-18 gene in treatment of experimental metastatic lung carcinoma

Objective: To study the treatment of experimental metastatic lung carcinoma by intratracheal injection of IL-18 gene recombinant adenovirus. Methods: (1)The mouse IL-18 mRNA was detected by RT-PCR, and the concentration of 1L-18 and associated cytokines in lung lavages and blood were determined by ELISA at different time points after intratracheal injection of IL-18 recombinant adenovirus. (2)The lung metastasis nodes, mouse survival periods and survival rates were evaluated. NK activity and CTL activity were determined by 51Cr 4 h release method. Results: (1)IL-18 mRNA was detectable in lung tissue 6 h after intratracheal use of IL-18 recombinant adenovirus, and the concentration of IL-18 in lung lavage was higher than that in peripheral blood. Neither IL-18 mRNA nor IL-18 was detectable in control group. (2) Intmtmcheal use of IL-18 recombinant adenovirus resulted in increased CTL and NK activity, longer survival time and higher survival rates compared with the control group, showing significant therapeutic effect on experimental lung metastasis. Conclusion: Intratracheal use of adenovirus vector containing IL-18 gene has therapeutic effect on the lung metastasis, denoting that gene therapy of lung diseases could be applied through airway directly with recombinant adenovirus.     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

南通地区汉族人血管紧张素Ⅰ转换酶基因频率分布

目的：研究南通地区健康汉族人血管紧张素Ⅰ转换酶（ACE）基因频率分布。方法：以ACE基因第16内含子1个27bPAlu顺序插入／缺失（I／D）型为多态性标志,用聚合酶链反应（PCR）方法扩增ACE基因第16内含子片段,1％琼脂凝胶电泳分析PCR产物。结果：60例健康汉族人ACE基因型频率分布为I／I＝41．75,I／D＝38．3％,D／D＝20．05,等位基因频率分别为I＝60．85,D＝39．2％,结论：ACE基因频率分布与年龄,性别无关,汉族人ACE基因分布与日本人相近,但D／D基因型及D等位基因频率低于欧美人群。     

川芎嗪对肾小球疾病患者血浆内皮素和降钙素基因相关肽的影响

目的：通过研究川芎嗪（tetramethyl pyrazine,TMP）对肾泪示疾病血浆内皮素（endothelin-1,ET-1）和降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide,CGRP)的影响,探讨川芎嗪改善肾脏血液循环,保护肾功能的机理。方法：对肾小球疾病病例在同等治疗基础上,治疗组加用川芎嗪,对照组不用川芎嗪,分别检测两组病人治疗前和治疗后血浆中ET－1和CGRP含量。结果：治疗组治疗后与治疗前比较血浆中的ET－1下降和CGRP上升,均有特别显著性差异;对照组治疗前后比较,血浆中ET－1下降和CGRP上升,显著性差异。结论：川芎嗪治疗肾小球疾病可能是通过减少内皮细胞ET－1的产生和促进CGRP的生成,改善肾脏血液循环,对肾功能起保护作用。     

新的人抗HBsAg抗体Fab cDNA的克隆及序列分析

目的 从已构建的人抗－ＨＢsAg噬菌体抗体库中筛选出结合乙肝表面抗原（ＨＢsAg)的特异的人噬菌体抗体（Ｆab段）,并进行基础序列分析。方法 对噬菌体抗全库进行三轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选,使特异性噬菌体抗体得到了富集,ＥＬＩＳＡ实验和ＥＬＩＳＡ竞争抑制实验鉴定出乙肝表面抗原的特异性抗体,同时对筛选出的克隆进行基因序列分析。结果 得到与乙肝表面抗原特异结合的抗体,并通过基因序列分析证明为抗乙肝ＨＢsAg的抗休天经地义人得到的抗惭肝ＨＢ－sAg的特异抗体为下一步表达纯化工作奠定了基础。     

Endostatin基因真核表达载体的构建及活性鉴定

目的：构建endostatin基因的真核表达载体,并将其转染C6脑胶质瘤 细胞,探讨其体外抑制血管内皮细胞生长的活性。方法：利用PCR将大鼠血清蛋白分泌信号连接在endostatin基因的碳末端,构建成真核表达载体pcDNA3-Sendostatin,利用Lipofectamine法将其转染C6脑胶质瘤细胞,采用细胞增殖实验进行endostatin表达蛋白体外活性鉴定。结果：成功构建了endostatin基因真核表达载体,转染该载体的C6脑胶质瘤细胞可分泌表达抑制血管内皮细胞增生的endostatin蛋白。结论：endostatin是一种有效的血管生成抑制剂,可进一步用于在体肿瘤的抗血管生成治疗。     

动脉粥样硬化遗传易感性与HUMARA多态性的相关性

目的 研究HUMARA基因多态性在陕西地区老年动脉粥样硬化（AS）人群中分布规律及其该位点与AS遗传易感性的关系。方法 应用多聚酶链反应（PCR）对96例老年AS患及92例非AS老年人HUMARA－STR（短串联重复序列short tandem repeats)位点进行多态性分析。结果 在HUMARA位点重复单位：CAG,对照群体片段大小在280－445bp之间,重复次数为N＝23－77,杂合度为83％,多态信息量（PIC）为0．76;AS人群中HUMARA位点,其片段大小在220－445bp之间,重复次数为N＝2－77,杂合度为89％,PIC为0．80。两组的基因频率分布比较无显性差异,但将男性的AS组与对照比较差异有显性;女性的AS组与对照比较差异无显性;正常组男性与女性比较差异无显性;AS组男性与女性比较差异有显性。结论 HUMARA基因多态位点可能作为男性易患动脉粥样硬化的遗传标记。     

脂质体介导下重组pcDNA3-hBMP3转染兔关节软骨细胞的条件

目的　探讨基因转移效率与 pc DNA3- h BMP3质粒及阳离子脂质体的浓度、转染时机以及细胞的种殖密度等因素的关系 ,以寻求最佳的基因转染条件 .方法　细胞密度按 2× 10 4· cm- 2 接种后 ,对细胞接种后即时、孵化 2 ,5和 7d进行转染效率研究 ;G418浓度每 m L DMEM分别含有 2 0 0 ,30 0 ,40 0 ,5 0 0和 6 0 0μg,探讨 G418对软骨细胞的杀伤作用 ;选择不同细胞接种密度、不同脂质体浓度和 pc DNA3- BMP3浓度 ,在细胞对数生长期且细胞融合至 70 %～ 80 %时开始做转染 ,各组软骨细胞爬片的原位杂交结果通过计算机图像分析 ,以其灰度值判定基因转染的效率 .结果　最佳期的转染时机为软骨细胞接种后在孵箱内放置 2 d转染 ,即在软骨细胞对数生长期内做转染 .G418对软骨细胞的最佳筛选浓度为 40 0 mg· L- 1 .最佳的细胞种植密度、pc DNA3- BMP3浓度和脂质体的量应分别为 2× 10 4· cm- 2 ,5 μL 和 10 μL.结论　通过本研究探索出脂质体介导下 pc DNA 3- BMP3转染兔关节软骨细胞的最佳条件 .     

神经营养素-3重组腺病毒促进脊髓背根神经节的存活

目的：观察神经营养素－3（neruotrophin3,NT－3)重组腺病毒（adorsal root ganglia ,DRG）细胞存活的促进作用,方法：原代培养DRG,加入不同感染增殖率（multiplicity of infection,MOI)的Ad-NT-3,观察DRG细胞的形态,MTT法测定DRG细胞的增殖活性,结果：当加入MOI为10和50的Ad-NT－3时,形态学发现,DRG细胞数目增加,突起变长,尤其以3d后表现更为明显,DRG细胞的增殖活性显增加（P＜0．01）,当MOI为100时1d和3d,DRG细胞数目明显减少,无突起或变短,部分细胞死亡,MTT法测定DRG细胞的增殖活性均显降低（P＜0．01）,结论：NT－3基因能通过腺病毒介导表达NT－3蛋白,促进体外培养DRG细胞的生活。