护士工作倦怠及其影响因素评价

目的评价护士工作倦怠现状及其主要影响因素。方法从3所省市级医院随机抽取495名各科临床护士。采用MBI-GS、EPQ-RSC和OSI-R 3个量表对护士工作倦怠、人格特征、职业紧张和应对资源进行测量。结果外科和内科护士的工作倦怠高于其他科室护士（P〈0．05）；低年龄护士的工作倦怠感较强（P〈0．05）；学历越低的护士其专业低效能感越强（P〈0．05）；不同人格特征护士的工作倦怠感不同（P〈0．05）；职业紧张和应对资源的性质不同对护士工作倦怠的影响也不同。任务过重、责任感、任务不适和自我保健等是导致衰竭的主要预测变量（P〈0．05）。任务不适、任务冲突、责任感和自我保健是导致消极怠慢的主要预测变量（P〈0．05）。专业低效能感的主要预测变量为任务不适、社会支持和理性处事（P〈0．05）。结论降低或保持适度职业任务量、职业责任感，明确工作要求和工作角色与职责，丰富业余生活、提高自我保健能力与理性处事能力是预防护士工作倦怠的重要措施。     

卵巢原发非霍奇金淋巴瘤的临床病理分析

目的观察卵巢原发非霍奇金淋巴瘤的临床病理表现，探讨该类肿瘤的临床病理特征及病理诊断。方法对15例卵巢原发非霍奇金淋巴瘤作临床病理观察及随访，按WHO关于淋巴造血组织肿瘤分类（2001）进行组织学分型和诊断。采用SP法进行免疫表型检测。结果该类肿瘤占同期收治的非霍奇金淋巴瘤的0．56%（15／2679），其中，临床Ⅲ期或Ⅳ期者有12例（80%），临床Ⅰ期或Ⅱ期者3例（20%）。组织学分型：15例（100％）均为弥漫大B细胞淋巴瘤，中心母细胞性或免疫母细胞性。所有病例均接受了手术治疗，3例术后分别用CHOP或COMP方案治疗。4例有随访资料者均死亡，生存时间为21d～18月。结论卵巢原发非霍奇金淋巴瘤少见，预后差。肿瘤的确诊依赖病理学检查和免疫表型检测。     

铜绿假单胞菌Quorum-Sensing系统中rhlR基因的克隆表达及其免疫保护性研究

目的研究铜绿假单胞菌rhlR表达产物的分子生物学特性,以及对小鼠的免疫保护作用。方法以铜绿假单胞菌标准株PAO1的基因组DNA为模板,PCR方法扩增rhlR基因。利用pGEX4T-1载体构建rhlR-pGEX4T-1重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用免疫印迹验证。同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率。结果rhlR的全基因序列为726bp,经序列分析和同源性比较,与GenBank中的rhlR基因(登录号:AE004768)完全一致。大肠杆菌BL21(DE3)转化重组质粒rhlR-pGEX4T-1后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达的融合蛋白质相对分子质量为54×103,其中RhlR蛋白为27×103。体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率与未经免疫的正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的rhlR-pGEX4T-1重组质粒能够在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出具有生物学活性的RhlR蛋白。重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用。     

铜绿假单胞菌生物被膜形成能力与基因型的相关性分析

目的 探讨铜绿假单胞菌（PA）临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性。方法 采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析；通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR（ERIC—PCR）技术绘制48株PA的指纹图谱，应用计算机软件建立遗传相似性系数矩阵及聚类分析树状图。结果 48株临床分离PA菌株生物被膜的形成能力不同。生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性，PA在17％遗传相似性系数上分为A、B、C、D、E五个基因型，生物被膜形成能力强的PA大都属于D型，其遗传相似性系数为42％。结论 绝大多数临床分离的PA株具有较强的生物被膜形成能力；生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性；生物被膜形成能力较强的PA在基因型上表现出一定的相似性。     

TRAIL蛋白原核表达载体的构建及表达研究

目的 利用蛋白自剪切功能原核表达系统构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）胞膜外段融合蛋白表达载体，并进行表达条件优化和初步纯化。方法 设计基因拼接引物，合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列，将其连接于克隆载体pMD18-T中；将酶切、纯化的TRAIL基因与经相同处理的载体pTWIN1相连接，转化感受态大肠杆菌JM109，筛选阳性重组子。将鉴定（酶切及序列分析）阳性的重组子质粒转人大肠埃希菌ER2566表达菌中，采用蛋白质SDS—PAGE电泳方法分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白表达情况。结果 成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列，酶切及序列分析证实成功构建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表达载体。采用0．3mmol／LIPTG、15℃诱导过夜（14～16h），目的蛋白获得较高表达量，且大部分为可溶性蛋白。结论 采用大肠埃希氏菌ER2566，TRAIL胞膜外段融合蛋白获得高表达，经简单后续处理即可获得不含任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白。     

Cubilin在糖尿病肾病大鼠模型的表达变化

目的 观察链脲佐菌素（STZ）糖尿病肾病大鼠模型肾小管Cubilin的表达变化，及其与白蛋白尿的关系，探讨糖尿病肾病早期的肾小管功能障碍可能的机制。方法 糖尿病肾病大鼠（DN）模型采用STZ一次性腹腔注射制备，正常组（N）大鼠注射等量生理盐水。于实验2、4、6周分别处死两组大鼠并测量相关血尿生化指标，应用免疫组化和RT—PCR技术观察各组大鼠的肾小管Cubilin蛋白和mRNA表达水平。结果 与正常组相比，DN组大鼠肾小管的Cubilin蛋白和mRNA表达水平在第2周即明显下降（P〈0．05），并随时间推移继续降低，各时间点差异有统计学意义（P〈0．05），Cubilin mRNA的表达水平与白蛋白尿呈显著负相关（r=-0．815，P〈0．01）。结论 肾小管Cubilin表达的下降可能部分参与了糖尿病肾病早期微量白蛋白尿的发生，Cubilin可望作为糖尿病肾病肾小管受损的早期标志之一。     

非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌细胞环氧合酶2表达的影响

目的探讨非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌环氧合酶2(COX-2)表达的影响,以及其抗卵巢癌作用与COX-2表达之间的关系。方法采用流式细胞技术(FCM)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western免疫印迹法,检测不同浓度Celecoxib(COX-2特异性抑制剂)加入人卵巢癌SKOV3细胞株中共同培养24h后,SKOV3细胞COX-2的蛋白表达和mRNA水平变化,同时与非选择性COX-2抑制剂Aspirin相比较。采用免疫组化法检测Celecoxib对人卵巢癌裸鼠移植瘤组织中COX-2表达的影响。结果RT-PCR显示,随药物浓度增加,COX-2mRNA表达逐渐下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);FCM显示,Celecoxib(5×10-5mol/L)和Aspirin(7×10-3mol/L)组COX-2的平均荧光强度明显低于对照组(P<0.05),尤以Celecoxib(5×10-5mol/L)组更显著;Westernblot检查结果相同;免疫组化发现,Celecoxib不同剂量(10、25、50mg/kg·d)用于人卵巢癌裸鼠移植瘤后,其COX-2的IOD值均明显低于对照组(P<0.05),且随药物剂量的增大,其IOD减小。结论Celecoxib对人卵巢癌的抗肿瘤效应与COX-2表达下降有关,可能存在COX-2依赖和非依赖途径,值得进一步研究。     

血管内皮生长因子受体-1与子痫前期的相关性

目的 探讨子痫前期患者血清中可溶性血管内皮生长因子受体-1（sVEGFR-1）水平和胎盘组织中膜型血管内皮生长因子受体-1（膜型VEGFR-1）的蛋白表达与子痫前期发病的相关性。方法 用ELISA法和免疫组化法检测10例轻度子痫前期，10例重度子痫前期和10例子痫患者以及10例正常对照血清中sVEGFR-1水平和胎盘组织中膜型VEGFR-1蛋白的表达。结果 子痫前期各组血清中sVEGFR-1水平明显高于正常对照组（P〈0．05），随子痫前期的病情加重血清中sVEGFR-1水平有上升趋势，轻度子痫前期〈重度子痫前期〈子痫期。膜型VEGFR-1在胎盘的表达主要位于绒毛滋养细胞胞膜，绒毛血管内皮细胞胞膜，羊膜上皮细胞胞膜上，间质有少量表达。子痫前期各组胎盘组织中膜型VEGFR-1蛋白表达均明显低于正常对照组（P〈0．05），随病情加重有下降趋势，轻度子痫前期〉重度子痫前期〉子痫期。子痫前期sVEGFR-1／膜型VEGFR-1较对照组高．随病情加重有升高趋势，轻度子痫前期〈重度子痫前期〈子痫期。结论 子痫前期发病可能与血清中sVEGFR-1水平、胎盘组织中膜型VEGFR-1表达有关。膜型VEGFR-1在胎盘的表达可能与子痫前期有关。     

鸭疱疹病毒1型实时荧光定量PCR方法的建立

目的建立检测鸭疱疹病毒1型(鸭瘟病毒)的实时荧光定量PCR方法,为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法根据病毒DNA聚合酶基因的序列,设计引物和探针,采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR,用含有125bp扩增产物的pMD18-T载体质粒为阳性对照,构建标准曲线,对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价,同时与传统PCR方法进行比较研究。结果标准曲线表明在2.3×105~2.3×10拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999);实时荧光定量PCR最少可检测到23个阳性质粒,说明有很好的敏感性;试验内及试验间变异系数分别为1.22~6.69以及2.09~8.84,说明有较好的重复性;对非鸭瘟病毒DNA无扩增,说明有很好的特异性;在对病毒DNA的检测方面,比传统PCR的敏感性高出104倍。结论成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法。     

口腔鳞癌中粘着斑激酶的表达及意义

目的探讨粘着斑激酶（FAK）在人口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达水平及与各临床病理因素和预后的关系。方法免疫组化SP法检测80例人OSCC石蜡切片中的FAK的表达情况。采用X^2检验、生存曲线和Cox比例风险回归等方法分析FAK过表达的意义。结果免疫组化证实FAK为非均质性表达，主要强表达在癌细胞质和（或）细胞膜中．在对应癌旁正常组织中则呈弱阳性或阴性表达。采用前沿区染色计分的结果判断方法，FAK过表达与癌的分期、分化、淋巴结转移相关性显著；多因素分析显示，FAK过表达可作为判断口腔鳞癌预后的危险因紊，为影响预后的独立因素。结论口腔鳞癌前沿区的FAK过表达为有价值的判断其生物学行为和预后的病理学指标。