多媒体在医用生物化学教学应用中的利弊

医学生物化学是重要的医学基础课程之一,其发展迅速、应用广泛。医学生物化学教学内容已从传统的物质代谢为中心变为以遗传信息表达与调控为中心的分子生物学模式,并新增大量的现代实验技术。教学内容增多．内容抽象,概念繁多,但是当前医学院校的生物化学学时相对压缩,使得该课程讲授和学习的难度加大。因此．在生物化学教学中应用多媒体课件成为一种能较好地适应现代教学的新方法。多媒体教学可以将声音、影像、文字、色彩等多种信号集于一体,将微观、抽象的多种信息直观、生动形象地体现出来,     

肘内外侧联合入路和肘后尺骨鹰嘴截骨入路治疗肱骨髁间骨折

目的:探讨肘内外侧联合入路和肘后尺骨鹰嘴截骨入路治疗肱骨髁间骨折的疗效及优缺点。方法:2012年10月至2016年5月,对18例肱骨髁间骨折患者进行手术治疗,男12例,女6例;年龄4~56岁,平均33.5岁。按AO分型:C1型3例,C2型8例,C3型7例。8例行肘关节内外侧联合入路,10例行尺骨鹰嘴截骨入路;所有患者术前排除神经、血管损伤。结果:18例患者获随访,时间12~26个月,平均15个月。患者伤口愈合良好,未发现异位骨化。按改良的Cassebaum肘关节功能评分:优14例,良3例,可1例。结论:根据骨折类型,选择合适的手术入路及固定方式,力求解剖复位、坚强固定,配合早期功能锻炼是肱骨髁间骨折手术取得成功、最终获得良好功能恢复的重要条件。     

TRAIL蛋白原核表达载体的构建及表达研究

目的 利用蛋白自剪切功能原核表达系统构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）胞膜外段融合蛋白表达载体，并进行表达条件优化和初步纯化。方法 设计基因拼接引物，合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列，将其连接于克隆载体pMD18-T中；将酶切、纯化的TRAIL基因与经相同处理的载体pTWIN1相连接，转化感受态大肠杆菌JM109，筛选阳性重组子。将鉴定（酶切及序列分析）阳性的重组子质粒转人大肠埃希菌ER2566表达菌中，采用蛋白质SDS—PAGE电泳方法分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白表达情况。结果 成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列，酶切及序列分析证实成功构建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表达载体。采用0．3mmol／LIPTG、15℃诱导过夜（14～16h），目的蛋白获得较高表达量，且大部分为可溶性蛋白。结论 采用大肠埃希氏菌ER2566，TRAIL胞膜外段融合蛋白获得高表达，经简单后续处理即可获得不含任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白。     

急性缺血再灌注肾损伤过程中Mg2+及K+协同胰岛素的对抗效应

目的:在肾移植术后可能发生急性缺血再灌注性肾损伤.作者前期实验表明在肾缺血再灌注期间注射胰岛素可减轻缺血再灌注肾损伤,在此基础上,在胰岛素溶液中加入天冬氨酸钾镁,观察Mg2 ,K 协同胰岛素对家兔急性肾缺血再灌注损伤的影响,并分析其可能机制.方法:实验于2002-02/04在泸州医学院生理实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.①实验材料及方法:选用健康成年日本大耳白兔27只,按随机数字表法分为3组(n=9),即缺血再灌注组、缺血再灌注胰岛素处理组及对照组,前两组采用钳夹肾动脉法建立急性肾缺血再灌注肾损伤模型,缺血再灌注胰岛素处理组再灌注的同时给予胰岛素溶液,含胰岛素3 U/kg,葡萄糖1.5 g/kg,K 4 mg/kg,Mg2 1.7 mg/kg.②实验评估:分别观察3组动物缺血再灌注2 h,48 h后,血清尿素氮、血糖、血清及肾组织中丙二醛含量以及肾组织超微结构变化.结果:23只动物进入结果分析.①肾缺血再灌注48 h后,缺血再灌注组血清尿素氮含量显著高于对照组(P＜0.01),缺血再灌注胰岛素处理组与对照组差异无显著性意义(P＞0.05).②缺血再灌注组血清及肾组织中丙二醛含量显著高于对照组(P＜0.05),缺血再灌注胰岛素处理组丙二醛含量显著低于缺血再灌注组(P＜0.05).③缺血再灌注2 h后,3组动物血糖均较术前增高,但以缺血再灌注组增高更为显著,与对照组比较差异具有显著性意义(P＜0.05),缺血再灌注胰岛素处理组与对照组差异无显著性意义(P＞0.05).④对照组肾组织超微结构正常,缺血再灌注组肾组织呈变性和坏死改变,缺血再灌注胰岛素处理组肾组织轻度变性.结论:Mg2 ,K 可协同胰岛素减轻家兔急性缺血再灌注性肾损伤,其作用途径可能和降低血糖、抗自由基损伤、改善能量代谢、减轻钙超载、防止低血钾等因素有关.     

用重叠延伸PCR技术纠正人工合成乙型肝炎病毒核心抗原基因中的突变

目的：利用重叠延伸PCR技术纠正人工合成乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）基因中的突变碱基。方法：针对构建的重组质粒PGEM-7Z／HBcAg中的两处突变设计三对引物,PCR定点突变后对重新构建的PGEM-7Z／HBcAg进行菌落PCR和酶切鉴定,初步筛选的阳性克隆进一步通过序列分析进行确证。结果：经PCR定点突变后,测序证明HBcAg基因序列与设计完全一致。结论：用该方法成功纠正了人工合成的乙肝病毒核心抗原基因中两个碱基的缺失,获得了预期的目的基因。     

人VIGILINN端融合蛋白的表达及亚细胞定位

目的 原核表达人VIGILIN N端基因,制备抗人VIGILIN的多克隆抗体,对人VIGILIN作亚细胞定位.方法 用PCR扩增人VIGILIN基因N端,克隆到表达载体pGEX-4T-2中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达.产物经 Glutathion Sepharose 4B纯化后免疫新西兰白兔制备抗人VIGILIN N端融合蛋白抗体,采用ELISA和Western blot鉴定抗体的效价及特异性.通过细胞免疫荧光染色,观察VIGILIN在细胞中的分布.结果 在28 ℃、1 mmol/L IPTG诱导3 h的最优条件下成功表达GST-VIGILIN N端融合蛋白,抗体ELISA滴度为1:16000,Western blot证实抗体特异性较高,VIGILIN在细胞质和核中均有分布,核中的分布集中在核膜内侧和靠近DAPI染色显著的区域. 结论 成功表达人VIGILIN N端融合蛋白和制备兔抗人VIGILIN抗体,并应用于亚细胞定位,为研究人VIGILIN的性质和功能奠定基础.     

人自剪切TRAIL胞外段融合蛋白表达条件的优化

目的： 在已构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白的原核表达载体基础上,进行表达条件优化,使其高表达为进一步研究其活性奠定基础。方法: 将前期构建的PCS/TRAIL 111-281原核表达载体转入大肠埃希菌BL21中, 15% SDS-PAGE比较分析不同诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间对融合蛋白表达量的影响。结果: 在诱导温度15℃,加入0.2 mmol/L 诱导剂（isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG）、诱导过夜时可以获得较高的可溶性融合蛋白表达量。结论: 诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间对融合蛋白表达量有较大的影响。     

人可溶性TRAIL cDNA的设计、合成与克隆

目的:合成可溶性的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)的cDNA,并构建其原核表达载体.方法:根据大肠杆菌密码子偏好性和表达载体多克隆位点限制性内切酶要求,设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的TRAIL基因与经相同处理的载体PSC相连接,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子.结果:成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列,并成功构建了TRAIL胞膜外段原核表达载体PSC/TRAIL 111-281.结论:采用PCR的方法,实现合成寡核苷酸片段的一次性组装,方便了进一步的克隆.     

回流静脉吻合数量对游离前臂不倒置静脉皮瓣成活的影响

目的探讨回流静脉吻合数量对游离前臂不倒置静脉皮瓣成活及疗效的影响。方法选取2015年9月-2018年2月就诊的31例手部皮肤软组织缺损伴深部组织外露的患者作为研究对象,随机分组,动脉与回流静脉数量比例为1∶1(A组)的14例,1∶2的(B组)12例,1∶3的(C组)5例。均予游离前臂不倒置静脉皮瓣修复创面。皮瓣面积:2.0 cm×2.0 cm～4.5 cm×6.5 cm,术后监测皮瓣肿胀、颜色及成活情况,后期观察皮瓣外形、质地、挛缩程度、皮瓣颜色及感觉恢复情况,用以评估回流静脉吻合数量对游离前臂不倒置静脉皮瓣成活及疗效的影响。结果 31例皮瓣,成活29例,坏死2例。术后1～14 d B、C组瘀肿明显轻于A组,且肿胀持续时间短。成活病例获得3～14个月随访,平均9.5个月。皮瓣外观均无明显臃肿,质地软,19例出现轻～中度挛缩,无重度挛缩病例,18例皮色接近正常,11例较周围皮肤稍暗,有轻度色素沉着;皮瓣感觉恢复:4级0例,3级5例,2级18例,1级6例; 2PD为10～18 mm,平均14 mm。结论游离前臂不倒置静脉皮瓣修复手部创面简单、方便、安全,但需注意根据创面的情况建立适当的动静脉吻合比例,在保证供血的情况下,皮瓣大于9 cm2时,动脉与回流静脉比例1∶2或以上可提高皮瓣的远期成活质量。     

Vigilin在多种细胞系以及人原发性肝细胞肝癌中的表达研究

目的 探讨Vigilin基因在肿瘤细胞系、正常细胞系以及人原发性肝细胞肝癌组织中的表达及其与肝癌发生的关系.方法 提取肝癌细胞系、宫颈癌细胞系和正常细胞系总蛋白,采用免疫印迹方法 对Vigilin的表达进行半定量检测.收集59例人原发性肝细胞肝癌标本,进行Vigilin的免疫组织化学染色.结果 Vigilin在所检测的...