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p21^WAF1基因介导诱发的人肝癌细胞系的细胞凋亡研究 总被引:10,自引:0,他引:10
目的研究外源性p21WAF1基因超表达对HCC-9204肝癌细胞系的作用和意义。方法通过脂质体介导方式将带有人全长p21WAF1cDNA和潮霉素抗性基因的真核表达载体PCEP转入肝癌细胞中,用潮霉素筛选后,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测p21蛋白的表达情况,使用流式细胞仪检测细胞周期并判定有无细胞凋亡及程度。通过透射电镜进一步观察细胞的超微结构。结果ELISA法测定p21蛋白表达结果,对照组、空载体组和WAF1组的吸光度(A)值分别为0.175±0.02、0.183±0.03和0.33±0.04,提示转基因后p21蛋白量却明显增加(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞周期表明G1期细胞显著增加,并在G1期前出现一凋亡峰,凋亡细胞占细胞总数的22.5%。透射电镜可见WAF1组部分细胞体积缩小,细胞完整,有出芽现象,细胞器结构完整,致密的染色体边集于核膜内侧,呈明显的凋亡细胞的形态。结论本实验成功地将p21WAF1基因转入到培养的肝细胞中,获得了稳定表达p21蛋白的细胞株;外源性p21WAF1基因的超表达可引起肝癌细胞自发凋亡。通过对该基因的进一步研究可为肝癌防治提供理论依据。 相似文献
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抗肝癌单链抗体融合PE38重组免疫毒素的构建、表达及纯化 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 :构建绿脓杆菌外毒素PE38融合人源化鼠抗肝癌单链抗体 (hscFv)原核表达载体 ,并对其产物作初步纯化 ,检测其对人肝癌细胞系SMMC 772 1的毒性作用 .方法 :采用基因工程原理 ,将PE38基因片段亚克隆入hscFv表达载体 pGEX 4T 1中 ,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确 ;转化大肠杆菌JM10 9后 ,受IPTG诱导表达GST融合蛋白 ,产物包涵体经变性、复性及重折叠并经GST亲合层析柱层析、凝血酶消化后 ,得到纯化的hscFv PE38融合蛋白 .采用MTT法检测hscFv PE38对SMMC772 1的杀伤作用 .结果 :实验成功构建了免疫毒素表达载体pGEX 4T 1 hscFv PE38(以下简称pGEXh PE38) ;诱导产物主要以包涵体形式存在 ,表达量为 11% ;纯化的hscFv PE38对SMMC 772 1细胞系具有较明显的杀伤作用 ,最大杀伤率为78% ,IC50 为 0 .386mg·L-1.结论 :人源化抗肝癌单链抗体与PE38重组免疫毒素的成功表达纯化及对人肝癌细胞系的试验结果 ,为进一步肝癌的导向治疗提供依据 相似文献
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增强子结合蛋白和HBVX抗原在肝细胞肝癌及癌旁肝组织中表达的免疫组化研究*徐砺新1王凡2(1第四军医大学病理学教研室西安7100332第四军医大学西京医院眼科)关键词肝细胞肝癌增强子结合蛋白HBVX抗原免疫组化中图号R373.2乙型肝炎病毒X抗原(H... 相似文献
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目的建立小鼠肝细胞的体外培养方法,同时检测乙醇对肝细胞脂肪酸β-氧化速度的影响。方法采用戊巴比妥麻醉小鼠,通过肝脏灌注和胶原酶消化分离小鼠肝细胞,接种于胶原包被的培养皿中进行体外培养。通过HE染色观察细胞的生长状态。在20mmol/L乙醇存在的情况下,通过^3H标记的棕榈酸(C16:0)检测肝细胞的脂肪酸氧化速度。结果成功地分离了肝细胞,肝细胞的存活率≥95%。肝细胞在体外培养48h仍能够保持良好的生长状态。对肝细胞脂肪酸氧化速度的研究发现,20mmol/L酒精能够导致肝细胞的脂肪酸氧化速度降低40%左右,导致肝细胞中脂肪含量增加。结论本研究成功地建立肝细胞的体外培养方法,采用^3H标记的脂肪酸能够敏感地检测脂肪酸氧化速度,而研究发现乙醇能够抑制肝细胞脂肪酸氧化速度。同时,本研究结果为肝细胞的脂肪和糖类代谢的研究提供了实验条件。 相似文献
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目的:观察中药蓝玉簪颗粒对慢性哮喘小鼠气道重建的抑制作用并探讨其机制.方法:将32只雌性BABL/c小鼠随机分成正常对照组(A组),慢性哮喘模型组(B组),蓝玉簪颗粒组(C组,1.0 g生药/3.0 kg体质量)和地塞米松干预组(D组,2.0 mg/kg),以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并长期雾化吸入制备小鼠慢性哮喘模型.苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织一般病理学改变;阿尔辛蓝-过碘酸-希夫氏(AB-PAS)染色观察气道上皮杯状细胞增生、黏液分泌情况;天狼猩红(SR)染色观察气道壁胶原沉积并检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量以评价气道上皮下纤维化,采用免疫组化半定量法测定气道壁转化生长因子β1 (TGF-β1)含量.计算机图像分析软件测定气道外、内径比值(Po/Pi),气道壁厚度和面积(Awt,Aaw)以及TGF-β1免疫组化阳性染色面积与气道基底膜周径(Pbm)比值(如Awt/Pbm,TGF-β1/Pbm)等.结果:B组小鼠气管及血管周围大量炎性细胞浸润,气道黏膜上皮增生,气道黏液高分泌及气道上皮下胶原沉积增多,气道壁TGF-β1表达增强;Po/Pi,Awt/Pbm,Aaw/Pbm以及TGF-β1/Pbm,肺组织HYP含量等所有指标均显著增高.C组与B组之间比较差异均有统计学意义(P<0.01);C组与A,D组比较差异具有统计学意义(P<0.05).TGF-β1的表达与肺组织HYP含量呈显著正相关(rs=0.669,P<0.01).结论:中药蓝玉簪颗粒可以抑制慢性哮喘小鼠气道炎症及气道重建,其机制可能与抑制TGF-β1表达有关. 相似文献
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