细胞因子调节血管内皮细胞凋亡相关配体和受体在大骨节病病理机制中的作用

目的 探讨细胞因子调节血管内皮细胞凋亡相关配体和受体在大骨节病病理机制中的作用。方法 用IFN-γ、IFN—α和TNF刺激ECV304细胞48h后，采用流式细胞术分析细胞膜表面Fas、TRAIL、DR4和DIL5的表达水平。结果 静止ECV304细胞膜表面有Fas、TRAIL、DR4和DIL5等分子不同水平的组成性表达，IFN-γ、IFN-α和TNF等细胞因子刺激后，Fas、TRAIL和DR4表达增加，其中IFN-γ对Fas的上调作用最显著，可使表达Fas细胞的阳性率从77．8％上升至98．4％；3种细胞因子对DIL5的上调作用不明显。结论 IFN-γ、IFN-α和耵岍等细胞因子通过上调内皮细胞死亡配体／受体Fas、TRAIL、DR4和DIL5的表达，诱导内皮细胞凋亡，影响软骨细胞的血液和氧供应，导致软骨细胞发生坏死，很可能参与大骨节病的病理损伤的分子机制。     

干扰素—α对可溶型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体体外抑制肿瘤作用的调节

目的：探讨干扰素—α对可溶型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)介导肿瘤细胞生长抑制作用调节的机制，以发现一种能体现患者生存期内良好机体表现的治疗方法。方法：实验于2003—02／2004—01在解放军第四军医大学完成。分别采用酶联免疫吸附试验及流式细胞术分析干扰素—α刺激不同时间细胞可溶型TRAIL及DR4和DR5表达的变化；用MTT实验检测可溶型TRAIL介导的肿瘤细胞生长抑制及IFN-α的调节作用。结果：IFN-α刺激12h后．Daudi细胞可溶型TRAIL分泌增加，48h达峰值(1218ng／L)；干扰素-α刺激Raji细胞24h，膜型DR4和DR5的表达上调，60h达到峰值(33．9％和79.5％)。当上清稀释度为3／4时未刺激靶细胞组的细胞生长抑制率为64．25％，阻断抗体组细胞生长抑制率为23．74％，两组差异有显著性意义(P&;lt;0.05)，但对照抗体组的细胞生长抑制率为63．54％，与未刺激靶细胞组差异没有显著性意义(P&;gt;0．05)；干扰素-α刺激靶细胞组生长抑制率为75.44％，显著高于未刺激靶细胞组(P&;lt;0．05)，对可溶型TRAIL更敏感。结论：干扰素—α上调可溶型TRAIL及膜型DR4，DR5的表达，提高了肿瘤细胞对可溶型TRAIL介导的肿瘤细胞生长抑制作用．可能是一种安全有效的治疗方法。     

抗人SSX2分子单克隆抗体的制备及初步应用

目的　制备抗滑膜肉瘤X断点 2 (Synovialsarcoma,Xbreakpoint2 ,SSX2 )分子的单克隆抗体 ,探讨SSX2的组织分布及其与肿瘤的关系。方法　应用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性抗人SSX2mAb。应用间接ELISA测定腹水效价 ,间接免疫荧光胞内染色检测抗体与肿瘤细胞系的反应性。用酶免疫组织化学技术 ,对SSX2分子在人正常睾丸组织和直肠癌组织的分布进行了鉴定。结果　获得 1株分泌抗SSX2mAb的杂交瘤细胞株LX SSX2 ,间接ELISA测定腹水效价达 1× 10 - 5,为IgG1(κ)亚类 ,能识别K5 6 2胞内天然及变性SSX2分子。在酶免疫组织化学技术应用中获得较满意效果 ,SSX2分子表达于睾丸精原细胞的细胞核内 ,并在直肠癌标本中检出到SSX2的表达。结论　LX SSX2mAb有很好的特异性 ,为进一步研究SSX2分子的分布及其与肿瘤的关系奠定了基础     

胃癌特异性转移因子诱导淋巴细胞表面IL-2受体表达

观察胃癌特异性转移因子对淋巴细胞进行诱导刺激后，淋巴细胞表面的ＩＬ－２受体表达的变化。方法应用流式细胞仪检测异硫氰基荧光素标记的淋巴细胞表面ＩＬ－２Ｒ抗体的荧光强度，以观察其受刺激前后表面ＩＬ－２Ｒ的表达。     

流式细胞术快速测定细胞活性

0　引言　细胞周期动力学研究和细胞凋亡的研究是目前生物医学领域的热门课题之一 [1 ] ,流式细胞术 (FCM)检测细胞周期和凋亡是其主要研究手段 [2 ] .FCM对细胞周期的分析方法已很成熟 ,但是我们在分析化学或物理因素对细胞周期的影响时 ,发现在 DNA直方图上出现 DNA含量较低的细胞峰 ,为确定该细胞峰的性质 ,鉴定细胞的活性 ,我们用 FCM法和台盼蓝染色法进行对比实验 ,建立了 FCM同时检测细胞周期和细胞活性的新方法 .1　材料和方法1.1　材料　所用设备包括 :EL ITE ESP型流式细胞仪 (美国Coulter公司 ) ,XD- 10 1型倒置显微…     

茶碱对嗜酸性粒细胞表面L选择素的脱落影响

目的:观察茶碱对嗜酸性粒细胞(Eos)表达L选择素(L-selectin)的影响.方法:采取15例正常人外周血,体外用不同浓度茶碱(10-3、10-4、10-5mol·L-1)和重组人白细胞介素(rhIL)-5(10-8 mol·L-1)预处理,以地塞米松(10-4 mol·L-1)为对照,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和流式细胞仪法分别从mRNA和蛋白水平测定Eos L-selectin的表达及Eos的活化状态.结果:①茶碱和地塞米松均能抑制IL-5引起的Eos的活化和表面L-selectin的脱落;②茶碱对细胞内L-selectin mRNA水平无影响;③Eos的活化与L-selectin的脱落呈相关关系.结论:低于治疗浓度的茶碱即可抑制Eos表面L-selectin的脱落,并可能因此影响Eos的粘附功能.     

一种特异性检测细胞凋亡和细胞周期的新方法

目的 应用流式细胞技术，建立一种特异性的同时检测细胞凋亡和细胞G0／G1期、S期以及G2／M期各时相百分比的快速测定方法。方法采用Annexin V—FITC/PI双标记染色凋亡细胞，再在该染色样品基础上，进一步地打孔，同时加入高剂量的DNA染色试剂进行活细胞DNA饱和染色，流式细胞仪检测分析。结果 可在同一份细胞样品上获得特异性较强的细胞凋亡、细胞坏死和细胞周期各时相的百分数变化。结论 该方法测量结果准确，检测时间短，人为影响因素少，节约细胞样品用量，为细胞生物学、肿瘤学研究，尤其是细胞动力学研究提供了一种新的、更为实用的分析方法。     

苦参碱对兔耳增生性瘢痕治疗作用的组织形态学研究

目的:研究苦参碱（matrine,Mat）对兔耳增生性瘢痕治疗作用。方法:利用兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,采用组织形态学的方法对比研究苦参碱在兔耳增生性瘢痕形成过程中的影响。结果:兔耳腹侧面增生性瘢痕局部注射苦参碱后,按时间段取材;VG和HE染色显示真皮层明显变薄,成纤维细胞数量明显减少,胶原排列趋于一致;12周后,对照组苦参碱组的增生指数、成纤维细胞数密度、胶原密度分别为3.25±0.89/2.15±0.12,4517.5±879.6/3551.2±234.1,39.89±14.12/28.75±10.87。结论:苦参碱能抑制兔耳增生性瘢痕的增殖过程,使瘢痕组织纤维化程度明显减轻。     

Claudin 18在胰腺癌细胞中的表达

目的:检测人胰腺癌细胞中Claudin 18的表达,为临床诊断胰腺癌提供新的标志物和治疗靶位.方法:采用RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术分别从基因、蛋白和细胞整体水平上检测胰腺导管腺癌和胰岛细胞癌细胞表面人源性Claudin 18的mRNA转录和蛋白的表达.结果:胰腺导管腺癌PANC-1、BX-PC-3和AS-PC-1细胞均可以在mRNA、蛋白和细胞整体的不同水平表达Claudin 18;而胰岛细胞癌RINm5F细胞则不表达Claudin 18.同时,对照细胞胃印戒细胞癌KATOIII也可以大量表达Claudin 18.结论:多数胰腺导管腺癌细胞系均可以在不同水平表达Claudin 18,而胰岛细胞癌细胞系则不能表达Claudin 18,该结果与前期胰腺癌患者的免疫组化检测结果一致.     

截短型人Bid融合蛋白对HeLa细胞的促凋亡作用

目的：观察截短型人bid及其N端融合蛋白的表达对HeLa细胞的促凋亡作用．方法：通过反转录PCR方法获取人全长bid基因，再经PCR方法克隆得到截短型bid(truncated bid，tbid)基因及其N端融合蛋白基因插入pcDNA3真核表达载体，脂质体法转染HeLa细胞，通过间接免疫荧光，电子显微镜以及流式细胞仪等方法观察被转染细胞的生长及凋亡状况．结果：成功获得人bid基因，构建了tbid基因及tbid与绿脓杆菌外毒素(PE)转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因的真核表达载体(pcDNA3-tbid61，pcDNA3-PE-tbid61)．与对照组相比，在转染后12～48h内两种基因的表达均导致．HeLa细胞发生凋亡，且两活性相当，结论：截短型Bid及其融合蛋白可促进转染的HeLa细胞发生凋亡．