骨肉瘤HER2基因表达增加肺转移发生危险度

目的:研究骨肉瘤中HER2基因表达与骨肉瘤患者发生肺转移的关系。方法:对43例骨肉瘤患者的临床病理资料进行回顾性研究,应用HER2单克隆抗体对组织切片进行免疫组织化学染色,并将上述资料与随访患者发生肺转移情况进行统计学分析。结果:骨肉瘤患者HER2表达与患者发生肺转移相关(P<0.05),HER2高表达的骨肉瘤患者发生肺转移的可能性大。结论:HER2检测是判断骨肉瘤发生肺转移的一项有价值的指标;同时,HER2基因为骨肉瘤的生物治疗提供一种可能的靶点。     

重构型人caspase-8基因原核表达载体的构建及其表达

目的：构建三种重构型人caspase—8基因的原核表达载体，转染大肠杆菌并诱导其表达。方法：将人caspase—8催化结构域基因及两种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase—8基因克隆人原核表达载体pBV220，转染大肠杆菌并诱导表达。结果：成功构建了三种重构型人caspase—8基因的原核表达载体。转染大肠杆菌后，经温度诱导，重构型人caspase—8基因获得了高效的表达。结论：在大肠杆菌中成功表达了三种重构型人caspase—8基因。     

人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用

目的 观察颗粒酶B（granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用。方法 用RT－PCR法获取人granzyme B全长cDNA，经重组PCR将活性型序列的5′端与一段PE转膜肽序列融合。将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白（GFP）共表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞。用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达，荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构。结果 成功地获得了野生型granzyme B cDNA及其融合蛋白基因，并构建了融合蛋白基因与GFP基因共表达的真核载体。转染HeLa细胞后，检测到目的蛋白的表达。荧光显微镜观察转染细胞有两种变化：一种表现为体积增大并常伴随多核现象；另一种出现细胞质和细胞核的固缩。电镜观察显示，多核巨细胞生长状态良好，固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征。结论 granzyme B融合蛋白在HeLa细胞中异位表达，可使转染细胞的形态发生变化，出现多核的大细胞和核固缩的小细胞。     

针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用

目的:构建针对HER2/neu的RNA干涉载体,观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响. 方法:设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pSUPER质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPC-A-1,RT-PCR检测HER2/neu的mRNA表达,Western blot和间接免疫荧光法检测HER2/neu的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长. 结果:肺腺癌细胞系SPC-A-1存在HER2/neu过表达;成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPER-siHER2;瞬时转染SPC-A-1细胞,HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低;G1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P＜0.05). 结论:成功构建了HER2/neu RNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPC-A-1 HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.     

tBid基因的表达及其对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用

目的：观察tBid基因在骨肉瘤细胞中的表达及其对转染的SOSP-9607细胞的凋亡作用。方法：采用脂质体转染的方法,将tBid基因转染骨肉瘤细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达和细胞形态学变化,进一步电镜观察其超微结构改变。MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况,通过Annexin V、染色流式细胞仪检测来观察其促凋亡作用。结果：转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测tBid的表达,细胞出现凋亡。电镜观察呈现出典型的凋亡特征。MTT实验发现细胞的增殖被明显抑制。Annexin V染色流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,与对照组细胞（凋亡率为6%）相比,其凋亡率为35.8%。结论：tBid基因可以在转染的SOSP-9607细胞中表达,并可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。     

重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用

目的：探讨重构型caspase3基因的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法：用重组PCR的方法获得大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase3基因并将其克隆入真核表达载体pcDNA3，转染乳腺癌细胞系SKBr3细胞，通过HE染色、流式细胞仪分析及免疫组化等方法观察其表达后对细胞的促凋亡活性，并将载体DNA直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用。结果：重构型caspase3基因可在SKBr3细胞内表达，转染组较同期对照组出现明显的细胞死亡现象，pcDNA3 revcasp3重组质粒直接注入对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显抑制作用。结论：重构型caspase3基因表达可诱导SKBr3细胞凋亡。     

人fadd基因cDNA的克隆和诱导舌癌细胞凋亡的研究

目的：观察人fadd基因对舌癌（Tca-8113）细胞的凋亡诱导作用。方法：用反转录PCR获取人fadd基因，将基因克隆入真核表达载体pcDNA和pIRES2和pIRES2-EGFP中，脂质体法转染舌癌细胞，通过细胞计数、荧光显微镜及电镜观察、流式细胞仪等检测技术被转染细胞的生长及其凋亡状况。结果：成功获取了人fadd基因。与对照组相比，在转染1-3d内，fadd基因的表达导致舌癌细胞存活数目减少，大量细胞发生凋亡。结论：人fadd基因可以诱导转染的舌癌细胞发生凋亡。     

分泌性靶向促凋亡分子基因构建、表达及其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用

为建立更敏感而特异的用于肿瘤基因治疗新策略,本研究将一段信号肽、抗肿瘤表面抗原HER2的抗体、具有膜转位作用的肽段和几种促凋亡分子融合,构建了几种靶向促凋亡蛋白。体内外实验研究证实,这种重组分子表达分泌后,能够特异性识别和内化进入HER2阳性肿瘤细胞,继而带有部分PEAII转膜结构域的促凋亡蛋白转位进入胞质,诱导细胞凋亡,实现特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞和抑制HER2阳性肿瘤生长的作用。     

含TK自杀基因真核表达载体的构建和鉴定

基因治疗恶性肿瘤是当前国内外研究的热点之一，其中以药物敏感基因治疗系统最引人注目。药物敏感基因(drug sensitive gene)又称为“自杀基因”(suicide gene)，可以编码某些病毒或细菌的酶类，从而催化对真核细胞无毒或低毒的药物前体转变为具有毒性的代谢产物，干扰细胞DNA的合成，选择性地杀死快速增殖的肿瘤细胞，而对正常组织无毒、副作用。