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1.
目的:探讨PTEN抑癌基因联合多西环素(Dox)对黏液表皮样癌细胞系增殖的影响。方法:用脂质体将野生型PTEN基因导人人黏液表皮样癌细胞系,再用不同浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,应用HE染色判定细胞形态,用流式细胞仪检测细胞周期,用免疫组化染色检测细胞PCNA和EGFR蛋白表达。结果:PTEN基因转染联合Dox组癌细胞增殖抑制显著,细胞出现空泡变性和凋亡,多数癌细胞阻滞于G1期,癌细胞中PCNA和EGFR蛋白的表达显著减弱,比PTEN基因转染或Dox单用作用更强。结论:PTEN抑癌基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞系增殖具有显著的协同抑制效应。  相似文献   
2.
背景:多种信号转导途径可影响细胞内Ca2+浓度的变化,因而对细胞内钙离子变化的检测,有助于了解细胞功能的启动、加强或抑制。目的:利用流式细胞术实时监测细胞内钙离子浓度的动态变化。方法:选取健康人新鲜全血,用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,使用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载淋巴细胞,加入CD3单克隆抗体和CD28单克隆抗体刺激淋巴细胞活化,以流式细胞仪动态监测活化淋巴细胞内Ca2+的浓度变化。结果与结论:T淋巴细胞在静息状态时,钙离子的荧光值平稳,显示为基线;加入抗CD3单克隆抗体和抗CD28单克隆抗体后,T淋巴细胞被活化,钙离子的浓度迅速升高,持续大约两三分钟后下降,逐渐趋向平缓。结果提示采用钙离子指示剂Fluo-3负载细胞与流式细胞术分析可以跟踪细胞内钙离子的动态变化,成为钙离子动态变化监测的有效方法。  相似文献   
3.
目的:制备含有融合Flag标签的Runx3基因的复制缺陷型重组腺病毒,感染神经胶质细胞瘤U251,观察外源Runx3在细胞中的表达及亚细胞定位.方法:用PCR的方法扩增Runx3基因,并将Flag标签蛋白的编码基因与RUNX3基因进行融合,构建腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-Runx3,经Kpn Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切鉴定并测序.利用电转化方法将经Pme Ⅰ线性化的pShuttle-CMV-Runx3穿梭载体导入BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-Runx3,再将经Pac Ⅰ线性化的Ad-Runx3重组病毒骨架质粒转染293A包装细胞,包装并扩增病毒.利用该病毒感染神经胶质细胞瘤U251,用免疫印迹法观察外源Runx3在细胞中的表达,用间接免疫荧光法观察其在细胞内的定位.结果:构建并包装表达Runx3蛋白的重组腺病毒,用重组腺病毒感染U251细胞后,经免疫印迹和间接免疫荧光法检测,可见外源导入的Runx3蛋白在细胞核内的特异性定位.结论:成功制备了含有融合Flag标签的转录因子Runx3基因的重组腺病毒,感染U251细胞,在细胞中观察到该分子表达后定位于细胞核中,为研究Runx3在神经胶质瘤发生中的作用奠定了实验基础.  相似文献   
4.
目的:对比硫化砷对慢性粒细胞白血病细胞株K562和急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4两种细胞的作用是否存在差异及其机制.方法:PCR-ELISA法测定端粒酶活性;半定量RT-PCR检测hTERT mRNA的表达;流式细胞术测量细胞周期、凋亡.结果:0.15~0.6 mg/L硫化砷(72 h)可在诱导NB4细胞凋亡的同时,下调细胞端粒酶活性和hTERT-mRNA表达,同样作用对于K562细胞需要硫化砷浓度达到0.3~3 mg/L.0.3 mg/L硫化砷(72 h)可引起NB4细胞出现G2/M期细胞比例增高.而K562细胞需要在1.5mg/L硫化砷诱导下出现G2/M期细胞比例增高.结论:端粒酶系统可能是硫化砷诱导NB4和K562细胞凋亡的途径之一;由硫化砷诱导的G2/M期阻滞可能与端粒酶活性的显著下降相关.NB4和K562细胞对硫化砷的敏感性存在明显差异,具体机制有待进一步研究.  相似文献   
5.
尿素-SDS-PAGE快速测定多肽的相对分子质量   总被引:4,自引:1,他引:3  
随着电泳技术的不断改进和完善,该技术已成为现代分子生物学实验不可缺少的基本实验技术之一。然而进行小分子多肽的电泳分析时,由于其相对分子质量(Mr)小,易受电泳条件(电泳缓冲系统、凝胶浓度、电泳时间、染色和脱色等)的影响,极易引起条带扩散、不易着色,使分辨率降低,因而直接影响多肽Mr的测定。现有多肽Mr的电泳测定法[1,2]操作复杂,且结果也不理想。因此,我们经反复实验,建立了对Mr为2 500-17 000多肽的尿素-SDS-PAGE快速测定法。1材料和方法1.1材料 ECP-3000电泳仪为北京…  相似文献   
6.
流式细胞仪DNA染色试剂的制备   总被引:1,自引:0,他引:1  
  相似文献   
7.
流式细胞仪国产鞘液的研制   总被引:1,自引:0,他引:1  
流式细胞仪(FCM)已成为当代分析细胞学领域检测细胞分子特征的主要工具之一,在医学、生物学和肿瘤学等学科中得到广泛应用〔1,2〕。FCM所用的鞘液是维持仪器正常运转的主要消耗试剂,其主要作用是经荧光染色的单细胞悬液和鞘液同时进入流动室,在气体压力的作用下,形成包绕细胞悬液的壳液流,使细胞依次排列成单行,一个跟一个地以均等的速度通过检测区,而得到精确测量〔3〕。与仪器配套的Coulter鞘液消耗量大(从开机到停机一直连续使用),需用外汇进口,不仅价格较高,而且周期较长。为解决这一问题,我们经过两年半的反复试验,研…  相似文献   
8.
目的 :构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL ,稳定转染入舌癌细胞后 ,通过体内、外实验初步观察融合蛋白TNFR1/DED在重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用下介导舌癌细胞凋亡的效应。方法 :反转录及重组PCR构建融合基因TFL ;鉴定融合蛋白TNFR1/DED在建系舌癌细胞T TFL中的表达 ,通过MTT法、形态学观察、DAN片段及体内抑瘤实验 ,观察融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的效应。结果 :获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL ,转染入Tca 8113细胞后 ,能表达融合蛋白TNFR1/DED活性 ,体外实验观察到rhTNF α可有效地杀伤舌癌细胞 ,体内可明显抑制移植瘤的生长 ,且荷瘤动物内脏器官无病理性改变。结论 :融合蛋白TNFR1/DED可有效地介导舌癌细胞凋亡 ,为舌癌基因治疗研究提供实验基础。  相似文献   
9.
目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50%vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P<0.01),Rholow亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群,同时进一步证实肝癌的异质性.  相似文献   
10.
目的:探讨骨肉瘤细胞系SOSP-9607的发生发展与部分肿瘤抑制基因及早期生长反应基因表达的关系。方法:采用原位杂交及免疫组织化学SABC染色方法检测肿瘤抑制基因p53,p16,Rb及早期生长反应基因egr-1在SOSP-9607细胞中的表达;用RT-PCR方法检测肿瘤抑制基因DCC在SOSP-9607细胞中是否缺失。结果:SOSP-9607细胞中p16,Rb基因表达未见异常改变,未检测到突变型P  相似文献   
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