人细胞融合肝癌疫苗的制备及其融合细胞百分率的检测

手术病人新鲜肝癌组织及部分脾脏，分离纯化、激活B细胞，应用PEG融合肝癌细胞与激活B细胞，经培养灭活制得肿瘤疫苗。同时测定了融合肝癌疫苗的融合率、冻存后复苏活细胞百分率。结果显示，3例融合细胞的融合率分别为66.84%、74.43%、76.55%，融合细胞经DMSO和甘油冻存后复苏活细胞百分率分别为95%、97%。研究表明，人细胞融合肝癌疫苗具有很高的融合率和冻存后复苏活细胞百分率，便于制备及储存，适合临床应用。     

双基因导入在大鼠乳腺癌细胞内的共表达

目的观察携带单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV—TK)、共刺激因子(B7)基因联合在大鼠乳腺癌细胞的共表达。方法应用基因重组技术。分别构建携带含TK、B7基因的重组GcTKpB7SN，GepB7SN、GeTKpSN逆转录病毒载体．重组载体经包装以病毒上清液感染SHZ一88大鼠乳腺癌细胞，而后进行G418抗性克隆计效，流式细胞、原位细胞杂交检测B17、TK基因表达。结果转染重组GeTKpB7SN、GepB7SN基因的腺癌细胞经泷式细胞仅检测表明有B7基因表达；原位细胞杂交对转染重组GeTKpB7SN、GeTKpSN基因乳腺癌细胞能观察到TK基因表达。结论经逆转录病毒载体介导外源性自杀基因和共稠激因子能在大鼠乳腺癌细胞内共表达。     

原发性肝癌局部细胞和体液免疫反应

近年来,有关原发性肝癌免疫反应研究的报道日渐增多。但这些研究均为动物或体外间接试验。只能反映出肝癌病人全身免疫功能的一般概貌,对宿主抗肿瘤免疫在体内对肿瘤的直接作用则了解甚少。最近有人提出肿瘤局部免疫概念,认为局部免疫直接代表宿主抗肿瘤免疫力。为全面了解肝癌病人免疫功能的变化及其临床意义,进一步探索抗肝癌综合治疗,我们对不同病期的原发性肝癌局部细胞和体液免疫反应进行了较全面研究。     

两个新的人Flt3配体差异剪接体的克隆

目的:寻找新的人Flt3配体(hFL)的差异剪接体.方法:从健康志愿者外周血中分离单个核细胞,一步法提取总RNA,逆转录成cDNA,应用胞外区特异性引物PCR扩增hFL的胞外区并克隆至真核表达质粒,进行序列测定分析.结果:序列分析发现了两个新的hFL的差异剪接体,均发生在重要的第5外显子功能域,分别在434 bp处有一个胞嘧啶的插入和在426～478 bp之间缺失了53个bp.结论:hFL存在两个新的差异剪接体,此项发现为进一步的功能研究提供了基础.     

Clinical Study on General lmmunotherapy of Hepatocellular Carcinoma

In the present study,67 cases of hepatocellular carcinoma(HCC)were treated withimmunotherapy or immunochernotherapy.The results indicated that natural killer cell(NK)andantibody-dependent cytotoxicity cell(ADCC)activities and lymphocyte transformation rate(LTR)were significantly improved in vivo after treatment.The NK activity in tumor tissue,which showed aheavy immunosuppression,could also be enhanced and recovered to normal level after treatment withlymphokine mixture and 5-fluorouracil(5-FU).Immunity of host with postoperativeimmunochemotherapy was rapidly improved and recovery vate was high.The survival time in thesecases of unresectable tumors was obviously prolonged when a general immunotherapy was used.Immunochemotherapy can impr(?)ve immunity and inhibit selectively Ts cells as well as kill directly thetremor cells;therefore,it can play an important role in the treatment of hepatocellular carcinomaand in the prevention of its recurrence after operation.     

CTLA4-Ig对变应性接触性皮炎小鼠模型的治疗作用

目的 探讨B7／CD28共刺激通路阻断剂CTLA4－Ig对变应性接触性皮炎的作用。方法 建立小鼠二硝基氟苯（DNFB）变应性接触性皮炎模型，以不同剂量的CTLA4－Ig进行静脉注射，通过检测小鼠耳廓肿胀度观察其对DNFB和FITC刺激的反应，并观察CTLA4－Ig的长期疗效，同时对治疗后的小鼠脾细胞进行体外淋巴细胞增殖实验。结果 CTLA4－Ig有明显的治疗作用，DNFB变应性接触性皮炎小鼠经治疗耳廓肿胀抑制率最高达69．7％，而且治疗的小鼠在激发后的14d用DNFB再刺激能产生无应答反应，但对FITC的再刺激表现为耳廓肿胀明显，过继转移CTLA4－Ig治疗小鼠的淋巴细胞能诱导受体鼠对DNFB的刺激产生特异性免疫耐受。结论 应用B7／CD28共刺激通路阻断剂CTLA4－Ig融合蛋白能有效地抑制接触性超敏反应，为临床治疗Ⅳ型变态反应性皮肤病如湿疹等提供一种新的可能的治疗策略。     

端粒酶逆转录酶基因启动子的克隆及其转录活性的检测

端粒酶是一种依赖RNA的DNA聚合酶,催化合成端粒的DNA重复序列,并引导端粒添加到染色体的尾端,对维持染色体的长度、调节细胞增殖和凋亡起重要作用[1]。正常人的体细胞中通常检测不到端粒酶的活性,而约90％的肿瘤细胞的端粒酶活性却大大增强[2]。因此,端粒酶是肿瘤治疗的一个很有吸引力的靶子。端粒酶的核心结构包括RNA和具有逆转录酶活性的催化蛋白(telomerase reverse transcrip-tase,TERT)。业已证明,TERT是决定端粒酶活性的主要因素[3,4]。本研究通过PCR的方法克隆了TERT基因的启动子,并鉴定其在各种肿瘤细胞和正常细胞中的转录活性。     

肝癌特异性细胞毒 T 淋巴细胞的实验及临床研究

诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＴＳ－ＣＴＬｓ），观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其抗肝癌术后复发的临床应用价值。方法：用细胞因子体外短期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８单抗共刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化并随访其术后复发情况。结果：体外研究表明，肝癌细胞经ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＩ类分子，ＩＣＡＭ－１及Ｂ７分子的表达增高，用此细胞辅以ＣＤ２８单抗刺激诱导产生的ＴＳ－ＣＴＬｓ体现了高度的对自体肝癌的杀伤活性及特异性，其杀伤活性由ＴＣＲ－ＣＤ３复合物、ＣＤ８、ＬＦＡ－１、ＩＣＡＭ－１及ＭＨＣＩ类分子所介导。体内研究的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬｓ对ＳＣＩＤ小鼠人肝癌模型具有显著的抑瘤作用。１２例初步临床应用的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬ对于提高机体的Ｔ细胞免疫功能，对于预防肝癌术后复发均具有良好作用，值得进一步深入研究和应用。结论：ＴＳ－ＣＴＬｓ作为一种新的肿瘤特异性免疫治疗方法可望进一步提高肝癌和其它实体肿瘤的外科综合治疗水平。     

实时三维超声在评价人工机械瓣功能中的应用

目的在二维（2D）基础上应用三维实时超声心动图（RT-3DE）,探讨RT-3DE在评价人工瓣功能方面的临床应用价值。方法应用PhilipsIE33型彩色多普勒超声诊断仪,对23例受检者进行了实时三维超声心动图检查,其中二尖瓣位18例,主动脉瓣位5例。结果23例人工瓣均获得较清晰的三维图像。20例人工瓣功能正常。3例功能异常,其中2例为人工瓣瓣周漏,另有1例为二尖瓣位人工瓣血栓导致梗阻。结论RT-3DE在2DE基础上,可获得更丰富的空间信息,可以对2DE做出有益的补充。     

肝癌患者外周血和癌组织中T细胞亚群NK、ADCC效应变化及其相关性研究

目前,在肿瘤学研究中已注意到宿主对肿瘤能够产生不同形式的免疫反应,其中淋巴细胞、NK细胞发挥着重要作用,晚近资料亦表明肿瘤局部免疫反应直接反映机体抗肿瘤免疫功能状态。但迄今有关肝癌的研究不多。尤其对宿主外周血和癌组织中细胞免疫反应变化规律和相关性研究尚未见报道。为了进一步探讨宿主免疫功能变化对肝癌发展扩散的影响和寻找能够反映宿主免疫状态的敏感指标,我们对64例肝细胞癌(HCC)病人进行了研究。