氨基甙类药引致急性肾功能衰竭6例临床分析

治疗量的氨基甙类抗生素常可致急性肾功能衰竭,肾泌尿功能急剧降低,严重者(如肾皮质坏死)24小时尿量可减少到100ml以下;体内代谢产物不能排出,水、电解质代谢和酸碱平衡失调,产生一系列临床综合征。据近年观察,有1/3或更多的病例无少尿现象,但尿呈等张,比重固定在1.010-1.016,血尿素氮、肌酐仍每日升高。本院自1987-1989年曾收治6例由庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉     

Flt3配体修饰小鼠肝癌疫苗的制备及其体内抗肿瘤活性观察

目的:以小鼠Flt3配体(murine flt3 ligand, mFL)的重组腺病毒载体(AdmFL)体外感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6制备肝癌疫苗,并观察其体内抗肿瘤活性.方法:腺病毒载体体外感染Hepa1-6细胞,48 h后通过载体所携带的绿色荧光蛋白(GFP)的表达检测感染的效率;并用ELISA方法检测第0、2、4、6、8天培养上清中mFL的表达量;每天进行细胞计数(连续14 d),观察细胞的体外生长曲线;取5×106个修饰后的Hepa1-6细胞接种C57BL/6小鼠,4周后于原接种部位的对侧再接种2×106个野生型Hepa1-6或EL4细胞.结果:AdmFL能有效感染靶细胞Hepa1-6,培养上清中mFL表达量在第2天最高,达到(71.1±6.3) ng/ml,感染后Hepa1-6的体外生长未受到明显抑制;修饰后Hepa1-6细胞的体内成瘤性下降;4周后再接种Hepa1-6细胞,肿瘤生长速度明显降低;而再接种的EL4细胞呈渐进性生长,与对照组相比无显著差异.结论:腺病毒介导的Flt3配体基因修饰后的肝癌细胞的体内成瘤性下降,并能激发特异性免疫保护反应,是有效的肝癌疫苗.     

两个新的人Flt3配体差异剪接体的克隆

目的:寻找新的人Flt3配体(hFL)的差异剪接体.方法:从健康志愿者外周血中分离单个核细胞,一步法提取总RNA,逆转录成cDNA,应用胞外区特异性引物PCR扩增hFL的胞外区并克隆至真核表达质粒,进行序列测定分析.结果:序列分析发现了两个新的hFL的差异剪接体,均发生在重要的第5外显子功能域,分别在434 bp处有一个胞嘧啶的插入和在426～478 bp之间缺失了53个bp.结论:hFL存在两个新的差异剪接体,此项发现为进一步的功能研究提供了基础.     

应用细菌重组系统构建小鼠Flt3配体的重组腺病毒及其在肝癌细胞中的表达

目的 构建携带小鼠Flt3配体（murine flt3 ligand,mFL)的重组腺病毒载体并检测它的感染后的小鼠肝癌细胞中的表达。为肝癌基因治疗提供实验基础。方法 PCR扩增含有mFL的质粒,应用高效细菌内同源重组系统构建携带mFL的重组腺病毒,感染小鼠肝癌细胞株Hepal-6,一步法提取细胞总RNA,RT-PCR检测mFL的表达。结果 构建了携带mFL的重组腺病毒,并在感染后的Hepal-6细胞中检测到了mFL的mRNA。结论 应用该细菌重组系统成功地构建了携带mFL的重组腺病毒载体。为下一步的基因治疗研究奠定了基础。     

趋化因子巨噬细胞炎性蛋白-1α基因和B7-1基因共转染诱导大鼠的抗乳腺癌免疫效应

目的观察共转染巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-α）和B7-1诱导免疫应答的能力和抗乳腺癌免疫治疗的作用。方法7d龄SD大鼠接种乳腺癌细胞后，每天观察有无肿瘤形成；转基因细胞接种荷瘤SD大鼠，观察肿瘤体积的变化及生存期；流式细胞仪检测外周血T细胞亚型，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测白细胞介素（IL）-2及1-干扰素（IFN-1）的含量。结果SHZ-88、B7-1、MIP-α和MIP-α＋B7-1细胞接种10d后致瘤性分别为100％、30％、20％和0；荷瘤大鼠的生存天数分别为53．404±1．14、63．804±1．64、64．204±1．92及（89．004±2.55）d及外周血的CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋比值、IL-2及IFN-1的含量，MIP-1d＋B7-1组均高于其它组（P〈0．05）；接种14、28及40d后，MIP-1α＋B7-1组大鼠的肿瘤体积均小于其它组（P〈0．05）。肿瘤中心或对侧腋窝接种肿瘤细胞，诱导的抗肿瘤效应差异无统计学意义（P〉0．05）。结论共转染MIP-1α和B7-1，可产生协同抗乳腺癌效应。     

ISH检测Y染色体探寻诱癌大鼠原位肝移植后肝癌复发来源

目的探寻肝细胞癌复发的细胞来源。方法100ppm二乙基亚硝胺水溶液饲喂雄性SD大鼠诱发肝癌后，健康雌性SD大鼠作为供体对其行原位肝移植，术后移植肝内肝癌复发。大鼠Sry基因序列作模板，PCR方法制备能特异性与大鼠Y染色体结合的地高辛DNA探针，原位杂交的方法检测肝内复发肝癌细胞核中的Y染色体。病肝肝门部作病理切片检查。结果雌性移植肝内复发的肝癌细胞检测到Y染色体。病肝肝门部病理检查未发现癌细胞侵犯。结论受体血液循环中的癌细胞回巢至移植肝可能肝癌复发的细胞来源；异性个体问肝癌肝移植后可以通过ISH检查复发肝癌细胞中的Y染色体来确定复发肝癌细胞来源。     

胃癌多药耐药细胞端粒酶活性变化及其机制探讨

目的：探讨人胃腺癌细胞系SGC7901及其多药耐药亚系SGC7901／VCR中端粒酶活性变化及其机制，为胃癌多药耐药机制研究提供新靶点。方法：采用TRAP银染方法检测SGC7901和SGC7901／VCR中端粒酶的活性；应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测SGC7901和SGC7901／VCR中端粒酶hTERT、Madl及c—myctuRNA的表达；将hTERT启动子构建的报告基因质粒（pGL3B—TRTP），转染入SGC7901和SGC7901／VCR中，应用双荧光素酶报告基因检测系统（Dual—Luciferasereporterassaysystem）检测端粒酶hTERT启动子的活性。结果：SGC7901／VCR细胞中的端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达均显著高于SGC7901细胞，且SGC7901／VCR中hTERT启动子的活性显著高于SGC7901，在SGC7901／VCR中捡测到c—mycmRNA的表达，但未检测到MadlmRNA的表达，而在SGC7901细胞中分别检测到MadlmRNA和c—mycmRNA的表达，且SGC7901细胞中c—mycmRNA的表达也高于SGC7901／VCR。结论：端粒酶活性及端粒酶hTERT转录水平升高与胃癌细胞的多药耐药性密切相关，转录因子Madl／c—myc的表达高低是其作用机制之一。     

瘤内注射携带Flt3配体的重组腺病毒治疗小鼠肝癌

目的　观察瘤体内注射携带小鼠Flt3配体 (FL)基因的重组腺病毒载体对小鼠肝癌的治疗效果。方法　小鼠肝癌细胞株Hepa1 6皮下接种 ,建立小鼠肝癌模型 ,肿瘤局部分别单次注射 1× 10 9表达形成单位 (efu)的Flt3配体重组腺病毒、空载体对照和磷酸盐缓冲液 (PBS) ,观察肿瘤大小和小鼠生存期 ;3 8d后 ,再接种Hepa1 6细胞或EL4细胞对照于肿瘤消退小鼠原接种部位的对侧 ,观察肿瘤大小。结果　瘤体内注射Flt3配体重组腺病毒导致 90 %的小鼠肿瘤消退 ,并延长小鼠生存期 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 0 2 ) ;再接种Hepa1 6细胞于肿瘤消退小鼠 ,未见肿瘤生长 ,而再接种的EL4细胞呈渐进性生长 ,与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　腺病毒介导的小鼠Flt3配体的基因治疗导致肿瘤消退 ,并能激发特异性免疫保护反应。     

肝癌组织中雌激素受体基因启动子甲基化及临床研究

目的：研究原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中ER基因启动子甲基化修饰与临床病理特征间的关系,同时观察5-杂氮胞苷对ER mRNA表达的影响.方法：分别采用MSP和RT-PCR方法检测30例HCC及癌旁组织中ER基因启动子甲基化修饰状况及ER mRNA的表达状况,并用5-杂氮胞苷处理肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2.结果：30例HCC组织中ER启动子甲基化修饰阳性率为60.0% （18/30）,而30例癌旁组织中ER基因启动子甲基化修饰阳性率为30.0%（9/30）,两者差异有统计学意义,χ^2=5.46,P= 0.037.30例HCC组织中ER mRNA阳性表达12例（40.0%）,其中甲基化组织和未甲基化组织中ER mRNA表达率分别为22.2%和66.7%.ER启动子甲基化修饰与mRNA表达呈负性相关,χ^2=5.93,P=0.024.同时,ER启动子区甲基化修饰与肝癌患者血清AFP含量增高呈正相关,χ^2=12.13,P=0.001.细胞培养结果提示低浓度的5-杂氮胞苷可诱导肝癌细胞系ER mRNA重新表达.结论：肝癌组织中ER启动子甲基化修饰是个频繁事件,因此沉默ER基因的表达有可能促进肝癌的发展.